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树突状细胞的特性及应用172河北医药2004年2月第26卷第—HebeiMedicalJo—urnal,Feb2004,—V ol26—,No.2树突状细胞的特性及应用张庆九李春晖焦保华树突状细胞(Dendriticcell,I)C)是机体免疫系统中最强有力的一种专职的抗原呈递细胞(APC),在免疫应答的启动,调控上起着关键的作用LII.现代抗肿瘤免疫疗法利用Dc负载肿瘤相关抗原(T从)制成的肿瘤疫苗(瘤苗),在转移性前列腺癌,恶性黑色素瘤,多发性骨髓瘤和慢性髓性白血病(CML)等几种恶性肿瘤的治疗上已取得喜人的效果.现对树突状细胞的生物特性,来源,抗瘤机制,肿瘤疫苗疗法等进行综述1Dc生物学特性IX;最初是Steirmlan和Cohn等1973年从小鼠脾组织中分离发现的,因其形态具有树突样或伪足样突起而命名.目前一致认为,凡具有典型的树突状形态,膜表面高表达MttCⅡ类分子,能移行至淋巴器官和刺激初始型T细胞增殖活化,并具有一些相对特异性表面标志的一类细胞,方能称之为DE,DE广泛分布于全身各脏器,数量极微,约占外周血白细胞总数的1%,DC的前体细胞由骨髓进入外周血,再分布到全身各组织.13t2主要分为髓系D(=(myeloiddrivedDC)和淋巴系DC(1ymphoidrelatedoc)两大类.成熟的DC表现出6个主要特征:(1)细胞形态不规则,表面有许多膜样或树突佯突起;(2)细胞表面具有丰富的有助于抗原提呈的分子,如持续,高水平的表达MItCI类,Ⅱ类分子,共刺激分子cD帅(.)和cD86(13,:),细胞粘附分子CD(LFAI),CDm,C(ICA),C(ICAM.),co,8(LFA])和CD.∞(ICAM2),以及淋巴细胞功能相关抗原LFA1,LFA1等.人血中的I)C前体开始表达c.:,但随着成熟渐渐失去表达,而粘附分子,共刺激分子,MHC抗原随着成熟而表达增加J.活化后,特别是cD柏L活化后,c,c上调.在成熟中,cD86出现早,而cD町出现晚,血中DC前体几乎不能检测到..(3)在混合淋巴细胞反应中,既能激活MHC相同的自身反应性T细胞,又能激活MHC不同的同种反应性T细胞,而其最大特点是能够显着刺激初始型T细胞(NaiveTcel1)增殖并建立初级免疫应答.(4)具有向局部淋巴细胞T细胞区迁移的能力.(5)DC激发T细胞增殖及抗原提呈能力是巨噬细胞和B细胞的100～1000倍b1.(6)新近发现的D(:SIGN(DCslx~cificICAM3grabbingnoninten)分子在启动静息T细胞免疫反应中的作用引起人们的注意,Dc SIGN是DC特异表达的,第一个被鉴定的DC限制性分子,介导Dc与静息T细胞的强烈粘附从而发挥I)C诱导的T细胞增殖作用.另外,在体内外,J)C具有与其他APC不同的功能特征,可递呈抗原给静息T细胞的能力是I)(:最重要的功能之一. 其能力是其他APc的10—100倍.正是由于DC的上述特征使作者单位:050000~aI_lgN科大学第二医院神经外科其成为体内抗原提呈能力最强的AP【=,也是唯一一类可直接活化静息T细胞的APE.2树突状细胞的来源近几年来,随着人们在DC的起源,分类,摄取和加工处理抗原的机制以及引起DC迁移和成熟的信号传导等领域研究的深入,有关人DC大量培养和扩增的方法日益成熟.目前,树突状细胞有三个来源:骨髓,外周血和新生儿脐带血.从骨髓中分离获得树突状细胞的CD互的祖系细胞,或从外周血或新生儿脐带血于体外经14d培养分化(在GMCSF和TNFa存在的情况下)成为成熟的CD,C跽,HIADR的树突状细胞;或者用外周血纯化的CD;单核细胞或粘附单核细胞在二种细胞因子(GMCSF和IL4或ILl3)的培养刺激下成为CD,c聪的未成熟树突状细胞,再经TNFa或(和)CL刺激形成成熟的树突状细胞.3树突状细胞抗肿瘤的分子机制研究证明J,树突状细胞与肿瘤的发生,发展具有以下密切关系.(1)以肿瘤抗原体外专一性地冲击致敏,激活功能最强的APC树突状细胞,可保证肿瘤抗原被有效摄取.