一、目的：
制订详尽的工作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。
二、范围：
本标准适用于样品含氮量的测定。
三、职责：
1、 检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；
2、 化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。
四、内容：
本法系依据含氮有机物经硫酸消化后，生成的硫酸铵被氢氧化钠分解释放出氨，后者借水蒸气被蒸馏入硼酸液中生成硼酸铵，最后用强酸滴定，依据强酸消耗量可计算出供试品的氮含量。
1、第一法(常量法)：
1.1仪器：天平（万分之一）、凯氏烧瓶（500ml ）、电炉、氮气球、冷凝管、锥形瓶（500ml ）、酸式滴定管（50ml ，A 级）、漏斗
1.2试剂：
1.2.1硫酸钾AR 、硫酸铜AR 、硫酸AR
1.2.2 40%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠40g ，加水溶解，放冷后，加水定容至100ml ，即得。
1.2.3 2%硼酸溶液：取硼酸2g ，加水溶解使至100ml ，即得。
1.2.4甲基红－溴甲酚绿混合指示液：见EK/SOP-QC8003指示剂与指示液配制操作规程。
1.2.5硫酸滴定液（0.05mol/L ）：见EK/SOP-QC8004硫酸滴定液（0.5、0.25、0.1、 0.05mol/L ）配制与标定操作规程。
1.3操作过程：
取供试品适量（相当于含氮量25～30mg ），精密称定，供试品如为固体或半固体，可用滤纸称取，并连同滤纸置干燥的500ml 凯氏烧瓶中；然后依次加入硫酸钾（或无水硫酸钠）10g 和硫酸铜粉末0.5g ，再沿瓶壁缓缓加硫酸20ml ；在凯氏烧瓶口放一小漏斗并使凯氏烧瓶成45°斜置，用直火缓缓加热，使溶液的温度保持在沸点以下，等泡沸停止，强热至沸腾，俟溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热30分钟，放冷。
沿瓶壁缓缓加水250ml ，振摇使混合，放冷后，加40%氢氧化钠溶液75ml ，注意使沿瓶壁流至瓶底，自成一液层，加锌粒数粒，用氮气球将凯氏烧瓶与冷凝管连接；另取2%硼酸溶液50ml ，置500ml 锥形瓶中，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液10滴；将冷凝管的下端插入硼酸溶液的液面下，轻轻摆动凯氏烧瓶，使溶液混合均匀，加热蒸馏，至接收液的总体积约为250ml 时，将冷凝管尖端提出液面，使蒸气冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏；馏出液用硫酸滴定液（0.05mol/L ）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。
每1ml 硫酸滴定液（0.05mol/L ）相当于1.401mg 的N 。
1.4结果计算：
%100W
10401.1F V -(3⨯⨯⨯⨯=-）空样V N
式中：F为硫酸滴定液（0.05mol/L）的浓度值与其名义值之比；
V样为供试品消耗硫酸滴定液（0.05mol/L）的体积；
V空为空白消耗硫酸滴定液（0.05mol/L）的体积；
W为供试品的质量。
2、第二法（半微量法）：
2.1仪器装置：蒸馏装置如图。
图中A为1000ml圆底烧瓶，B为安全瓶，C为连有氮气球的蒸馏器，D为漏斗,E为直形冷凝管，F为100ml锥形瓶，G、H为橡皮管夹。
2.2试剂：
2.2.1硫酸钾AR、硫酸AR
2.2.2 40%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠40g，加水溶解，放冷后加水定容至100ml，即得。
2.2.3 2%硼酸溶液：取硼酸2g，加水溶解使至100ml，即得。
2.2.4 30%硫酸铜溶液：取硫酸铜30g，加水溶解使成100ml，即得。
