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抗酸染色试剂盒(Kinyoun冷染法)

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北京雷根生物技术有限公司

抗酸染色试剂盒(Kinyoun冷染法) 产品简介： 分枝杆菌的细胞壁内含有大量脂质包围在肽聚糖的外面, 所以分枝杆菌一般不易着色。传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。分枝杆菌中的分枝菌酸与染料一旦结合后，就很难被酸性脱色液脱色，故名抗酸染色。其中最具代表性的为对结核杆菌Ziehl－Neelsen染色法，该法是WHO推荐热染的方法。 Leagene抗酸染色试剂盒(Kinyoun冷染法)属于冷染色液，无需加热，相对较抗酸热染液安全，其染色原理是在室温条件下，分枝菌酸与石炭酸复红结合成复合物，经亚甲蓝复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。该试剂盒染色较改良Kinyoun冷染法要深，更适用于常规抗酸染色，Leagene推荐该试剂盒作为实验室或临床上标准染色法。 产品组成：

自备材料： 1、 接种环 2、 载玻片 3、 蒸馏水 4、 显微镜 操作步骤（仅供参考）： 1、 接种环挑取待检样本，涂布于载玻片上，自然干燥。 2、 滴加Kinyoun复红染色液，染色5～10min。 3、 不必加热，蒸馏水冲洗。 4、 用Kinyoun脱色液脱色至无红色为止。 5、 蒸馏水冲洗。 6、 用亚甲蓝染色液染色30s～1min。 编号 名称 DM0035 3×50ml DM0035 3×100ml DM0035 3×500ml Storage 试剂(A): Kinyoun复红染色液 50ml 100ml 500ml RT 避光 试剂(B): Kinyoun脱色液 50ml 100ml 500ml RT 试剂(C): 亚甲蓝染色液 50ml 100ml 500ml RT 避光 使用说明书 1份 北京雷根生物技术有限公司

7、 蒸馏水冲洗。 8、 轻轻吸干水分，自然干燥。 9、 油镜镜检。 染色结果： 抗酸菌 红色 非抗酸菌、细胞、背景 蓝色 注意事项： 1、 每次使用后盖紧试剂瓶，以防试剂挥发和污染。 2、 上述试剂均对人体有刺激性，请注意适当防护。 3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期： 12个月有效。 相关产品：

产品编号 产品名称 DG0005 糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒 DC0032 Masson三色染色试剂盒 DM0002 吉姆萨/姬姆萨染色液(Giemsa stain,1:9) DM0005 瑞氏染色液(Wright Stain ) DM0007 瑞氏-吉姆萨复合染色液(Wright-Giemsa stain) DM0016 增强革兰氏染色试剂盒(Gram Stain) DM0036 抗酸染色试剂盒(改良Kinyoun冷染法) DM0080 乳酸酚棉蓝染色液 DM0085 硝酸盐还原实验试剂盒

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细菌染色标本的抗酸染色法

细菌染色标本的抗酸染色法

细菌染色标本的抗酸染色法

抗酸染色也可将细菌分为两大类：即抗酸性细菌和非抗酸性细菌。因为临床上绝大多数病原菌为非抗酸性细菌，所以抗酸染色不作为临床上常规的细菌检查项目，只针对性用于结核病、麻风病等的细菌检查。疑似结核分枝杆菌感染的标本，经抗酸染色后以油镜检查，即可作出初步鉴定。将有肺结核症状病人的痰标本，制成涂片后，作萋-纳染色镜检，根据所见结果即可报告“找到（未找到）抗酸菌”。再如有肾感染症状的病人，取其尿标本，经离心沉淀后作涂片，行萋-纳及潘本汉抗酸染色，如两张涂片均查见红色抗酸杆菌，可报告为"找到抗酸分枝杆菌".对临床疾病的诊断和治疗具有重要参考价值。

除以上所述染色方法外，用于细菌鉴定的还有鞭毛染色、异染颗粒染色等。鞭毛染色后于显微镜下可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。疑为白喉棒状杆菌感染，进行涂片检查，除证实为革兰阳性典型棒状杆菌外，还须用异染颗粒染色法，镜检异染颗粒，方可初步报告“检出形似白喉棒状杆菌”，为临床早期诊断提供依据。