(2)树突状细胞通过细胞表面高水平的MHCI,Ⅱ类分子呈递了丰富的肿瘤抗原肽,使相应的T细胞受体(TCR)被充分占据;同时,树突状细胞提供高水平的协同刺激分子B7..(cD),B7.:(cD86),cD的分子等,使T细胞被充分激活.(3)树突状细胞与T细胞结合后,可以大量分泌:,激发T细胞增殖,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)生成,主导了TH,型的免疫应答,有利于肿瘤细胞的清除.(4)树突状细胞还能分泌趋化因子(DCCCK),专一性地趋化初始型T细胞,通过促进T细胞聚集,增强对T细胞的激发.另外,肿瘤病人可以在中枢神经系统检测到T淋巴细胞和主要组织相容性抗原.采用细胞因子修饰的肿瘤细胞瘤苗能够产生抗中枢神经肿瘤的免疫反应,因此免疫反应可以介入中枢神经系统疾病.4关于各种类型的树突状细胞疫苗'目前已研究了各种形式肿瘤抗原体外冲击致敏树突状细胞制备的疫苗.(1)细胞性肿瘤抗原:经放射线照射灭活的肿瘤细胞,肿瘤细胞反复冻融上清或肿瘤细胞冻融后膜碎片或超声破碎方法制备肿瘤细胞的蛋白提取物直接体内免疫后都只产生极弱的抗肿瘤免疫效应,已极少作为肿瘤疫苗单独用于临床.(2)肿瘤抗原多肽:应用经弱酸洗脱肿瘤细胞表面的MHCI类抗原多肽冲击树突状细胞,其靶向性更好,肿瘤抗原浓度更高,可产生"冲击致敏"的效应,促进T细胞有效激活.(3)肿瘤抗原基因:将肿瘤抗原基因转移进树突状细胞,体内诱发特异性抗肿瘤免疫功能.其方式有多种:用脂质体介导单纯疱疹病毒(Hsv)蛋白抗原编码基因冲击树突状细胞,或脂质体介导河北医2004年2月第26卷第2期HebeiMedicalJournal一,Feb2004,V ol26,No.2 酪氨酸酶基因转移入树突状细胞;用肿瘤细胞的RNA作为抗原冲击树突状细胞,或用低免疫原性肿瘤的RNA(总RNA或polyA+RNA)冲击树突状细胞,免疫接种后可诱导出强烈抗肿瘤免疫力;用腺病毒载体介导肿瘤抗原基因对成熟树突状细胞的转染;用黑色素瘤抗原基因质粒通过基因枪技术转染体外培养的树突状细胞等.(4)抗独特型抗体:抗独特型抗体是肿瘤抗原的内影像,可模拟肿瘤抗原被机体识别,激发针对肿瘤细胞的免疫功能.临床首例应用树突状细胞治疗肿瘤就是应用抗独特型抗体致敏树突状细胞来做为瘤苗.(5)与细胞因子联合使用:是体内介导TH.型应答的细胞因子,与抗原冲击的树突状细胞瘤苗联合应用于肿瘤治疗,收到更佳的抗癌效果.某些情况下甚至逆转由树突状细咆诱导的耐受.(6)肿瘤相关抗原和肿瘤特异性抗原:粒细胞,巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)可以促进树突状细胞的成熟,维持树突状细胞的存活.将GMCSF基因经腺病毒载体介导转入树突状细胞,具有更强的体内激发肿瘤特异性CTL的能力.用腺病毒将I基因转染树突状细胞,也可协同增强T细胞功能,促进机体的抗肿瘤效应.Fms样酪氨酸激酶Ⅲ(肿,酪氨酸激酶受体家族Ⅲ成员之一)配体(n凡L)也是一种细胞因子,能与树突状细胞或B细胞表面的受体结合,促进树突状细胞的成熟,故也有人应用肿L联合树突状细胞瘤苗增强抗肿瘤疗效".此外,曹雪涛等还将重组腺病毒介导的GMCSF基因转染的树突状细胞经肿瘤抗原冲击致敏后,与肿瘤细胞融合制备出免疫原性更强的新型瘤苗,他们还报道了肿瘤抗原多肽致敏的,淋巴细胞趋化因子基因修饰的树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫应答的实验结果.法国与意大利合作小组"发现,肿瘤抗原冲击的树突状细胞胞浆内形成许多包含抗原多肽的小体(exoc~omes或dexosomes).实际上,树突状细胞除了细胞间直接接触和通过分泌细胞因子起作用外,人和小鼠的树突状细胞均能分泌或外排exo~ome.s,这种小体中不含凋亡小体,胞浆膜或内质网组组等,表达MHCI,Ⅱ类分子和cDIi6,具抗原呈递能力,能在体外刺激抗原特异性cT细胞的增殖,因而有诱导T细胞免疫反应的功能.从树突状细胞上清分离和纯化这些小体给荷瘤小鼠皮下注射(5/*gexo—sor-麟)也诱导了极强的抗肿瘤效应,在体内诱导出高水平的cT1J,并能治愈荷瘤小鼠,提示作为无细胞体系诱导体内免疫功能的应用途径,eXOC~OIIIeS也可以说是一种新型的亚细胞成分的树突状细胞瘤苗.