2.2.5甲基红－溴甲酚绿混合指示液、甲基红指示液：见EK/SOP-QC8003指示剂与指示液配制操作规程。
2.2.6硫酸滴定液（0.005mol/L）的配制：精密量取硫酸滴定液（0.05mol/L）100ml，置
于1000ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
2.3操作过程：
2.3.1连接蒸馏装置，A瓶中加水适量与甲基红指示液数滴，加稀硫酸使成酸性，加玻璃
珠或沸石数粒，从D漏斗加水约50ml，关闭G夹，开放冷凝水，煮沸A瓶中的水，当蒸气从冷凝管尖端冷凝而出时，移去火源，关H夹，使C瓶中的水反抽到B瓶，开G夹，放出B瓶中的水，关B瓶及G夹，将冷凝管尖端插入约50ml水中，使水自冷凝管尖端反抽至C瓶，再抽至B瓶，如上法放去。
如此将仪器内部洗涤2～3次。
2.3.2取供试品适量（相当于含氮量1.0～2.0mg），精密称定，置干燥的30～50ml凯氏
烧瓶中，加硫酸钾（或无水硫酸钠）0.3g与30%硫酸铜溶液5滴，再沿瓶壁滴加硫酸2.0ml；
在凯氏烧瓶口放一小漏斗，并使烧瓶成45°斜置，用小火缓缓加热使溶液保持在沸点以下，等泡沸停止，逐步加大火力，沸腾至溶液成澄明的绿色后，除另有规定外，继续加热10分钟，放冷，加水2ml。
2.3.3取2%硼酸溶液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲基红－溴甲酚绿混合指示液5滴，将冷凝管尖端插入液面下。
然后，将凯氏烧瓶中内容物经由D漏斗转入C蒸馏瓶中，用水少量淋洗凯氏烧瓶及漏斗数次，再加入40%氢氧化钠溶液10ml，用少量水再洗漏斗数次，
关G 夹，加热A 瓶进行蒸气蒸馏，至硼酸液开始由酒红色变为蓝绿色时起，继续蒸馏约10分钟后，将冷凝管尖端提出液面，使蒸气继续冲洗约1分钟，用水淋洗尖端后停止蒸馏。
2.3.4馏出液用硫酸滴定液（0.005mol/L ）滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定 的结果用空白（空白和供试品所得馏出液的容积应基本相同，约70～75ml ）试验校正。
每1ml 硫酸滴定液（0.005mol/L ）相当于0.1401mg 的N 。
2.3.5取用的供试品如在0.1g 以上时，应适当增加硫酸的用量，使消解作用完全，并相应地増加40%氢氧化钠溶液的用量。
2.4结果计算：
%100W
10401.1F V -(3⨯⨯⨯⨯=-）空样V N 式中：F 为硫酸滴定液（0.05mol/L ）的浓度值与其名义值之比；
V 样为供试品消耗硫酸滴定液（0.05mol/L ）的体积；
V 空为空白消耗硫酸滴定液（0.05mol/L ）的体积；
W 为供试品的质量。
2.5附注：蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟以上。
3、第三法（定氮仪法）
3.1本法适用于常量及半微量法测定含氮化合物中氮的含量。
3.2半自动定氮仪由消化仪和自动蒸馏仪组成；全自动定氮仪由消化仪、自动蒸馏仪和滴定仪组成。
3.3根据供试品的含氮量参考常量法（第一法）或半微量法（第二法）称取样品置消化管中，依次加人适量硫酸钾、硫酸铜和硫酸，将消化管放人消化仪中，按照仪器说明书的方法开始消解[通常为150℃，5分钟（去除水分）；350℃，5分钟（接近硫酸沸点）；400℃，60〜80分钟]至溶液成澄明的绿色，再继续消化10分钟，取出，冷却。
3.4将配制好的碱液、吸收液和适宜的滴定液分别置自动蒸馏仪相应的瓶中，按照仪器说明书的要求将已冷却的消化管装入正确位置，关上安全门，连接水源，设定好加人试剂的 量、时间、清洗条件及其他仪器参数等，如为全自动定氮仪，即开始自动蒸馏和滴定。
如为半自动定氮仪，则取馏出液照第一法或第二法滴定，测定氮的含量。
五、参考文献：
药品生产质量管理规范（2010年修订）
《中国药典》2020年版通则0704
六、相关文件：
EK/SOP-QC8003指示剂与指示液配制操作规程
EK/SOP-QC8004硫酸滴定液(0.5、0.25、0.1、0.05mol/L)配制与标定操作规程
七、相关记录：
N/A
八、变更记录及原因：。
