MTT法（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）检测细胞增殖曲线，研究对细胞存活的影响：
取对数生长期的细胞，经0.25％胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液计数，(共36－40ml培养液)→调整细胞浓度为5×103个细胞／ml，反复吹打使细胞均匀，接种于96孔培养板中，每孔100ul（细胞数为 500个细胞/孔）， 37℃，5%CO2培养箱孵育过夜后，36小时后弃原培养液，以无血清培养基清洗2遍，分组加药，加入不同浓度药液（0、10、100、1000、10000）培养液100ul(入无血清培养基中)，每种浓度设立8个平行对照（商），并设正常对照（无药对照）及空白对照（不加细胞只加培养液，其他步骤一样，最后比色调零用），置正常培养条件下培养。
→加药后的第24、48、72、96、120、144h分别取出一板，弃去培养液，每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，继续培养4小时，
→小心吸弃孔内上清培养液，每孔加入DMSO 100－200μl（白），振荡摇匀，10分钟充分溶解结晶物，
→室温静置20－30分钟后选择490nm（570nm白、张），在酶联免疫检测仪（96孔酶标仪）上测定各孔吸光度（OD）值，并计算细胞存活率，即：
细胞存活率=试验组吸光度值/对照组吸光度值×100%
1．碘化丙啶（PI）：用PBS溶为1mg/ml，4℃避光保存。
2. MTT溶液(5mg/ml)：50mgMTT粉剂溶于10mlPBS中，以孔径为0.22um滤器过滤除菌。
呵呵以前做过的，大概的实验方法如下，不知道对你是否有用
1）收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，每孔180μl，3000-10000个/孔。
2）置37℃、5%CO2温箱培养使细胞贴壁，培养6-24小时。
3）加入待筛样品20μl，继续培养44小时。
4）小心吸去上清，加入80μl新鲜RPMI 1640培养液，再加入20 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。
MTT
原理：MTT是一种检测细胞功能的方法。细胞在活化增值的过程中，线粒体的能量代谢能够把MTT代谢为蓝紫色的甲臜，甲臜沉积于细胞内或细胞周围，形成甲臜的量与细胞活化的程度成正比，通过盐酸异丙醇或其他溶剂溶解甲臜，用酶标仪测溶液的光密度就可以反映甲臜的量并从而判断细胞活化增值的程度。
步骤：
1、培养好细胞点板。
养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上检索细胞的培养信息，这个网站上的培养方法是标准培养方法。当然可以根据自己实验要求进行修改。由于细胞计数很繁琐，点板时的细胞浓度是最难掌握的，这一点笔者的心得如下：
自己先将细胞养一段时间，大概了解细胞的增殖情况，在MTT检测时实际上要求细胞大概能长满96-孔板的80-90%，如果打算养48小时就检测，根据细胞的生长情况反推点板时的细胞浓度状况。这时可以将细胞不进行计数，将消化好的细胞混匀后（可能是10 ml）直接在一个废弃（最好进行过无菌处理）的96孔板中依次加入180、100、50微升细胞，将细胞放置几分钟就会沉到板底了，这时在显微镜下观察，推测哪个孔的细胞48 h能基本长满板底，假设50 微升的孔比较合适，而点板时没孔需点200 微升，那么就将细胞浓度再稀释4倍就可以正式点板了，这时顺便将细胞进行计数（因为实验记录要求写啊）。这样就OK了！如果细胞还太多，将细胞稀释4倍后再重复以上操作。注意：不要过分信赖细胞计数，因为细胞计数的取样量为20 微升左右，由于颗粒的分布不均匀，代表性是很差的。建议：细胞计数一定要会，但不要完全依赖它。
点板时一定要将细胞消化成单个细胞，而且一定要混匀，最好用排枪，否则，MTT的SD会狂大！
2、点板布局。
其实这一点很多人不懈一顾。如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了，有些人称之为“边缘效应”这些孔的SD也会狂大，既然如此，不如不用。
