食用菌栽培学实验指导书
(请仔细阅读实验内容步骤,每组必须完成实验,每次实验实习签到制,学习委员负责签到，实验分组按照调整后的快速繁殖实验分组)
1.资源方向六个实验，发酵两个，选前两个！
2.资源的第一个已经做完（培养基我们已陪完，做后五个，其中第三个不做，到时候改蘑菇组织分离）
3、发酵方向的实验不用做，直接抄报告就行
前言
1．实验总体目标《食用菌栽培》是农学、生物技术、食品科学与工程三个专业的选修课程。根据课程性质要求，在实践教学中，注重基本技术的实训和制种能力、栽培能力的培养，主要任务是完成食用菌生产技术的操作训练，掌握制种中的基本技术和方法，具备制作母种、原种和栽培种的能力；掌握食用菌生产中的主要技术和病虫害防治技术，具备当前主栽品种的栽培能力和生产经营能力。培养学生具备独立进行食用菌生产的能力。
⒉适用专业年级：农学，生物技术，食品科学与工程；第5学期
⒊实验课时分配
实验项目实验
要求
实验
类型
每
组
人
数
实验
学时
实验一母种培养基的制备必做验证 5 3 实验二无菌操作与母种转接扩繁必做综合 3 3 实验三组织分离与孢子分离培养技
术（这个实验不做，到时候改做蘑菇
组织分离）
必做综合 3 3 实验四原种与栽培种的制种技术必做综合 5 3 实验五平菇栽培技术与管理方法必做探索 5 4
4. 实验环境：环境洁净，用房较多。食用菌生产最怕污染，需要洁净的环
境条件；贮料、配料、灭菌、接种、发菌、出菇等对环境要求各不相同，需要相
对隔离。
5. 实验总体要求：本实验体系为学生独立进行食用菌生产能力所必需的最
低要求。学生必须掌握每个实验的主要技术要点。
6. 本课程的重点、难点及教学方法建议
（1）重点：无菌操作技术，平菇栽培技术与管理方法
（2）难点：无菌操作技术，出菇管理
（3）教学方法建议：对无菌操作多进行严格训练，对各个实验技术要点进行抽查考核，对平菇栽培成立兴趣小组，由兴趣小组负责出菇管理。
实验一母种培养基的制备（培养基已配完，大家直接去把木耳菌种和观赏
性平菇接到PDA培养基上即可）
一、实验目的：使学生掌握母种培养基的制备技术、试管棉塞的制作技术、试管捆扎技术等。
二、实验主要设备及使用要求
（1）仪器：电磁炉，煮液锅，天平，高压灭菌锅，小刀，试管架，漏斗，烧杯，剪刀
（2）耗材：马铃薯、葡萄糖、琼脂、微生素B1、磷酸二氢钾、硫酸镁、棉花、棉线、扎绳、报纸、玻棒
（3）使用要求：注意安全；人离开前要关电关窗，整理台面，打扫卫生。
三、实验原理、方法和手段
用琼脂使供给食用菌菌丝生长的经高温杀菌的液体培养基固化试管中，使食用菌菌种在无菌条件下的试管中培养生长。
四、实验内容与步骤
１、称量：按不同母种对营养要求的不同，选择所需配比称量出各种营养物质。
２、调配：将去皮、挖掉芽眼的马铃薯（200g）或洋葱、稻草、胡萝卜、子实体等切成小块，放入小钢筋锅或大烧杯中，加入一定量的水。用文火煮沸３０分钟左右，双层纱布过滤，取汁；玉米粉或高粱粉加水后，一般加热至７０度左右。并保持６０分钟，过滤取汁。麦芽则加热至６０－６２度，保持６０分钟，过滤取汁。其中玉米粉或高粱粉等淀粉类物质应先加少量水调成糊状，以避免成团；难溶物质应先加水、加热溶化。加热过程中不断用玻棒搅拌以免糊锅。
３、加入琼脂溶解：先将滤液补足失水，再将琼脂（20g）预湿后加入滤液中，文火加热搅拌至全部溶化。