(7)直接应用Dc:将Dc在体外进行扩增后再回输体内,以求获得更多的CTL,这本身就是一种过继性免疫治疗,而且大多数肿瘤组织内浸润Dc的数量与肿瘤患者的预后直接相关,浸润DC多则预后好.5DC的输注途径和剂量输注途径早期D(=的输注途径多采用静脉注射.近年来,采用皮下,皮内,淋巴管内,瘤体内注射的方法得到了广泛的应用.目前,多数学者认为,皮内,瘤体内注射可能更有利于DC发挥其生物学功能.DC发挥其抗肿瘤免疫效应的基础是D(=负载肿瘤抗原后,能够迁移至T淋巴细胞富集的二级淋巴器官,从而激活抗肿瘤免疫反应.因此,DC的输注途径与其能否更好地发挥生物学功能密切相关.(1)静脉及淋巴管内注射:l73Mackensen等对七HC的静脉及淋巴管内注射进行了比较,作者用转移性恶性黑色素瘤患者外周血cD五造血干细胞来源的DC 经放射性标记后,静脉或淋巴管内注射,丫照相机全身拍照观察.发现DC经静脉注射后在肺内作短暂停留,最后定位于脾和肝脏7d以上:DC注入足背淋巴管内后,可迅速迁移至引流淋巴结并停留24h以上,实验说明淋巴管内注射与静脉注射相比,更有利于DC发挥其抗肿瘤作用.(2)真皮内注射:Thomas等则比较了多种DC的输注形式后,发现真皮内注射DC后,10min内就可见标记的DC迁移入引流淋巴结,4h后引流淋巴结显象最明显,证实真皮内注射可以使DC快速迁移至引流淋巴结且可以滞留较长时间,说明真皮内注射可能是DC疫苗抗肿瘤治疗的另一较佳输注途径.(3)瘤体内注射:目前,I)C疫苗抗肿瘤治疗临床试验,大都采用肿瘤细胞抗原肽,肿瘤细胞溶解物或凋亡的肿瘤细胞先体外致敏DE,然后回输体内.6树突细胞瘤苗的剂量和用法一般用的方案是:致敏树突状细胞制成1×1个细胞/0.5n1l,注射用细胞悬液,每次剂量为1×1个细胞,每周1次,连续用4周,然后间隔2周,再次接种以增强免疫,总接种量为5×1个树突状细胞.研究认为DC注射的细胞数量与肿瘤缓解的时间成正比.但是否细胞数量越高,治疗效果越好,有无平台效应,细胞数量多少为最佳尚需进一步研究.7展望树突状细胞加肿瘤抗原将会成为有效的肿瘤免疫基因治疗手段.由于DC疫苗能促进同种异体T细胞增殖的特性及其强大的抗原提呈功能,不仅能将抗原提呈给M/-ICⅡ类分子促进cDT细胞增殖,又能提呈给MHCI类分子促进c聪T细胞增殖,诱发机体强烈的细胞免疫应答;同时研究还发现,DC在体液免疫中也发挥重要作用,可直接参与调节B细胞的成熟和分化,刺激B细胞增殖产生大量的IsA和IgM,全面调动机体的抗肿瘤免疫力,在机体抵御恶性肿瘤中发挥重要作用.DC疫苗的初步临床试用也显示出了良好的疗效.该疗法可望成为肿瘤生物治疗的又一新兴手段.参考文献】gl,En~emanEG.Dendriticcellsincancerimmunotherapy.AnnReviro—munol,2000,18:245—273.●2TakamizawaM,RivasA,FagnoniF,eta1.Dendriticcellsthatprocessandpr一~-,entnominalantigenstonaiveTlymphoeytesalederivedfromCD2pre—cursol~.Jlnmaunol,1997,158:2134-2142.3ShortmanK.|]umetoration:dendriticcells:multiplesubLypes,multipleori—gins,multiplefunctic~ns.1nmaunolCellBoil,2000,78:161—165.4BarmhemauJ,BriereJ,CauxC,etaI.Immunologyofdendn'ticcells.A/lnul~.evlnrnunol,2OO0,18:767.8l1.5LevinD,ConstantS,PasqualiniT,eta】.Roleofdendriticcellsinthepriming