微生物室臭氧灭菌验证方案与报告

微生物室臭氧灭菌验证报告

1.概述

臭氧（O3）是一种广谱高效灭菌剂，具有强烈杀菌消毒作用。在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧（O2）和单个氧原子（O），后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死。多余的氧原子则会自行重新结合成为氧分子（O2），不存在任何有毒残留物，为无污染消毒剂。

2.验证目的

微生物室使用臭氧灭菌的效果直接影响到产品的品质。为确保臭氧灭菌的有效性，减少对员工身体健康的损害，通过对在一定的时间微生物室内臭氧浓度的测试，验证微生物室内臭氧浓度是否达到标准规定；并通过沉降菌试验，确定臭氧对微生物的消毒效果。因此，制订本验证方案进行验证。

3.验证职责

3.1品研部化验员

3.1.1负责做好各种检测的准备、取样及测试工作

3.1.2负责记录并整理数据

3.2品研部主管

3.2.1负责监督验证方案的实施

3.2.2负责对验证方案有效性的确认

4．仪器

臭氧检测仪：FX6000L-0型固定式臭氧检测仪，生产厂家：深圳市华利奥电子有限公司。测试原理：检测管测试采用电化学原理，直读分析数据。检测范围：0~50PPm。分辨率：0.01ppm。

5．验证内容

5.1测试一：微生物室臭氧浓度达到消毒浓度所需时间

5.1.1臭氧消毒浓度要求

微生物室臭氧浓度达到20mg/m3（即9.33ppm）的消毒浓度。

5.1.2测试方法

臭氧发生器开始工作时计时，期间每隔5分钟记录当下的臭氧浓度，微生物室臭氧浓度达到消毒浓度（9.33ppm）后继续监测10min后关闭臭氧发生器；

5.1.3连续监测2次 5.1.4数据记录，见附表1

5.2测试二：臭氧浓度降低到作业现场允许浓度所需时间

5.2.1允许人员进入作业的臭氧浓度要求

臭氧浓度降低浓度0.2mg/m3（即0.93ppm），为允许人员进入作业的浓度要求。

5.2.2测试方法

臭氧达到消毒浓度20mg/m3（即9.33ppm）后关闭臭氧发生器，期间每隔10分钟记录当下的臭氧浓度，臭氧浓度降低到作业现场允许浓度（0.93ppm）后继续检测20min，停止数据记录；

5.2.3连续监测2次

5.2.3数据记录，见附表2

5.3臭氧消毒效果验证

5.3.1验证方法

5.3.1.1培养基

大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）

培养基制备：将培养基加热溶化，冷却至45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15m1。制备好的培养基平皿应在2~8℃环境中存放，存放时间不可超3天。

5.3.1.2试验条件

环境温度16～28℃；相对湿度45～65%；室内无外界强气流，无强烈阳光照射或其他热辐射。消毒时关闭排风设施，使整个被消毒的微生物室空气通过净化系统风管形成循环，臭氧发生器开始工作。

5.3.1.3测试步骤

5.3.1.3.1沉降菌的对照试验

在臭氧发生器开启灭菌前，关闭微生物室的排风设施。依据GB/T 16294-2010医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法确定采样点和采样数。在微生物室内取3个采样点放置3只培养皿，放置点离地0. 8m左右，打开培养皿盖，暴露30分钟后，盖上培养皿，取出所有培养皿，倒置放置。

5.3.1.3.2灭菌后沉降菌测试

依据5.2臭氧浓度降低到作业现场允许浓度的时间，进入消毒间。参照5.3.1.3.1的采样点和采样数进行测试。

5.3.1.3.3全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温箱中30~35℃培养48~72小时，观察结果并将结果记录。

5.3.2数据记录见附表3、4

5.3.3验证效果判定标准

依据GB 50457-2008医药工业洁净厂房设计规范。沉降菌： 1万级，沉降菌≤3个/皿；10万级，沉降菌≤10个/皿判定为合格。沉降菌： 1万级，沉降菌＞3个/皿。10万级，沉降菌＞10个/皿，判定为不合格。

微生物室臭氧灭菌效果验证报告记录

附表1

臭氧浓度达到消毒浓度记录表

测试 测定日期 温度（℃） 湿度（%） 臭氧浓度与时间监测

测定人 监测时间（min） 臭氧浓度（ppm） 监测时间（min） 臭氧浓度（ppm） 监测时间（min） 臭氧浓度（ppm） 监测时间（min） 臭氧浓度（ppm）

