第４２卷
２００８正 第３期
６月 河南农业大学学报
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕ ｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｖ０１．４２ ＮＯ．３
Ｊｕｎ． ２００８
文章编号：１０００—２３４０（２００８）０３—０３４５—０５
根癌农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化条件的研究
周鹤峰 ，邵 敏 ，葛正龙
（１．遵义医学院珠海校区生物工程系，广东珠海５１９０４１；
２．遵义医学院基础医学院，贵州遵义５６３００３）
摘要：以马铃薯茎段作为受体转化材料，通过根癌农杆茵介导的遗传转化方法，对影响马铃薯遗传转化的多种因 素（抗生素质量浓度、农杆菌质量浓度、共培养时间等）进行研究．结果表明，卡那霉素（ｋａｎａｍｙｃｉｎ，Ｋａｎ）梯度在抗 性愈伤组织诱导、芽分化过程中以１００ ｎａｇ・Ｌ 为宜，但在生根过程中以５０ ｍｇ・Ｌ 为宜，茵液质量浓度以 ＯＤ 。。为０．５，共培养时间为３ ｄ，抑茵剂的选择以羧苄霉素（ｃａｒｂｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，Ｃｂ）更适合．对转基因植株进行ＰＣＲ检 测表明，目的基因已整合到马铃薯基因组中． 关键词：马铃薯；遗传转化；根癌农杆菌；茎段 中图分类号：Ｓ ５３２ 文献标识码：Ａ
Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｆａｃｔｏｒｓ Ａｆｆｅｃｔｉｎｇ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎ Ｍｅｄｉａｔｅｄ
Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｅｍ Ｓｅｇｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｐｏｔａｔｏ
ＺＨＯＵ Ｈｅ．ｆｅｎｇ ，ＳＨＡＯ Ｍｉｎ ，ＧＥ Ｚｈｅｎｇ．１ｏｎｇ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｈｕｈａｉ Ｃａｍｐｕｓ，Ｚｕｎｙｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈｕｈａｉ ５ １ ９０４ １，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｚｕｎｙｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｕｎｙｉ ５６３００３，Ｃｈｉｎａ）
牧草与饲料２００８，２（１）：２９～３２ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒａｇｅ＆
根癌农杆菌介导的苜蓿遗传转化体系的建立
李望丰，金太成，常 青，殷东旭，王德利，刘立侠
（东北师范大学草地科学研究所，长春１３００２４）
摘要：苜蓿基因型是限制遗传转化的关键因素之一。从１３份苜蓿材料中筛选出一份具有高频再生潜力
的基因型一公农１号，并以该品种为受体转化Ｎａ＋／Ｈ＋逆向转运蛋白基因，优化了遗传转化条件，建立了农杆
菌介导的苜蓿遗传转化系统，获得了大量的转基因植株，分子检测证实目的基因已经整合到苜蓿基因组中。
关键词：苜蓿；基因型；遗传转化
中图分类号：￥５４１ 文献标识码：Ａ
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｕｓｉｎｇ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ—
ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎ Ａｌｆａｌｆａ（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ）
ＬＩ Ｗａｎｇ－ｆｅｎｇ。ＪＩＮ Ｔａｉ－Ｃｈｅｎｇ，ＣＨＡＮＧ Ｑｉｎｇ，ＹＩＮ Ｄｏｎｇ—ＸＨ，ＷＡＮＧ Ｄｅ—ｌｉ，ＬＩＵ Ｌｉ—ｘｉａ
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｒａｓｓｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００２４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｉｓ ａ ｋｅｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａｌｆａｌｆａ．Ｇｏｎｇｎｏｎｇ Ｎｏ．１ｏｆ