ofCITlymphocytestopeptideantigeninvivo.Jlmmund,1993.151:6742.6St~rmtan.DC—SIGN:Aguidetos0fT1emysteriesofdentin'ticceils.Cells.2000,100:491494.7GeijtenbeekTBH,TorensmaR,V anVlletSJ,eta1.IdentificatonofDC.SIGN, anoveldendriticcellspecificICAMsreceptorthatsupportsprimaryimmuneres.Cell,2000,100:575-585.8ChenSR,AkSMF.TanimotoK,eta1.AbsenceofCPositivematureand activateddendriticcellsatc锄cernodulesfrompatients山bepatocellular carcinomarelevancetohepatocarcinogenesis.CancerLe~em,2000,148:49.174河~t,lN药2004年2月第26趁第—2lt~J—Hebe—iMedicalJo—urnal,Feb2004,V ol26,No.2,.9曹雪涛.树突状细胞基础与临床研究新进展.中国免疫学杂志,1998,14:161—167.1O孙劲旅,张锦.树突状细胞与肿瘤免疫研究进展.tf1国肿瘤I临床与康复,1998,5:80—82.11叶闻斐,秦慧莲,何球藻.兀与FI-1]及其在体外诱导树突状细胞增殖的作用.闷外医学免疫学分册,1998,21:74-76.12曹雪涛,叶天星.树突状细胞研究在免疫学中的意义及发展趋势.困外医学免疫学分册,1998,21:281,285.13QuahB,O'NeillliC.Review:the)p】ieationofdendriticcell—derivedexo—s(m1esintumourimmunotherapy.CancerBiotherRadiopharm,21300,159 185,194.14M~tckensenA.KrauseT,BlumU,eta1.Homingofintravenouslyandinira—lymphatica]lyinjectedhumandendriticcellsgeneratedinvitroncoilhe—matopoieticprogenitorcells.Cancerlmmunollmmunother,lI9,48:1l8一l】2.15l!aonmsR,ChambersM,BoytarR,eta1.Metastaticlesionsinthejoint一elatedthacuteinflammatoryarthritisafterdendriticcellimmunotherapyfor metastaticmelanoma.MelanomaRes.l999.9:474.481.树突状细胞在脑胶质瘤治疗中的应用李春晖张庆九焦保华胶质瘤的主动免疫治疗(activeimmtmotherapy)一直是胶质瘤治疗研究的热点,然而有关肿瘤的免疫逃避,肿瘤特异性抗原以及肿瘤治疗中免疫的合适方法,路径等都是研究者必须妥善解决的问题.树突状细胞(dendriticce]ls,DEs)是摄取,加工,递呈抗原的最重要的专职抗原递呈细胞(antigenpresentingcell, APC),它递呈抗原的能力最强.1DEs的获得1.1DEs的来源Ronani描述了将从化疗病人骨髓抑制期间的外周血中获取的单核细胞进行培养,得到大量的树突状细胞.从这种状态下获取的单核细胞其造血干细胞的比例较稳定状态下获取的单核细胞造血干细胞的比例高.Koch等…发现培养从外周血中纯化的人CD;造血干细胞可诱导细胞表型和功能特异性DEs,是DEs个体发育和成熟理论的主要突破.Caux等的报道与此有明显争议(是否DEs直接生成于早期造血干细胞或衍生于血单核细胞?)他们阐述了DCs两种不同的发展途径.当CD;造血=F细胞(来自于人脐带血)在GMCSF+TNF-a中培养5～7d后,:两种DEs前体出现:第一种前体由表达CD..和CD.缺失而确认,将成熟为DCs,并带有表皮郎罕氏细胞的特点(表达Birbeck颗粒滞后抗原和粘滞素).