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Cripto-1 siRNA联合5-FU对大肠癌细胞增殖和迁移的影响及与EMT的关系

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山东医药2019年第

59卷第

17期

Cripto-1 siRNA联合5-FU对大肠癌细胞增殖

和迁移的影

响及与

EMT的关系

华丽打周燕红2,游红霞

2

(1湖北医药学院，湖北十堰

442000 ；2

湖北科技学院

)

摘要：目的 观察小干扰RNA(siRNA)技术沉默大肠癌细胞中Cripto-1表达联合5-氟尿疇睫(5-FU)对大肠癌

细胞增殖和迁移的影响，并探讨其与上皮间质转化(EMT)的关系。方法体外培养人大肠癌Lovo细胞

，将细胞分

为正常对照组、Cripto-l siRNA

组、5-FU组

、联合组。

正常对照组加入含10%胎牛血清的

RPMI1640

培养液中常规

培养 48 h； Cripto-1 siRNA 组加入 100 pL 无血清 Opti-MEM

培养基、8 pL LipofectamineTM2000、10 pL siRNA 混匀，进

行转染，

转染完成后更换普通培养基继续培养48 h；5-FU组加入10 mg/L 5-FU培养48 h；联合组先按

Cripto-1 siR

­

NA 组的方法进行转染，然后加入10 mg/L5-FU继续培养48 ho采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,Transwell实 验观察细胞的迁移能力‘Western blotting法检测细胞中Cripto-1蛋白及上皮标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)、间质 标志物Snail蛋白的相对表达量。结果Cripto-1 siRNA,5-FU组、联合组的细胞增殖率均低于正常对照组

(P均＜

0. 05)，联合组细胞细胞增殖率低于Cripto-1 siRNA和5-FU组(P均＜0. 05) Cripto-1 siRNA

组与5-FU组比较差异

无统计学意义(P ＞0.05)。Cripto-1 siRNA、5-FU组、

联合组的细胞迁移数较正常对照组减少(P均＜0. 05)联合组

细胞迁移数较 Cripto-1 siRNA 组和 5-FU 组减少(P 均 ＜0.05)5-FU 组较 Cripto-1 siRNA 组减少

(P ＜0.05)。Cripto-

1 siRNA组、5-FU组、联合组Cripto-1和

Snail蛋白表达低于正常对照组,E-cadherin蛋白表达高于正常对照组(P均

＜ 0. 05 );联合组 Cripto-1 和 Snail 蛋白表达低于 Cripto-1 siRNA 组、5-FU 组,E-cadherin 蛋白表达高于 Cripto-1 siRNA 组、

5-FU组(P均＜0. 05) ；Cripto-1 siRNA组与5-FU组各蛋白表达比较差异无统计学意义(P均＞0. 05)。

结论

采用siRNA技术沉默大肠癌细胞中的Cripto-1表达,可增强5-FU对大肠癌细胞增殖和迁移的抑制作用,Cripto-1可 能通过介导EMT促进大

肠癌的发生发展

。

关键词:大肠癌;Cripto-1基因；5-氟尿疇睫;细胞增殖;细胞迁移;上皮间质转化doi ： 10. 3969/j. issn.

1002-266X.

2019.17.

005

中图分类号:R735.34 文献标志码:A 文章编号

：1002-266X(2019)7-0016-04

Effects of Cripto-1 siRNA combined with 5-FU on proliferation and migration of colorectal cancer cells and its relationship with EMTHUA Li

1, ZHOU Yanhong, YOU Hongxia

(1 Hubei Medical College, Shiyan 442000

, China /

Abstract: Objective To observe the effects of silencing Cripto-1 expression combined with 5-fluorouracil (5-FU)

on

the proliferation and migration of colorectal cancer cells by small interfering RNA ( siRNA) technology, and

to explore its

relationship with epithelial-mesenchymal transition ( EMT) . Methods Human colorectal cancer Lovo cells were cultured in vitro, and then were divided into the normal control group, Cripto-1 siRNA group, 5-FU group

, and combination

group.

