人超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒
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SOD让人延缓衰老不再是梦
——访四平华科生物技术有限责任公司博士生导师冀清发教授
SOD让人延缓衰老不再是梦
——访四平华科生物技术有限责任公司博士生导师冀清发教授
2010年10月16日的《科技日报》头版头条报导:“四平华科生物技术有限责任公司,应用现代生物技术,能大批量生产重组超氧化物歧化酶(SOD),填补了国内不能生产重组SOD的空白。”为此本报记者采访了四平华科生物技术有限责任公司的冀清发教授。
记者:请您介绍一下本项目的重大意义。
冀教授:正如《科技日报》、中央四频道所报道,现在医学证明:SOD能有效清除机体内的自由基、提高人体免疫力、有效延缓衰老、有效预防各种疾病发生,提高生命质量。补充SOD就可以达到上述目的,并且SOD可广泛应用在药品、保健品、饮品、酒品、化妆品等产品中,对人体健康具有重大意义,同时将产生巨大社会效应和经济效益。
1969年,美国Mccord和Friduich两位科学家从牛血中发现并提取出一种微蓝色粉末,把它定义为超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,简写SOD)。
几十年以来,SOD在延缓衰老,疾病治疗中获得重大发展和应用,被称为人类健康保护神。美国几乎所有的生物技术开发中心都把SOD作为重点开发生物制药及保健品。1994年欧洲出现疯牛病及禽流感,由于从动物血中提取SOD无法清除各种病毒,以及人畜异源污染等原因,欧洲在1999年颁布法令:禁止动物血SOD用于人体。SOD研发停止了十余年。
近年,日、美、德等少数国家用现代生物重组技术制备人源SOD,国际公认重组人SOD无外源污染,无免疫排斥,无蛋白种属差异,就同重组人胰岛素一样,最适于人类。这不仅是SOD领域具有里程碑意义的成果,也是人类健康的福音。随着人们对SOD的认知和对SOD产品应用,人类的延缓衰老,长命百岁,将成为现实,不再是梦想。
记者:冀教授,请您详细介绍一下SOD对人体健康长寿的功效。
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定办法之羊若含玉创作
一、 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法)
1、试剂的配制
磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):
A母液磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g;
B母液磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量.
分离用蒸馏水定容到1000ml.
0.05mol/L PBS(pH7.8)的配制:分离取A母液(Na2HPO4)
228.75ml,B母液(NaH2PO4) 21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml.参加10gPVP(聚乙烯吡咯烷酮)
参考文献:李合生主编:,2000:267~268.
(2)130mmol/L甲硫氨酸溶液:取g Met用磷酸缓冲液(pH7.8)定容至100ml.网上说定容到100ML我也不懂.奉求
(3)100μmol/L EDTA-Na2溶液:取0.03721g EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml;
(4)10075g核黄素用蒸馏水定容至100ml,避光保管,随用随配,并稀释10倍
(5)750μmol/L氮蓝四唑(NBT)溶液:称取0.06133g NBT用磷酸缓冲液定容至100ml避光保管;
酶液制备:取一定部位的植物叶片(视需要定,去叶脉)于预冷的研钵中,加2ml磷酸缓冲液在冰浴下研磨成浆,加缓冲液使终体积为10ml.取5ml于10000r/min下离心10min,上清液即为SOD粗提液.
提取酶液时如何保管;如果没有测完的需要放在4℃的冰箱里.
2、酶活性测定
2.显色反响取试管(要求透明度好)5支,3支为样品测定管,1支为对比管,别的1支作为空白,按表39-1参加各溶液.
混匀后将空白管置暗处,其它各管于4000lx日光灯下反响20min(要求各管受光情况一致,反响室的温度高时时间可适当缩短,温度低时时间可适当延长).
表39-1 各溶液参加量
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
一、 超氧化物歧化酶(SOD)活性测定(氮蓝四唑光化还原法)
1、试剂的配制
(1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):
A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O(分子量358.14)71.7g;
B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分子量156.01)31.2g。
分别用蒸馏水定容到1000ml。
0.05mol/L PBS(pH7.8)的配制:分别取A母液(Na2HPO4) 228.75ml,B母液(NaH2PO4)
21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。
参考文献:李合生主编:植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社,2000:267~268。
(2)14.5mM甲硫氨酸溶液:取2.1637g Met用磷酸缓冲液(pH7.8)定容至1000ml。
(3)30μM EDTA-Na2溶液:取0.001gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至100ml。
(4)60μM核黄素溶液:取0.0023g核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml,避光保存。
(5)2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液:取0.1840g NBT用PBS定容至100ml,避光保存。
酶液制备:取0.2g(可视情况调整)样品(新鲜叶片或根系)洗净后置于预冷的研钵中,加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液(pH7.8)在冰浴上研磨成匀浆,转入离心管中在4℃、12000g下离心20min,上清液即为酶液。
2、酶活性测定
(1)反应混合液配制(以60个样为准):分别取Met溶液162ml,EDTA-Na2溶液0.6ml,磷酸缓冲液5.4ml,NBT溶液6ml,核黄素溶液6ml,混合后摇匀;
(2)分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中
(3)将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min;
超氧化物岐化酶作用
超氧化物歧化酶(SOD)是一种酶类抗氧化剂,能够催化超氧自由基(O₂⁻)的歧化反应,将其转化为过氧化氢(H₂O₂)和氧气(O₂)。SOD 在生物体内具有多种重要的作用,包括:
1. 抗氧化作用:SOD 能够清除体内产生的超氧自由基,减少自由基对细胞的损伤,从而保护细胞免受氧化应激的损害。
2. 抗炎作用:SOD 能够抑制炎症反应,减少炎症细胞的产生和活性,从而减轻炎症对机体的损伤。
3. 抗衰老作用:SOD 能够延缓细胞的衰老过程,减少自由基对细胞膜、DNA 和蛋白质等生物大分子的损伤,从而延缓机体的衰老。
4. 保护心血管系统:SOD 能够减少自由基对心血管系统的损伤,降低心血管疾病的风险。
5. 提高免疫力:SOD 能够增强机体的免疫力,提高机体对病原体的抵抗力。
总之,SOD 是一种重要的生物活性物质,具有多种重要的生理功能,对于维持机体的健康和正常生理功能具有重要意义。