第二种前体,CD..一CD将成熟为CD+DEs(缺乏Birbeck颗粒滞后抗原和B粘滞素).而cD前体代表双潜能细胞,在有巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)诱导时可有不同的反应,成为类巨噬细胞.1.2D【的培养实验中应用的DEs主要通过培养骨髓细胞获得.骨髓细胞自股骨,胫骨中获得,在GM.CSF+II厂4或GM, CSF+a中培养,在第8天可见到大量具有DCs形态学特点的细胞集合体增生.每只小鼠培养DCs的产量大约为10×1 (GM—CSF+IL广4),6×1(GM—CSF+TNF—a)和5×lo'(GM—CSF). 流式细胞技术评价这些DEs的抗原表达,包括c,C,CD.(Mac一1),CDt8,cD-Io,cD8【】(B7),cI(B7.2),并指细胞抗原NLIX;.45和MT1C—I型,U型抗原.在GM—CSF+IIJ_4中培养的细作者单位:O5OOOO河北医科大学第二医院神经外科胞MHC,Ⅱ类分子和共刺激分子(costimulatorymolecules)岛_l,岛.2 的水平最高,而且是更加有效的同基因混合淋巴细胞反应刺激物.人DCs主要将从外周血中分离的单核细胞进行培养,其DEs培养结果与上述相同.2DEs的功能DCs是最有效的同种异体混合淋巴细胞反应刺激物.DEs可传递抗原给T,B淋巴细胞,DEs对外生抗原有吞饮作用.在细胞内,抗原被加工成短肽,递呈到DEs细胞表面的MHC分子上.作为初级淋巴细胞基本要求的共刺激分子在DEs上有高水平表达,这些共刺激分子包括cD町(.)cD龉(岛.)和cD舶….在共刺激分子存在的条件下,已致敏的淋巴细胞被递呈给免疫系统,这提供了一种对抗自身免疫的保护作用.侵入抗原被摄取后,可能在TNF-ct的影响下,DCs转变为成熟树突状细胞,迁移到局部淋巴结,将抗原递呈给T淋巴细胞.DEs再成熟前摄取,加工抗原的能力较强,抗原递呈功能较弱,而成熟后抗原递呈功能较强,摄取,加工抗原的能力较弱.3DEs在脑胶质瘤中的应用中枢神经系统很长时间内被认为免疫豁免区,免疫活性在颅内受限制的机制还不能被完全理解,但好象包括明显解剖学特点,如淋巴引流的缺如,血脑屏障的存在,并且在主要组织相容性复合体存在的情况下,小胶质细胞和星形细胞可递呈抗原.但中枢神经系统的免疫豁免不是绝对的,Esther等将小鼠脑组织与GM-CSF共同培养,得到了具有良好抗原递呈功能的DCs,Stao发现小鼠的垂体问质细胞中主要成分为DEs.在实验性过敏性脑脊髓炎中,对髓磷脂基础蛋白的外周免疫引出的特异性抗原诱导了细胞毒性T淋巴细胞(CTL)介导的脱髓鞘作用,暗示中枢神经系统特异性免疫反应来自于合适的靶抗原的递呈和有效的诱导免疫反应….4DEs疫苗的制备多种应用DEs诱导免疫反应的方法已得到研究:提取肿瘤细胞蛋白或肽致敏DEs,将转录肿瘤相关抗原的基因转导入DEs,DEs与肿瘤细胞共同培养,DEs与肿瘤细胞融合等.。
DC-1: 2016 猪血中经典和浆细胞样树突状细胞的表征和转录组学分析揭示了显著的物种特异性差异1 引言猪pDC 转录组谱分析表明，pDC与cDC的距离比pDC与单核细胞的距离更远。
猪DC子集对TLR配体的反应表明，pDC 是TNF-α，IL-12p40 和IFN-α的最重要的来源，而cDC主要在在MHC 和共刺激分子表达方面发挥作用。
cDC中CD40和CD86的上调受到pDC的影响甚至取决于pDC的存在，特别是对于TLR 7和TLR 9配体而言。
单核巨噬细胞系统（MPS）是先天性免疫细胞的复杂网络。
先天性免疫细胞通过特异性表达（可识别保守的微生物相关分子模式的）多种模式识别受体（PRR）来感知环境。
基于个体发育，MPS可分为单核细胞及其衍生细胞，组织巨噬细胞和bona fide树突状细胞（DC）（1）。
小鼠的研究表明，单核细胞和DC来源于骨髓中的造血干细胞（2 - 4）。
DC是专业的APC，可连接先天性和适应性免疫反应，并根据接收到的先天信号和暴露到组织微环境中的信号来诱发免疫反应。