The cells in the normal control group were added with RPMI1640 medium containing 10% fetal bovine serum and were cul­

tured for 48 h； the cells in the Cripto-1 siRNA group were added with the mixture of 100 pL

serum-free

opti-MEM medi­

um, 8 pL LipofectamineTM 2000, and 10 pL siRNA, and then were transfected, after transfection, the medium was re

­

placed with the normal medium, and then the cells were cultured for 48 h； cells in the 5-FU group were added with 10 mg/ L 5-FU for 48 h； the cells in the combination group were first transfected with the same method of the Cripto-1 siRNA group, and then were added with 10 mg/L 5-FU for 48 h. The cell proliferation in each group was detected by CCK-8, the migration ability of cells was detected by Transwell experiment， and the relative expression levels of Cripto-1

protein

and

基金项目：

湖北省卫生健康委员会面上项目(

WJ2019M092)。

第一作者简介:华丽(1990-)，女，在读硕士研究生，主要研究方向为消化道肿瘤的防治

。

E-mail：

1107997958@qq.com

通信作者简介:周燕红(1971-)，女，教授，硕士研究生导师，主要研究方向为消化道肿瘤的防治。E-mail： Yanhongzhou326@163.com

16山东医药2019年第

59卷第

17期

epithelial marker E-cadherin and the interstitial marker Snail protein were detected by Western blotting. Results The cell proliferation rates of the Cripto-1 siRNA group, 5-FU group and combination group were lower than

that of the normal con­

trol group ( all P < 0. 05) . The cell proliferation rate of the combination group was lower than those of the Cripto-1 siRNA group and 5-FU group ( both P <0.05) , and there was no significant difference between the Cripto-1 siRNA group and the

5-FU group (P >0. 05 ) . The migration cells in the Cripto-1 siRNA, 5-Fu group, and combination group

were

less than

those of the normal control group ( all P <0.05) , and the migration cells in the combination group were less than those of the Cripto-1 siRNA group and 5-Fu group ( both P < 0. 05 ) ，and the 5-FU group was less than the Cripto-1

siRNA

group

( P < 0. 05) . The Cripto-1 and Snail protein expression of the Cripto-1 siRNA group，5 -FU group，combination group was lower than that of normal control group，and the expression of E-cadherin protein was higher than that of normal control group ( all P < 0. 05) . The expression of Cripto-1 and Snail protein in the combination group was lower than

that in

Cripto-

1 siRNA group and 5-FU group，and the expression of E-cadherin protein was higher than that of Cripto-1 siRNA group

and

5-FU group ( all P < 0. 05)； there was no significant difference in the protein expression between the Cripto-1 siRNA group

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emt相关转录因子

emt相关转录因子

emt相关转录因子EMT相关转录因子：从细胞转变到癌症的关键引言：细胞转变是生物体发育和病理过程中的一个重要事件。

在这个过程中，细胞从一种类型转变为另一种类型，这种转变涉及到一系列的分子调节机制。

EMT相关转录因子在细胞转变中起到了关键的作用。

本文将介绍EMT相关转录因子的基本概念、调控机制以及其在癌症中的重要作用。

一、EMT相关转录因子的基本概念EMT（Epithelial-Mesenchymal Transition，上皮间充质转化）是一种细胞转变的过程，通过细胞内外的信号调控细胞从上皮细胞转变为间充质细胞。

EMT相关转录因子是在这个过程中发挥关键作用的一类转录因子。

常见的EMT相关转录因子包括Snail、Slug、Twist 等。

二、EMT相关转录因子的调控机制EMT相关转录因子的表达受到多种信号通路的调控。

其中，Wnt/β-catenin信号通路、TGF-β信号通路、Notch信号通路等被认为是调控EMT过程中转录因子表达的主要通路。

这些信号通路通过调节转录因子的表达或活性，进而影响细胞的转变。

三、EMT相关转录因子在癌症中的作用1. 促进癌细胞浸润和转移：EMT过程中，上皮细胞失去细胞间连接，细胞形态发生改变，细胞间质增加，这些变化使癌细胞具有更好的浸润和转移能力。

2. 逃避免疫监视：EMT过程中，癌细胞表面的抗原表达减少，细胞免疫的识别和清除能力降低，从而使癌细胞逃避免疫监视，增加了其存活和迁移的能力。

3. 耐药性的产生：EMT过程中，癌细胞的细胞外基质增加，细胞内药物转运通道改变，这些变化导致了癌细胞对药物的耐药性增加，从而使癌症治疗变得更加困难。

四、未来的研究方向对于EMT相关转录因子的研究仍然处于初级阶段，还有许多问题有待解答。

例如，转录因子的调控机制是否还有其他的信号通路参与？EMT过程中转录因子与其他调控因子之间是否存在交叉作用？这些问题的解答将有助于更好地理解细胞转变和癌症发生发展的机制。

