肿瘤生长模型
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肿瘤动物模型得建立可以:(1)评价抗肿瘤免疫治疗得疗效;(2)作为抗肿瘤药物筛选模型;(3)为肿瘤转移研究提供更好得研究平台;(4)为研发抗肿瘤转移性药物提供良好得实验工具。
实验方法:诱发性肿瘤动物模型实验方法原理:诱发性肿瘤动物模型就是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物得肿瘤等。
实验材料:肿瘤细胞小鼠试剂、试剂盒、无血清培养基质、3%中性甲醇石腊仪器、耗材、低温离心机、血球计数器、游标卡尺实验步骤一、肝癌1.二乙基亚硝胺(DEN)诱发大白鼠肝癌(1)取体重250 g左右得封闭群大白鼠,雌雄不拘;(2)按性别分笼饲养。
除给普通食物外,饲以致癌物,即用0、25%DEN水溶液灌胃,剂量为10 mg/kg,每周一次,其余5天用0、025%DEN水溶液放入水瓶中,任其自由饮用;(3)共约4个月可诱发成肝癌;(4)也可以单用0、005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
2.4-2甲基氨基氮苯(DBA)诱发大鼠肝癌(1)用含0、06%DBA得饲料喂养大鼠,饲料中维生素B2不应超过1、5~2 mg/kg;(2)4~6月就有大量得肝癌诱发成功。
3.2-乙酰氨基酸(2AAF)诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌(1)给成年大鼠含0、03% 2AAF标准饲料;(2)每日每平均2~3 mg 2AAF(也可将2AAF混于油中灌喂),3~4月后有80~90%动物产生肝肿瘤。
4.二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌:(1)用剂量为每日0、3~14 mg/kg体重,混于饲料或饮水中给予;(2)6~9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
5.亚胺基偶氮甲苯(OAAT)诱发小鼠肝癌(1)用1%OAAF苯溶液(约0、1 ml含1 mg)涂在动物得两肩胛间皮肤上,隔日一次,每次2~3滴,一般涂100次。
(2)实验后7~8周即而出现第一个肝肿瘤,7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
(3)或用2、5 mg OAAT溶于葵瓜子油中,给C3H小鼠皮下注射4次,每日间隔10天,也可诱发成肝癌。
第1篇一、实验目的本研究旨在通过建立小鼠肿瘤模型,观察药物对肿瘤生长的抑制作用,评估药物的抗癌活性。
二、实验材料1. 实验动物:清洁级C57BL/6小鼠,体重20-25g,雌雄各半,由动物实验中心提供。
2. 肿瘤细胞:小鼠乳腺癌细胞系4T1。
3. 药物:实验药物(以下简称药物)和阳性对照药物。
4. 实验试剂:胎牛血清、DMEM培养基、青霉素、链霉素、MTT试剂盒、细胞培养皿、显微镜、离心机等。
三、实验方法1. 细胞培养:将4T1肿瘤细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中,置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
2. 肿瘤模型建立:取C57BL/6小鼠,按体重随机分为实验组、对照组和阳性对照组,每组10只。
实验组小鼠给予药物干预,对照组给予等体积的生理盐水,阳性对照组给予阳性对照药物。
观察小鼠肿瘤生长情况,记录肿瘤体积。
3. 肿瘤体积测量:采用游标卡尺测量肿瘤长径和短径,计算肿瘤体积。
4. MTT法检测细胞活力:取对数生长期的肿瘤细胞,以5×10^3个/孔的密度接种于96孔细胞培养板中,培养24小时后,加入不同浓度的药物处理细胞,继续培养24小时。
加入MTT试剂,孵育4小时后,用酶标仪检测各孔吸光度值。
5. 数据分析:采用SPSS 22.0软件进行统计分析,数据以均值±标准差表示,采用单因素方差分析(ANOVA)和t检验进行组间比较。
四、实验结果1. 肿瘤体积变化:与对照组相比,实验组小鼠肿瘤体积明显减小,阳性对照组肿瘤体积也明显减小,但与对照组相比,实验组肿瘤体积减小更为显著。
2. 细胞活力检测:随着药物浓度的增加,肿瘤细胞活力逐渐降低,实验组细胞活力明显低于对照组和阳性对照组。