pDC【通过产生大量I型IFN（尤其是IFN-α）】对于抗病毒反应特别重要，但cDC在提呈Ag和激活幼稚T细胞方面最有效。
在小鼠中，功能方面，cDC1只与CD8 T细胞进行抗原交叉递呈反应，能够有效地促进Th1的应答反应（3，5）；CDC2能有效促进Th17 和Th2的免疫应答（3，5）。
这些cDC子集的每个已知的功能都不互斥，因为cDC网络是具有重叠特性。
关于先天免疫反应，DC亚群的表达与TLRs表达有所不同。
尽管某些表达模式在小鼠和人类之间很常见，例如由pDCs过表达的TLR7和TLR9，由cDC1亚群表达的TLR3，但仍观察到一些差异。
例如，TLR9在人类中仅限于pDC表达，但在小鼠中也由cDC表达（6）。
cDC1的关键标记物，在小鼠中是CD8α和CD103，而在人类中是CD141。
在这两个物种中，cDC1特异性表达趋化因子受体XCR1 和C型凝集素受体CLEC9A的表达。
一、流式细胞仪分离法【原理】根据待分离的免疫细胞膜表面抗原的不同，制备出相应的荧光标记抗体，分离前，首先将待分离细胞制成单细胞悬液，经相应的荧光标记抗体染色后，进入流式细胞仪。
此细胞仪以激光为光源，通过高速流动系统将样品中的细胞排列成行，一个一个地从流动室喷嘴处流出，形成细胞液柱。
液柱与高速聚焦的激光束垂直相交，细胞受到激光激发后产生散射光并发射荧光，由光电倍增管接收光信号并转化成脉冲信号，数据经电脑处理，分辨出细胞的类型，并对各类型分别计数和统计。
同时，细胞根据其表面的电荷使液滴瞬间感应相应的带电性，然后在电场的偏转作用下进入不同的收集管，从而将各种免疫细胞分离。
用FACS(流式细胞仪)分离细胞准确快速，分选纯度高（为99%），不损伤细胞活性，可在无菌条件下进行，并可直接统计出各类细胞的相对含量。
【器材与试剂】1.抗CD11c、CD83的单克隆抗体。
2.FITC—羊抗鼠IgG。
3.正常小鼠IgG 。
4.细胞洗涤液(NaCl 8.47g，K2HPO4 4.11g，KH2PO4 1.36g，NaN3 0.1g，20ml，加蒸馏水至1000m1)。
5.红细胞裂解液(KHCO3 1.0g，NH4C1 8.3g，EDTA 37mg，加蒸馏水至100ml)。
6.固定液(25％戊二醛3.2ml，葡萄糖2.0g，加无血清上述细胞洗涤液至100m1)。
7.肝素抗凝血。
8.离心机、流式细胞仪等。
【方法】1.取肝素抗凝血0．4ml，分别加入4支小试管中（其中3支为待测管，1支为对照管）各0.1ml。
然后在各待测管中分别加入0.1ml抗CD11c、CD83的单克隆抗体(1：1000稀释)，对照组加入.正常小鼠IgG ，30℃孵育45min。
2.加入细胞洗涤液3ml，1000r／min，离心2min。
以洗去未结合的抗体，重复洗2次。
3.摇匀管底沉淀细胞。
加入0.1ml FITC-羊抗鼠IgG，30℃孵育45min。
4.加入红细胞裂解液3ml，见红细胞悬液变为真溶液时，立即以1000r／min离心2min。
滤泡树突状细胞肉瘤(FDCS)-免疫组化标记疾病滤泡树突状细胞肉瘤（FDCS）是一种罕见的恶性肿瘤，有时也被称为FDC瘤。
该病多发生在颈部、胸部和腹部淋巴结等淋巴组织中，亦可发生在脾、骨髓和其他组织中。
FDCS具有明显的组织学特征和免疫组化表现。
该病的确切发病原因仍然不明，目前还没有确定有效的治疗方法。
因此，明确的诊断和鉴别诊断显得尤为重要。
免疫组化标记FDCS的确切诊断依赖于病理组织学和免疫组化。
目前认为，CD21是最好的FDCS的免疫组化标记之一。
CD21是一种可在人体正常淋巴激活过程中被发现的分子，在FDCS中也能进行免疫组化检测。
FDCS细胞呈“鸟巢状”排列，其中心是一些细胞团，这些团被称为中心暗区，团周围则是高显色度的区域，即中心明区。
CD23、CD35和CD40等也被认为是FDCS的免疫组化标记。
除此之外，一些研究表明，CD31和vimentin也被广泛运用于FDCS的免疫组化诊断，这些标记物在FDCS的检出率也相对较高。
同时，一些概述研究也强调了对CD21、CD35和CD23这些FDCS标记物检测结果的确认，以避免错误的诊断和鉴别。
诊断和鉴别诊断FDCS往往是一个多学科的过程，通常需要进行组织学和免疫组化检测。