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490 nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等，它的特点是灵敏度高、经济。
学术术语来源---
Bio-gide胶原膜体外复合培养犬骨髓间充质干细胞的软骨分化
文章亮点：
1 实验先采用全骨髓血培养法培养犬骨髓间充质干细胞，继而采用贴壁筛选纯化，方法简便，所获细胞数量及纯度满意，并在体外成功诱导分化出软骨细胞。
2 实验所采用的细胞支架材料为瑞士Geistlich公司生产Bio-gide胶原膜，这是一种由Ⅰ型和Ⅲ型胶原组成复合材料，分为致密层和疏松层，种子细胞接种在胶原膜的较为粗糙的疏松层，而光滑的致密层在体内实验中朝向关节腔，有利于骨髓间充质干细胞的黏附、生长及向软骨细胞的分化，三维立体培养有助于诱导生成的软骨细胞维持表型。
3 实验显示Bio-gide胶原膜与骨髓间充质干细胞复合培养有良好的生物相容性，但能否体内构建组织工程软骨组织，促进软骨细胞的生长，缺损的软骨组织得到完整的修复，尚待进一步研究。
关键词：
生物材料；组织工程软骨材料；膜生物材料；骨髓间充质干细胞；Bio-gide胶原膜；组织工程；股骨头坏死；软骨缺损；种子细胞；国家科学自然基金
摘要
背景：应用组织工程方法修复股骨头坏死后的软骨损伤应解决的2个关键因素是种子细胞和支架材料。
目的：探讨Bio-gide胶原膜体外与犬骨髓间充质干细胞复合成软骨的可行性。
方法：采用全骨髓血离心法结合贴壁筛选法体外分离培养比格犬骨髓间充质干细胞，观察细胞形态学变化，以细胞表面抗原进行鉴定。采用成软骨诱导培养基诱导第3代骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化作为实验组，设置普通培养基培养对照组，MTT比色法测试软骨细胞生长曲线，并行Ⅱ型胶原免疫组织化学和甲苯胺蓝染色等生物学鉴定。将第3代骨髓间充质干细胞与Bio-gide胶原膜体外复合培养行倒置相差显微镜、扫描电镜观察。
细胞增殖检测试剂盒（MTS）说明书
产品简介：MTS是一个基于光吸收检测的均相非标记细胞活力测定试剂。一步操作，可用于细胞增殖和毒性分析，方法
简便而准确。该试剂可被活细胞还原为具有高度水溶性的，可在490nm处检测的甲臜染料，甲臜的生成量与活细
胞的数量和活力成正比。
试剂的优点1、结果准确，重现性好:试剂不影响细胞活力，显色产物直接溶解于培养液，直接测定OD值即可准确反应细胞
活力。2、操作省时简单:试剂即开即用，只需一步操作，即可检测。无需额外清洗，加DMSO等步骤，重现性好。
3、安全性好:不含放射性同位素和有机溶剂，使用安全。
4、灵敏度高:灵敏度高于MTT、XTT、CCK-8等方法。
使用方法:*以下操作步骤针对96孔培养板培养每孔100μl细胞，若使用96孔外的培养板，试剂用量等比例增减。
1、取出MTS试剂于室温或37℃溶解。
2、于培养有100μl细胞/孔的96孔培养板中加入10μlMTS试剂。
3、将96孔培养板放回培养箱，37℃孵育1～4小时。
*如孵育后需立即检测，请跳至步骤4；如稍后检测，每孔加入25μl的20%SDS溶液，避光保存，18小时内检测。
4、用酶标仪于490nm处测定OD值。
结果分析将各测试孔的OD值减去对照孔或调零孔OD值。各平行孔的OD值取平均数。
细胞活力%=加药细胞组OD−空白组OD
对照细胞组OD−空白组OD×100%
注意事项：1、试剂加入后轻轻振摇培养板，使MTS试剂与培养基充分混匀。
2、试剂加入后培养时间根据细胞种类的不同和每孔细胞数量的多少而异。对于贴壁细胞，加入MTS的培养时间
一般为1～4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度（根据细胞种类而定）。与贴壁细胞相比，悬
浮细胞较难显色。对于悬浮细胞，在加入MTS培养1～4小时后，可先从培养箱中取出，目测染色程度或用酶标
仪测定决定。白细胞较难显色，因此需要较长的MTS反应时间或增加细胞数量（105个细胞/孔）。若显色困难，可