抗酸染色操作规程

抗酸染色操作规程

抗酸染色操作规程

1.目的

规范抗酸染色操作规程，确保染色结果清晰可靠。

2、原理

分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红的颜色,达到染色目的。

3、范围

用于抗酸性细菌(结核、麻风分枝杆菌)初步鉴定

4、质量控制

龟分枝杆菌ATCC93326做染色阳性,大肠埃希菌ATCC25922为染色阴性对照。

5、试剂

5.1石炭酸复红

碱性复红 10g 95,酒精 100ml 5,石炭酸 900ml (边加边研磨) 5.2盐酸脱色液

(3,盐酸酒精)

浓盐酸 3ml 95,酒精 97ml

5.3吕氏美兰

美兰 0.3g 95,酒精 30ml 蒸馏水 70ml 10,KOH水溶液 0.1ml 复染液 6、工作程序

6.1制片:待检标本用无菌生理盐水涂片，经自然干燥后用火焰固定。

6.2初染:加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸汽出现，切不可沸腾。反复染5分钟,清水冲洗。

6.3脱色:加盐酸脱色液，不时摇动玻片至无红色脱落为止，清水冲洗。 6.4复染:加美蓝复染，染0.5-1分钟，清水冲洗。

6.6待涂片自然干燥后，油镜镜检。

7、结果判断

结核杆菌呈红色，其它细菌呈蓝色

8、注意事项

染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果。体液标本均应离心后取下层沉淀液与染液混合，以提高检出率。提高责任心，做到全片检查。

抗酸染色概要(1)

抗酸染色概要(1)

夹层杯抗酸染色制片法概要

一：标本的预处理：消化和离心

1. 将标本至于夹层杯中加消化液消化至液体清亮（2~5分钟可灭活细菌）（若是其它容器取痰的，可小心的在痰上加些许消化液，待痰不再粘附其上后转入夹层杯）（夹层杯可装液体不超过杯身三分之二）（非痰类标本亦须加适量消化液消化）。

2. 将本杯置于离心机内对称平衡放稳，以4500转/分钟转速离心5分钟，弃去液体（轻快的倒掉），放在干片机内烘烤（干片机提前开启至60度）。

二：染色：初染和洗脱和复染

1. 加A液在60度温度下染色5分钟。

2. B液脱色（尽量将红色脱净）。

3. C液复染一分钟。

（每次弃去染色液后需以缓慢小水流沿杯壁将杯中剩余液体洗清沥干）。（加染液液量以可覆盖膜片为适量）

三：制片：取片和阅片

1. 将染色后的片子烘干。

2. 用取片针顶起杯底纳米膜片，用镊子夹出，轻轻印干水分，用中性胶倒封于玻片上，弃去保护膜。（水分将会影响胶水对膜片的粘附）

3. 阅片。（可利用“红十字”找寻视野）

四：注意事项

1. 膜片上的细菌的保护：本制片法的原理为通过离心沉降并烘烤将目标菌粘附在膜片上后进行染色，在操作过程中必须避免直接冲刷、液体剧烈振荡、大力印擦等而将膜上已粘附的细菌冲走，这些失误会严重影响阳性率。

2. 各标本间的交叉污染：标记混淆、杯中液体互溅、液体转移等将会使结果严重不可靠。

3. 脱色的程度：脱色不完全将导致膜上非抗酸菌或其它物质也呈现红色，脱色过久过重会影响抗酸杆菌所着色，二者都将影响后续镜检。

4. B液：其重要成分为酒精盐酸，易挥发，用完务必盖好盖子。

5. 操作时间段的把握：请有效利用机器与时间间隔，避免标本堆积。

抗酸染色一

抗酸染色一

抗酸染色一般步调之宇文皓月创作

1）初染

用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免干涸，加热3-5分钟，待标本冷却后用水冲洗。

2）脱色

3%盐酸酒精脱色30秒~1分钟；用水冲洗。

3）复染

用碱性美兰溶液复染1分钟，水洗，用吸水纸吸干后用油镜观察。

抗酸染色的染液配制

1、石炭酸复红

碱性复红酒精饱和溶液 10mL

5%石炭酸 90mL

2、3%盐酸酒精

浓盐酸 3mL

95%酒精 97mL

3、吕氏美兰液 美兰酒精饱和液 30mL

氢氧化钾（1:10000） 100mL抗酸染色的原理

分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包抄在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不容易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。

齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及布景中的物质为蓝色。