RNAi抑制人大肠癌LOVO细胞Bmi-1基因的表达

RNAi抑制人大肠癌LOVO细胞Bmi-1基因的表达

RNAi抑制人大肠癌LOVO细胞Bmi-1基因的表达卢敏;沙卫红;王启仪【摘要】目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bmi-1基因表达对人大肠癌细胞株LOVO增殖和侵袭力的影响及机制.方法将化学法合成的针对Bmi-1 mRNA不同位点设计的3对siRNA序列(siR-NA1～3)和1对带有荧光标记的FAM-siRNA(siRNA4)转染至人大肠癌LOVO细胞,荧光显微镜下观察siRNA的转染效率,QRT-PCR检测Bmi-1 mRNA表达抑制作用,Western Blot检测Bmi-1蛋白表达变化,MTT法检测LOVO细胞体外增殖变化,小室侵袭实验检测LOVO细胞侵袭能力.结果利用荧光标记的Oligo观察到siRNA转染效率达70％.siRNA1对mRNA表达抑制率最高,从而筛选出沉默效应最强的siRNA序列为siRNA1.siRNA1转染组LOVO细胞Bmi-1蛋白表达,增殖及侵袭力明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论化学合成的靶向Bmi-1 siRNA转染人大肠癌LOVO细胞能有效抑制Bmi-1的mRNA和蛋白质表达水平,Bmi-1基因的RNA 干扰可有效抑制人大肠癌LOVO细胞的增殖和侵袭能力.%Objective To investigate the mechanism and effect of small interfering RNA (siRNA) on Bmi-1 in the human colorectal carcinoma LOVO cells. Methods Three si RNA sequences targeting Bmi-1 (siRNAI, siRNA2, siRNA3), a fluorescein-labeled double-stranded RNA (dsRNA) oligomer (siRNA4), and the negative control were chemically synthesized. All siRNA sequences were transinfected into LOVO cells. Inverse microscopy was used to observe the efficacy of transinfecion. Bmi-1 mRNA expression and protein expression were detected by real time quantitative PCR (QRT-PCR) and Western blot, respectively. The proliferation and invasion of LOVO cells were detected byMTT and transwell invasion assay, respectively. Results The efficacy of transfection was 70%. The Bmi-1 mRNA expression inhibition rate of siRNAI was the most effective, and therefore was selected to interfere with the expression of Bmi-1 gene. The Bmi-1 protein expression and cell proliferation and invasion were significantly fewer than that in the control group and the blank group, P < 0.05. Conclusions The siRNA targeting on Bmi-1 gene could not only inhibit the Bmi-1 mRNA and protein expression in the human colorectal carcinoma LOVO cells, but also could restrain the proliferation and invasion of human colorectal carcinoma LOVO cells.【期刊名称】《现代消化及介入诊疗》【年(卷),期】2011(016)006【总页数】5页(P362-366)【关键词】大肠癌;Bmi-1;小干扰RNA;细胞增殖;肿瘤浸润【作者】卢敏;沙卫红;王启仪【作者单位】510080 广州医学院;510080 广东省人民医院,广东省医学科学院,消化内科;510080 广东省人民医院,广东省医学科学院,消化内科【正文语种】中文原癌基因 Bmi-1（B-cell specific moloney murine leukemia virus insertion site-1,Bmi-1）是多梳基因家族（polycomb group,PcG）的一员，属于细胞周期和增殖相关的转录抑制因子，与细胞增殖及肿瘤的发生密切相关，在许多肿瘤中存在Bmi-1基因的高表达[1-3]。

