高效液相色谱柱柱效测定

六、思考题
1．试比较本实验利用不同物质计算出的理论塔板数有何不同，为什么？ 2．紫外光度检测器是否适用于检测所有有机化合物，为什么？
n 5.54(
或
tR 2 ) W1/2
n 16(
tR 2 ) W
式中：n-理论塔板数；tR 为组分的保留时间；W1/2-色谱峰半高宽度；W-色谱峰底宽
三、仪器和试剂
1. 2. 3. 仪器：Agilent 1100 高效液相色谱仪（紫外检测器） 微量进样器 试剂：甲苯（30 mg/L 甲醇溶液） ；苯甲酸钠（30mg/L 水溶液）
四、实验条件
1. 2. 3. 4. 色谱柱：ZORBAX SB-C18（4.6mm ID× 15cm，5μm） 流动相：甲醇:水（80:20） ；流速：1.0 ml/min 紫外光度检测器：波长 254nm 进样量：10 μl
五、实验步骤
1. 2. 3. 4. 5. 6. 依次打开仪器和 PC，打开色谱工作站，编辑方法 待基线平衡后即可进样 分别吸取 10μl 甲苯和苯甲酸钠溶液进样 用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据 冲洗色谱柱，关机 根据理论塔板数公式，分别用甲苯和苯甲酸钠计算其理论塔板数
ห้องสมุดไป่ตู้高效液相色谱柱柱效测定
一、实验目的
1． 了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 2． 学习高效液相色谱仪的使用 3． 学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法
二、基本原理
高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法。 当混合物随流动相流经色谱柱 时，就会与固定相及流动相发生作用。由于混合物中各组分在理化性质和结构上的差异，与 固定相及流动相间产生的作用力不同， 因此在同一推动力的作用下， 不同组分在固定相滞留 时间长短不同，随流动相先后从色谱柱流出，从而达到分离。配以适当的检测器可对不同组 分进行定性和定量分析。 色谱柱柱效评价可根据单位柱长的理论塔板数，即：