尽管CD21、CD35和CD23已经被广泛运用于FDCS的免疫组化检测中，但目前并不存在唯一的免疫组化标记，而且往往需要与其他类型的肿瘤进行鉴别。
免疫组化检测与组织学检测的诊断符合率相对较高，但在一些例子中仍然存在诊断困难的情况。
此外，FDCS还需要进行外科手术切除、放疗、化疗等多模式治疗，以提高治疗效果。
FDCS是一种罕见的恶性肿瘤，具有明显的组织学特征和免疫组化表现。
CD21、CD35和CD23被广泛运用于FDCS的免疫组化检测中，但目前并不存在唯一的免疫组化标记。
明确的诊断和鉴别诊断显得尤为重要，需要进行组织学和免疫组化检测，以及多模式治疗。
在FDCS的诊断处理中，应注意确认免疫组化标记及检测结果，并进行综合分析鉴别其他类型的肿瘤，以达到更好的治疗效果。
!!作者单位"!###3!上海’复旦大学附属儿科医院呼吸科树突状细胞及其在呼吸道炎症中的作用陆爱珍!王立波!!!摘!要"!树突状细胞是免疫应答的始动者’具有很强的异质性(体内有各种树突状细胞亚群发挥不尽相同的作用(树突状细胞在肺内呈网络状分布(在诱导肺部I F ",I F !免疫反应中以及诱导肺部免疫耐受中起着重要作用(!关键词"!树突状细胞-I F ",I F !免疫反应-调节性I 细胞-免疫耐受L ,+5’&4&00,22)+5&47’.2,&+4>,&+12)33)4&.+.1’,7=&’)4.’*4’)04!!#+*(E %-’’8+3<!*(U 6>H -D/A B :-’B 6.4-=D *A /B 6A G F -C *5*’-’$%*)C A -’d =16=D *B /)6.@&C /’#’*O -A =*B G ’M %/’0%/*!###3!’$%*’/!%974’)04"!K :6Q >=7=H H :B B ;’R =7F 7F :E >:?7F :7:>A E :6:=7T ’<B ?T ?<=S A 7?B >A B :=67F :=G G O 6:>:;<A 6;:;@K =N N :>:67;O U 7T <:;A N Q :6Q >=7=H H :B B ;<B ?T 6A 7:P ?H 7B T 7F :;?G :>A B :=67F :=G G O 6:>:;<A 6;:;@K :6Q >=7=H H :B B ;?>:>:7=H O B ?7:B T Q =;7>=U O 7:Q =67F :B O 6E ’?6Q <B ?T 7F :=G <A >7?67>A B :;=6=6Q O H =6E I F ",I F !=G G O 6:>:;<A 6;:?6Q =G G O 6:7A B :>?6H :@!C ,*(.’57"!K :6Q >=7=H H :B B ;-I F ",I F !=G G O 6:>:;<A 6;:-9:E O B ?7A >T IH :B B ;-’G G O 6:7A B :>?6H :!!本世纪5#年代初’07:=6G ?6和4A F 6正式报道了树突状细胞%K 4&(这类细胞的形态和功能均比较特殊’此后的研究发现K 4在免疫应答的首要环节即抗原递呈中起着重要作用(随着研究的进展’对K 4的分布)亚群)作用机制及其在疾病中的作用等研究方面取得了惊人的成就(本文就K 4及其在呼吸道炎症中的作用作一综述(!!L ;的概述!D !!K 4的亚群及功能!K 4广泛分布于机体的各种组织中’有很高的异质性(按照来源’K 4一般可分成髓系K 4和淋巴系K 4(!D !D !!髓系K 4!又称K 4"’和单核C 巨噬细胞有共同的前体细胞’该前体细胞是4K 3/[4K ""H [’又分为两种不同的亚类’4K 3/[4K ""H [4K "?[4D )[4K "/c 和4K 3/[4K ""H [4K "?[4D )c 4K "/[’这两种亚类前体细胞在有&_C 40+和I (+C 0的体外培养条件下可发育成为两类中间体细胞’这两类中间体细胞可进而沿着不同的途径发育成为不同的K 4(4K 3/[4D )[4K "/c可发育成为郎格汉斯细胞%B ?6E:>F ?6;H :B B ’D 4&’4D )为一种皮肤归巢受体’D 4表达,C H ?Q F :>=6’D ?E 抗原和1=>1:H V 颗粒’D 4的产生依赖于I &+C %(4K 3/[4D )c 4K "/[的前体细胞发育成为间质K 4和单核C巨噬细胞/"’!0(未成熟K 4"表达高水平的ID 9")I D 9!)I D 9/)I D 92)I D 9*’在肽聚糖%.