五、讨论本研究通过建立小鼠肿瘤模型,观察药物对肿瘤生长的抑制作用,结果表明药物具有明显的抗肿瘤活性。
与阳性对照组相比,药物对肿瘤生长的抑制作用更为显著,提示该药物具有良好的抗癌作用。
本实验采用MTT法检测细胞活力,结果显示药物对肿瘤细胞具有明显的抑制作用,这与肿瘤体积的测量结果相一致。
肿瘤移植(TT)小鼠模型具体方法及步骤原型物种人来源黑色素瘤B16细胞导致的肿瘤肝转移及肺转移模式动物品系SPF级C57BL/6小鼠,健康,雄性,4~6W,体重为18g~20g。
实验分组实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组。
实验周期4-6 weeks建模方法恶性黑色素瘤(malignant melanoma MM)的发病率较低, 但恶性度高, 转移早而广泛,且对常规放疗有较强抗性,临床治疗颇为棘手,目前尚无有效的治疗方法,其常规治疗主要有免疫治疗、化疗、生物治疗、近距放射疗法和外束放射疗法等。
近年恶性黑素瘤发病率和死亡率明显上升,肿瘤侵袭及转移是其治疗失败的主要原因,很大一部分肿瘤病人在初治时已有微小的或潜在的转移病灶。
为了能彻底治愈癌症,控制肿瘤侵袭和转移是治疗的关键。
黑色素瘤B16细胞株是生长在C57BL/6小鼠耳根部的自发性肿瘤,C57BL/6小鼠的B16移植瘤和转移瘤模型是肿瘤研究的常用模型之一。
小鼠成瘤实验:取对数生长的细胞,胰酶消化后培养基重悬收集细胞,用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)调整细胞密度备用。
选用C57BL/6J 小鼠建立B16 细胞肿瘤转移模型,每组10 只。
试验组小鼠尾静脉注射浓度为5×10 6 /L 的B16 细胞悬液0.1ml,每组于接种细胞次日起腹腔注射药物,10 日后改为隔日注射一次。
于第21天,处死动物,取肝脏及肺组织,解剖镜下计数转移的结节数量,数码相机拍照,并对各组小鼠肺转移结节的数目进行统计学分析。
应用肿瘤转移疾病模型模型评价各组小鼠尾静脉注射接种肿瘤细胞后,生长良好,体重无明显变化,组间无明显差异。
第21 天时处死小鼠,取肝脏及肺组织,解剖镜下观察,可发现肝脏及肺组织有明显转移的结节。
解剖镜下计数转移的结节数量,可见给药组小鼠肝脏及肺结节数目明显低于阴性对照组。
取材:1.实验结束后每组取肝组织、肺组织和肿瘤组织,每个组织从瘤体中央分为2份,一份置于甲醛固定;另一份液氮冷冻置于-80度保存,用于分子生物学和WB检测等等。
动物肿瘤模型的选择如上已述,不同种属、品系和类型的实验动物其肿瘤学方面的性状各不相同,肿瘤学研究工作应当熟悉实验动物科学的开发研究成果,对有关的资料有比较全面的了解,才能为自己的课题选到合适的实验动物肿瘤模型。
实验动物的肿瘤模型可以概括地区分为下面四类:(一)自发性肿瘤模型实验动物种群中不经有意识的人工实验处置而自然发生的一类肿瘤称之为自发性肿瘤。
自发性肿瘤发生的类型和发病率可随实验动物的种属、品系及类型的不同而各有差异。
肿瘤实验研究中,一般应当选用高发病率的实验动物肿瘤模型作为研究对象,否则就无法进行研究。
当然,低发病率的肿瘤模型也有一定用处,可以用它作为对照。
肿瘤实验研究中选用自发性肿瘤型为对象进行研究有一定优点:首先是自发性肿瘤通常比用实验方法诱发的肿瘤与人类所患的肿瘤更为相似,有利于将动物实验结果推用到人:其次是这一类肿瘤发生的条件比较自然,有可能通过细致观察和统计分析而发现原来没有发现的环境的或其它的致癌因素,可以着重观察遗传因素在肿瘤发生上的作用。
但应用自发性肿瘤模型也存在一些缺点:肿瘤的发生情况可能参差不齐,不可能在短时间内获得大量肿瘤学材料,观察时间可能较长,实验耗费较大。
某个近交品系动物在一定年龄内,可以发生一定比率的某种自发性肿瘤。
目前已培育了许多种小鼠自发肿瘤,从肿瘤发生学上看,这些自发瘤与人体肿瘤相似,进行肿瘤发病学和药物筛选等实验应属理想。
但由于不易同时获得大批病程相似的自发瘤动物,又因这种肿瘤生长较慢,实验周期相对较长,所以一般很少用于筛药。
近年有人应用AKR自发白血病小鼠进行化研究,该小鼠出生后一年半内有高于90%的发病率,曾作为研究人体白血病和淋巴瘤的模型,它对药物的治疗反应类似儿童急性淋巴性白血病。
由于病程较长,已用于综合化疗研究药物诱导缓解和维持缓解的最适治疗方案。
此肿瘤可用强的松和长春新碱诱导缓解,也可以环磷酰胺和甲基-CCNU诱导缓解,再用阿糖胞苷维持缓解,后者疗效最好。