ａｌｆａｌｆａ ｏｗｎｉｎｇ ｈｉｇｈ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ——ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｗａｓ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｒｏｍ １ ３ ｃｕｈｉｖａｒｓ ｏｆ ａｌｆａｌｆａ．Ｗｅ
ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ，ａｎｄ ｓｕｃｃｅｅｄｅｄ ｉｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ
农杆菌介导的水稻转化
实验目的
学习农杆菌介导的将目的基因导入水稻的方法。
实验原理
随着分子生物学的发展，越来越多的参与植物抗病有关的基因被分离出来，如防卫反应有关的基因、参与抗病信号传导的基因，参与对病原物识别的基因等，要鉴定这些基因在植物抗病性中的作用和地位，就要构建转化植物的双元载体如超量表达、反义和RNA干涉的双元载体转化植物，来明确该基因在植物抗病中的作用。
水稻上常用的遗传转化方法分为DNA直接导入法和农杆菌介导的转化法。DNA直接导入法主要包括PEG（polyethylene glycol）介导的转化法、电击转化法、基因枪转化法和花粉管通道转化法。其中PEG法、电穿孔法以原生质体为受体，由于对原生质体再生的依赖而在应用上受到很大限制。基因枪法优点是受体广泛，不受寄主范围的限制，转化率较高，但和其它DNA直接导入法一样存在共同的缺点：外源DNA的整合方式复杂，常常是多拷贝插入，较易出现转基因沉默现象，转化的外源基因片断不能太大（上限是16-20kb），转入基因的分离有时呈非孟德尔遗传等。同DNA直接导入法相比，农杆菌介导的转化法不需要原生质体的培养，简便易行，能有效地转入较大的外源DNA片断；转化效率高，转化的外源基因整合位点比较稳定（一般在T-DNA 25bp处与植物基因组整合），整合的外源基因基本上保持其结构的完整性；整合的外源基因多为单拷贝或低拷贝；整合的外源基因在转基因植株中的显性表达率较高，共抑制现象相对较少；转入的外源基因通常以孟德尔遗传规律遗传。所以已成为转化单子叶植物的首选方法。
一、目标基因对农杆菌的转化
1.1农杆菌感受态细胞的制备
1. 取-70℃保存的农杆菌EHA105于含50μg/ml利福平YM平板划线，28℃黑暗培养。
2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16小时。
3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃，220rpm振荡培养至OD600=0.5。
第１８卷第２期 ２００２年４月 生物学杂志 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＩＯＬＯＧＹ Ｖｏ１．１９ Ｎｏ．２
Ａｐｒ，２００２
文章编号：１００８－－９６３２（２００２）０２－－０００４－－０４
根癌农杆菌介导的水稻转化研究进展
何迎春，高必达，易图永，任春梅
（湖南农业大学植保系，湖南长沙４１０１２８）
摘要：农杆菌舟导的水稻基因转化是水稻基因转化的热门。表文对由农轩菌介导转化获得的水稻品系（品种），影响农杆菌舟 导转化的因素．农轩菌浸染的方法，外源基因的检刹和遗传等方面作踪合论述，并提出了农杆菌介导转化水稻的前示。
关键词：农杆菌｝水稻；基因转化
中圉分类号；０＿７８５ 文献标识码 Ａ
水稻是世界上主要粮食作物之一，多年来，人们对其进行遗传
研究．不断提高产量和改善品质，由于稻属种质资源及常规育种方
法的局限性，给水稻进一步遗传改良带来一定的困难。随着生物
技术和基因工程技术的发展．通过遗传转化不但能将有用的外源
基因直接导入植物细胞，整合在染色体上，而且能使其在后代植株
中得 表达，这为利用外源基因提高育种效率提供了可能。遗传
转化的方法很多，总体可分为三类：（１）ＤＮＡ直接导入法，包括化
学诱导ＤＮＡ直接转化（ＰＥＧ介导法、脂质傩介导法）和物理法诱
导ＤＮＡ直接转化（电激法、超声波介导、显微注射、激光微柬介导、
基因枪法介导）；（ ）种质系统介导基因转化．包括花粉管通道法、
生殖细胞浸泡法、胚曩、于房注射法；（３）生物介导基田转化．包括
农杆菌介导法（根癌农杆菌 质粒和发根农杆菌 质粒介导）和
植物病毒载体介导法（ＤＮＡ病毒转化载体介导和ＲＮＡ病毒转化
载体舟导）。其中许多方法须具备相应的细胞悬浮系或原生质体
受体系统和贵重的仪器设备，因此受到限制。农杆菌是一种寄主
广泛的土壤细菌．自然状态下能通过原有病斑或伤口侵染植物，其
舟导的遗传转化是 自身为媒介，将载体上特定区域内目的基因
导入细胞，并整合在染色体上、这种方法仪器设备简单，操作容易、