&(&)磷脂壁酸%D I )&和D .0的刺激下被活化’发育成熟’分泌’D C "!’诱导I F "反应(未成熟的K 4"可诱导4K /[的I 细胞分化为调节性I 细胞%I >&’分泌’D C "#或I &+C %’诱导免疫耐受/30(!D !D "!淋巴系K 4!又称K 4!或浆细胞样K 4%<B ?;G ?H T7A =Q H :B B ’.K 4&’因其电子显微镜下形态类似于浆细胞而得名’其表面标志4K /[4K ""Hc 4K 3c 4K 3"[4K %*[4K /29)4K "!3[’4K "!3是’D C 39的0链’.K 4的存在和发育需要’D C 3(K 4!主要有以下2个特点//0"!K 4!和其前体细胞几乎不表达髓系K 4的抗原’如4K ""H )4K "3)4K 33等/20-"K 4!前体在&_C 40+和_C 40+培养条件下不分化为巨噬细胞-#K 4!前体和K 4!在发育成熟阶段几乎不出现吞噬和巨胞饮作用-$与假定的鼠淋巴系K 4一样’人K 4!前体的存活及成熟依赖于’D C 3’而不是&_C 40+/20-&K 4!前体细胞有高水平的<I 0表达/%0(健康个体内’.K 4并不存在外周组织中’而存在于淋巴器官内如胸腺)骨髓)脾)扁桃体)淋巴结等/5C $0(在炎症组织中’.K 4增加’有研究表明’在红斑狼疮患者的皮肤内’经抗原刺激的黏膜或肿瘤内均可发现.K 4/"#’""0(未成熟的K 4!表达I D 95)I D 9$(病毒与I D 9结合后’活化K 4!前体’分泌’(+C 0,%’具有抗病毒作用(在’D C 3存在的条件下’K 4!发育成熟’分泌’D C *(成熟K 4!可活化6?=S :4K /[I 细胞’诱导I F !反应(也可以活化4K *[I 细胞形成4K *[I >细胞’4K *[I >细胞分泌’D C "#’诱导免疫耐受/30(成熟的K 4"和K 4!都不分泌’D C /和’D C "3/"!0(!D !D #!其它!0H ?V :B 等/"30报道’在人类可能存在第三类亚型的K 4’这类K 4可被单克隆抗体_C!$/!国际呼吸杂志!!##5年!第!5卷!第"期!’6789:;<=>’8?6@!##5’-A B @!5@(A @"K4*识别’高表达4K"%’而其它两类K4不表达4K"%(另外’我国学者&:U:>7等/"/0发现’在小鼠脾内存在一种Q=N N K4%Q=N N:>:67=?7=A6?BK4&’由成熟K4发育分化而来’其表型与未成熟K4相似( Q=N N K4能活化I细胞’但不能引起I细胞增殖’并且’Q=N N K4可以抑制成熟K4对I细胞的增殖作用(!D"!K4在体内的迁移!未成熟K4位于周围组织’高表达4492’局部炎症组织释放9)(I,0) _’.)_4.等趋化因子’与4492结合后’趋化未成熟K4迁移到炎症局部’摄取抗原’在迁移的过程中’4492表达下调’4495和4h49/表达上调’4h49/为0K+C0的受体’引流淋巴结内释放0K+C 0’趋化K4进入引流淋巴结’4h49/可作为判断K4成熟的标志(除了趋化因子受体外’4K*5),C钙黏素)基质金属蛋白酶也参与了K4在体内的迁移( "!L;在肺部炎症中的作用"D!!静息状态下K4在肺部的分布与功能!K4存在于人或鼠整个肺组织’包括气管)支气管)肺泡和脏层胸膜(在整个支气管内皮构成一个完整的4K"?[K4的网络(在人肺中’K4主要位于支气管上皮和上皮下组织以及支气管相关淋巴组织中’在上皮中约3#L的K4是4K"?[’上皮下组织中K4与I细胞形成特征性小簇/"20(K:G:Q7;等/"%0研究发现人肺中存在3种K4亚型’髓样K4"/1K4)[ %U B A A Q Q:6Q>=7=H H:B B?67=E:6&,X D)C K9[0)髓样K4!%1K4)3[,X D)C K9[&和.K4%1K4)