Survivin靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用

Survivin靶向siRNA抑制大肠癌细胞增殖的作用


（ 摘要靶 、ｖ ｉ Ａ重组表达载体 ，研究其对人大肠癌 细胞 生长的抑制作用 。方法 Ｒ
细胞增殖 的抑制作用 。结果
构建 ｓｒ ｕ—
ｖ ｉ 向 ｓ ＮＡ并转染 结肠癌细胞 ，通过 Ｒ －Ｃ ｉｎ靶 ｖ ｉ Ｒ Ｔ Ｐ Ｒ和 Ｗｅｔｍ ｌｔ ｓ ｅ ｂｏ 方法 检测 ｓ ｒｉｎ的表达 ，采用 Ｍｒ ｕｖｖ ｉ Ｔ法检测 ｓ ＮＡ对 ｉ Ｒ
ｔ ｇｓ ｒ ｉｉ ｅ ｅｗａ ｏ ｓｒ ｃｅ ｎ ｒ ｎ ｆｃｅ ｎ ｏ ｈ ｍａ ｏ ｏ ａ ｃ ｒｃ Ｉ ． ｅｅｆｃ ｆｓ 之 ｉ ｕ ｖｖｎ ｇ ｎ ｓｃ ｎ ｔｕ ｔ ｄａ ｄｔａ ｓｅ ｔｄ ｉ ｔ ｕ ｎ ｃ ｌｎｃ ｎ ｅ ｅｌ Ｔｈ ｆｅ ｔ ｉ ＮＡ ｓ ｎ ｓ ｏ Ｉ ｗａ
ｇ ｎ ｎ ｏｒ ｓ ａ ｃ ｓｉ ｈｂ ｔ ｇｅ ｆｃ ｎ ｈ ｍ ａ ｏｏ ａ ｃ ｒｃ ｌ ｐ ｏｉｅａ ｉｎ ｅ ｅａ ｄ ｔ ｅ ｅ ｒｈ ｉ ｎ ｉｉ ｎ ｆｅ ｔｏ ｕ ｎ ｃ ｌｎ ｃ ｎ ｅ ｅｌ ｒ ｌ ｒ ｔ ．Ｍ ｜ ｈ ｄ ｉ ｔ ｉ ｆ ｏ ｅ ０ ｓＳＲＮＡ ａ ｇ ｔ ｔ ｔｒ ｅ—
［ 关键词］ Ｓ ｎｉｉ； Ｒ ｕ ， ｎ ＮＡ干扰 ； 基 因治疗 ｖ
（ 中图 分 类 号 ］ Ｒ７Ｏ ５ ３ ． ［ 献 标 识 码 ］ Ａ 文 Ｄ ：１． ８ ０ ｚｚｈ ２ ０． Ｏ ． Ｏ １ ０Ｉ ０ ３ ７／ｇｚ ｘ Ｏ８ ６ Ｏ
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（ 中科技大学同济医学院附属协和 医院普外科 ，武汉 华 ４０２ ； ３ ０２ 华 中科技大学同济医学 院病原生物系微生物学教研 室，武汉 ４ Ｏ３ ３ Ｏ ０）
小细胞肺癌中Notch1信号通路、ASCL1与EMT关系研究进展

小细胞肺癌中Notch1信号通路、ASCL1与EMT关系研究进展

小细胞肺癌中Notch1信号通路、ASCL1与EMT关系研究进展周怡然;辛宇;陈骏【摘要】小细胞肺癌(SCLC)是人类常见恶性肿瘤之一,其具有转移率和复发率高、对初始化疗敏感、易获得化学耐药等特征.上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肿瘤细胞发生侵袭、转移前重要的细胞表象,EMT的发生与多种细胞因子、信号传导通路及转录因子有关.尽管Notch途径激活在非小细胞肺癌(NSCLC)中起着致癌的作用,但在神经内分泌肿瘤(neuroendocrine tumors,NET)中,Notch通路激活抑制肿瘤生长.在SCLC中,Notch1通路激活可以诱导产生E-钙黏蛋白(E-Cadherin),增强细胞的粘附,诱导间质-上皮转化,从而抑制EMT过程.ASCL1(achaete-scute complex homologue 1)是SCLC一种系特异性基因,其编码的转录因子同样具有促进神经内分泌分化、EMT的功能.Notch1信号通路可以抑制ASCL1的转录,同时也可对ASCL1进行转录后调节.因此,可通过激活Notch1信号通路、抑制ASCL1表达从而抑制SCLC的发生、侵袭和转移.【期刊名称】《大连医科大学学报》【年(卷),期】2018(040)003【总页数】5页(P270-273,277)【关键词】SCLC;Notch1信号通路;ASCL1;EMT【作者】周怡然;辛宇;陈骏【作者单位】大连医科大学附属第二医院肿瘤科,辽宁大连116027;大连医科大学附属第二医院肿瘤科,辽宁大连116027;大连医科大学附属第二医院肿瘤科,辽宁大连116027【正文语种】中文【中图分类】R734小细胞肺癌(SCLC)是各种类型肺癌中恶性程度最高的肿瘤，约占所有肺癌的15%～20%，其5年生存率<6%[1-2]。

过去几十年中，SCLC的一线化疗方案仍以顺铂或卡铂加依托泊苷为主，尽管其暂时对放化疗敏感，但很快出现复发和转移[3-5]。