４、加入配方中其他营养物质：如糖（20g）、微生素B1（10mg）、磷酸二氢钾（3g）、硫酸镁（1.5g）等。
５、酸碱度测定与调整：充分搅拌均匀，用酸碱试纸测定酸碱度，并按食用菌所需的最适酸碱度进行调整。
６、过滤分装：用纱布过滤，取汁趁热分装。试管规格一般以口径ｘ试管长度＝１８ｍｍｘ１８０ｍｍ为宜，培养基的分装量应为试管长度的１／５或１／４.操作时应尽量防止培养基黏在试管口或壁上，若已黏上应立即用纱布或脱脂棉擦净。
７、加棉塞、包扎：装好培养基的试管应及时塞上棉塞。棉塞要用未脱脂的皮棉。棉塞要大小均匀、松紧适宜，长度一般为４.５cm。一般要求２／３留在试管内，１／３露在试管外。然后把塞好棉塞的试管，每７支捆扎成一把，用牛皮纸或双层报纸包扎，再用皮套扎紧或棉线捆好，放入高压锅内灭菌。
８、灭菌：用高压蒸气锅进行灭菌。步骤为：给高压锅补水，加热升温压力至０．０５ＭＰａ时，放汽阀打开，排冷气至压力为０，关闭排气阀继续升温，压力至０．１５ＭＰａ，维持２０－３０分钟，关闭热源，至压力降至０．９、摆斜面：灭菌完毕，让其压力和温度自然降至０后，立即取出培养基，在清洁的台面或桌面上倾斜摆放，摆成斜面，一般斜面长度以达试管全长的１／２－２／３为宜。
10、放置几天后，观察有无杂菌，判断灭菌是否彻底。
五、思考题
1、为什么要用未脱脂的皮棉？
2、为什么要用多层纱布过滤？
3、为什么要调节pH值？
4、为什么要每7支捆扎成一把？
六、注意事项及其它说明
1、马铃薯要去皮、挖掉芽眼
2、加热过程中不断用玻棒搅拌以免糊锅。
3、高压锅使用前要补水
4、自动高压锅要注意设置温度与时间
5、非自动高压锅要在加温至102度左右时放气。将锅内冷气放掉。
实验二无菌操作与母种转接扩繁
一、实验目的
使学生掌握无菌操作技术和母种转接扩繁培养技术等。
二、实验主要设备及使用要求
（1）仪器：超净工作台，接种房，调温生物培养箱，接种铲，酒精灯，打火机
（2）耗材：灯用酒精、医用酒精、甲醛、高锰酸钾、百菌清烟雾剂、速克灵烟雾剂、斜面试管培养基
（3）使用要求：①注意安全；人离开前要关电关窗，整理台面，打扫卫生。
②超净工作台在使用前要检查空气通道是否有遮盖。③超净工作台在使用时要保持一定风力向外吹。
三、实验原理、方法和手段
使学生掌握无菌操作技术和母种转接扩繁培养技术等。
四、实验内容与步骤
1、接种环境的消毒
在分离菌种前，首先对接种环境（接种箱或接种室）进行严格的消毒。
①接种箱消毒：一般以甲醛高锰酸钾熏蒸，每立方米空间用甲醛6～10毫升，高锰酸钾4～5克。先将高锰酸钾放入玻璃杯或搪瓷钵，后加进甲醛溶液(容器的容积大小，以两种药物反应后沸腾液不外溢为准)，使之产生甲醛气体，密闭0.5～1小时。接种前同时打开紫外线灯消毒半小时后开始接种。
②接种室消毒：根据容积的大小，每立方米用甲醛(含量40%)20毫升，生石灰20克，浓硫酸2毫升，混合于陶瓷容器内，很快即气化。消毒时，培养室温度保持24℃左右，密闭12小时以上。或燃放百菌清烟雾剂。
③超净工作台消毒：打开超净工作台上的紫外线灯和风扇，半个时间后关闭紫外线灯，再开始接种操作。
2、母种扩繁
接种前，手和试管口要用75%的酒精棉球揩擦。接种时，点燃酒精灯，使火焰周围空间成为无菌区，然后左手平行并排拿起母种试管和供接种用的斜面试管，两支试管斜面要向上，管口要齐平。另一手持接种针。垂直或倾斜在火焰上烧红，用右手的小指、无名指和手掌，在火焰旁边分别夹下两管的棉塞，并使酒