① 2014-7-2 23 51 5 1.05 10 2.54 15 4.25 20 6.74

25 8.04 30 9.85 35 11.28 40 12.45

②

2014-7-6 22 51 5 1.12 10 2.45 15 4.30 20 6.59

25 7.98 30 9.88 35 11.24 40 12.49

达到设计浓度平均时间（min） 开启臭氧发生器30min时，两次检测臭氧平均浓度为 9.87ppm

（设计臭氧消毒浓度标准为9.33ppm）

结论 根据上述测定结果，确定微生物室臭氧消毒从开机至达到设计臭氧浓度（9.33ppm）的平均时间为 30分钟。

确认人 确认日期

附表2

臭氧浓度降到作业现场允许浓度记录表 测试 测定日期 温度（℃） 湿度（%） 臭氧浓度与时间监测

测定人 监测时间（min） 臭氧浓度（ppm） 监测时间（min） 臭氧浓度（ppm） 监测时间（min） 臭氧浓度（ppm） 监测时间（min） 臭氧浓度（ppm）

③ 2014-7-8 23 51 10 8.60 20 6.24 30 5.24 40 3.24

50 1.25 60 0.90 70 0.75 80 0.65

④ 2014-7-9

22 50 10 8.58 20 6.22 30 5.20 40 3.18

50 1.20 60 0.89 70 0.72 80 0.61

达到设计浓度平均时间（min） 臭氧达到 浓度后，关闭臭氧发生器60min时，两次检测臭氧平均浓度为0.90ppm，即降到作业现场允许浓度

（降到作业现场允许浓度标准为0.93ppm）

结论 根据上述测定结果，确定微生物室臭氧消毒从关机降到作业现场允许浓度（0.93ppm）的时间为60分钟。

确认人

确认日期

附录3

臭氧消毒效果监测记录表

沉降菌（测试③验证）

取样点编号 取样日期 报告日期 对照组（cfu/皿） 试验组（cfu/皿） 判定标准 （万级：沉降菌≤３个／皿） 备注

实测值 平均值 实测值 平均值

1 2014-7-8 2014-7-10 5

6 0

0 试验组平均菌落数≤３个／皿

2 2014-7-8 2014-7-10 7 0

3 2014-7-8 2014-7-10 6 0

标准 按照GB/T 16294-2010医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法，且该微生物室操作室的洁净度为万级，（万级：沉降菌≤３个／皿判定为合格，否则为不合格）

结论 根据上述测定结果，确定微生物室臭氧消毒效果有效

检测人： 日期：

复核人： 日期：

附表4

臭氧消毒效果监测记录表

沉降菌（测试④验证）

取样点编号 取样日期 报告日期 对照组（cfu/皿） 试验组（cfu/皿） 判定标准 （1万级：沉降菌≤３个／皿） 备注

实测值 平均值 实测值 平均值

1 2014-7-9 2014-7-11 7

7 0

0 试验组平均菌落数≤３个／皿

2 2014-7-9 2014-7-11 8 0

3 2014-7-9 2014-7-11 6 0

标准 按照GB/T 16294-2010医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法，且该微生物室操作室的洁净度为万级，（1万级：沉降菌≤３个／皿判定为合格，否则为不合格）

结论 根据上述测定结果，确定微生物室臭氧消毒效果有效。

检测人： 日期：

复核人： 日期：

结论：

微生物室臭氧浓度验证报告结论

通过对微生物室开启臭氧发生器，设定重复两次进行臭氧浓度测试，验证微生物室内臭氧浓度达到标准浓度所需的时间；在关闭臭氧发生器后，重复两次测试微生物室臭氧浓度降低到人员可进入作业所需的时间。并通过沉降菌试验，确定臭氧对微生物的消毒效果。

由以上附录1至附录4的数据记录表可得，微生物室臭氧发生器开启到达到臭氧消毒浓度9.33ppm时需要30min，降低到人员可进入作业的臭氧浓度0.93ppm时需要60min，且沉降菌试验表明消毒有效。

最终确定微生物室臭氧灭菌开启时间为30min，关闭臭氧发生器后60min后，人员可进入作业。

报告者： 核准者：

日期： 日期：