淀粉酶型时间温度指示卡

淀粉酶水解淀粉的实验操作过程
掌握淀粉酶水解淀粉的实验方法，了解淀粉水解的过程。

二、实验仪器与试剂：
仪器：恒温水浴器、分光光度计。

试剂：淀粉、淀粉酶。

三、实验步骤：
1.取一定量的淀粉加入到试管中，加入足量的蒸馏水溶解，制成淀粉溶液。

2.将淀粉溶液分别加入到三个试管中，每个试管中加入淀粉酶不同的量，分别为0.1ml、0.2ml、0.3ml。

3.将三个试管放入恒温水浴器中，温度控制在37℃，反应时间为30分钟。

4.取出三个试管，将试管中的淀粉水解产物转移到比色皿中，加入一定量的碘液，使其变为蓝黑色。

5.分别将三个比色皿放入分光光度计中测定吸光度值。

四、实验结果：
根据实验结果可以得出以下结论：
1.随着淀粉酶加入量的增加，淀粉的水解效率也随之增加。

2.淀粉酶可以将淀粉水解为糖类物质，使淀粉的蓝黑色变为淡黄色或无色。

五、实验注意事项：
1.淀粉酶应储存于低温下，避免受热变性。

2.操作时应注意卫生，避免交叉污染。

3.实验时需准确测量试剂的用量，避免加入过多或过少。

前言为使临床检验操作规范化，指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作，保证检验质量，特制定本操作规程。

本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订，作为本产品的标准操作程序。

本规程从2007年5月2日起实施，每2年复审1次。

本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。

本规程起草单位：伊利康生物技术有限公司技术部。

本规程主要起草人：蒙凯、蔡其浩。

本规程首次起草。

目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数α-淀粉酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请：血清α-淀粉酶（α-Amyiase,缩写Amy）测定；组合项目申请：肝功能测定。

临床医生根据需要提出检验申请。

2.标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后。

体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。

注意有无应用影响测试项目的药物。

此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。

应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。

2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。

在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带，不抗凝，置普通试管中。

α-淀粉酶活力检测操作规程1酶活定义1g固体酶粉（或1mL液体酶），于60℃、pH=6.0条件下，1h液化1g可溶性淀粉，即为1个酶活力单位，以u/g(u/mL)表示。

2原理在一定温度和PH值条件下，α-淀粉酶将淀粉分子链中的α-1，4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮色的特异性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活力有关，故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。

3仪器和设备3.1 分析天平：感量0.0001g3.2 精密pH计：精确至0.013.3 分光光度计：应符合GB9721有关规定3.4 电热恒温水浴锅：30～100℃，±0.2℃3.5 计时器：每小时误差不超过5秒4试剂与溶液4.1 原碘液：称取碘（I2）11g、碘化钾（KI）22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500mL，贮于棕色瓶中。

4.2 稀碘液：吸取原碘液2.00ml，加碘化钾20g，用水溶解并定容至500mL，贮于棕色瓶中。

4.3 20g/L可溶性淀粉溶液：称取可溶性淀粉2.000g，精确至0.001g，用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾入70mL沸水中，然后，以30ml水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100mL。

此溶液需要当天配置。

4.4 磷酸缓冲液（pH=6.0）称取磷酸氢二钠（Na2PO4·12H2O）45.03g、柠檬酸（C6H8O7·H2O）8.07g，使水溶解并定容至1000mL。

配好后用pH计校正。

5 分析步骤5.1待测酶液的制备：称取酶粉1 g，精确至0.0002g（或吸取液体酶1.00mlL），先用少量的磷酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上请液小心倾入容量瓶，沉渣部分在加入少量缓冲液，如此捣研3～4次，最后全部移入100mL容量瓶中，用缓冲液定容到刻度（将估计酶活力除以4，即酶活理应在3.7～5.6u/mL范围内），摇匀，通过4层纱布过滤，滤液供测定用。

实验a-淀粉酶对淀粉水解作用的观察
一、实验原理：
a-淀粉酶（EC 3.2.1.1）是一种内切淀粉酶，可将淀粉链水解为不同长度的多聚葡萄糖。

随着降解时间延续，多聚糖链不断变短，最终生成不同聚合度的寡聚糖和分支低聚糖的混合物。

直链淀粉遇碘变蓝色，不同降解度的淀粉，谓之糊精。

其与碘呈色各异。

a-淀粉酶降解直链淀粉过程如下：
水解过程：淀粉→蓝糊精→红糊精→无色糊精→麦芽糖→葡萄糖
（蓝色）（蓝色）（红色）（无色）
a-淀粉酶水解淀粉的终产物约1/3是G1～G6；37.5%是G7～G12；其余是分子更大一些的低聚糊精。

后两类产物包括各种分支糊精，即a-糊精。

工业用酶需Ca2+，一般反应温度70℃以上，pH6～7。

二、实验步骤
1
70℃水浴→每过2-3min（统一为2min）→吸取反应液5滴于点滴板小穴中→加0.5%碘液1滴，混匀→观察。

2、反应温度对a-淀粉酶的影响：
每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至生成无色糊精为止。

（控制酶量，以控制反应能在15min～20min完成为宜。

）
提问：为什么要保温10min再加入酶液？为什么要间隔1min再加入？
3
每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至生成无色糊精为止。

4、Ca2+对a-淀粉酶的影响：
准备：1支试管→加a-淀粉酶2mL→加0.1 mol /L EDTA 0.2 mL→摇匀→得去Ca2+ 酶液
每间隔2min→取反应液5滴→加碘液1滴→观察→直至加酶液一管生成无色糊精为止。

三、根据实验现象，分析整理实验结论。

淀粉酶活力测定是生物化学实验中常见的一个实验方法，用于评估淀粉酶的活性。

淀粉酶是一种酶类蛋白质，它能够加速淀粉的水解，将淀粉分解成较小的碳水化合物。

在实际的淀粉酶活力测定实验中，有一些注意事项是非常重要的，这些注意事项可以帮助实验者获得准确的实验结果，并保障实验的顺利进行。

在进行淀粉酶活力测定实验时，首先要注意的是实验材料的准备。

实验材料包括淀粉溶液、淀粉酶溶液、碘液等。

这些溶液的浓度和稀释比例应该严格按照实验方法要求进行准备。

另外，实验器材的清洁和消毒也是非常重要的，以避免外界因素对实验结果的影响。

在实验过程中需要控制好反应的时间和温度。

淀粉酶活力会受到温度的影响，一般来说，在适宜的温度下，淀粉酶活力会较高。

在实验过程中需要控制好反应的温度，以确保淀粉酶能够发挥最大的活性。

反应时间也需要严格控制，以保证反应达到平衡状态，得到可靠的数据。

另外，实验中还需要注意淀粉酶的浓度和pH值的影响。

淀粉酶的活性会随着浓度的改变而改变，因此需要选择适宜的淀粉酶浓度进行实验。

pH值对淀粉酶活性也有一定的影响，需要在实验中对此进行控制和调节。

实验结果的分析和处理也是非常重要的。

实验者需要根据实验结果进行准确的数据记录和分析，得出准确的结论。

在文章的总结中，需要对实验结果进行回顾性的总结，指出实验中可能存在的误差和不确定性，并提出改进的建议。

这样能够使实验者对淀粉酶活力测定过程有一个全面、深刻和灵活的理解。

回顾本次文章的内容，我们首先对淀粉酶活力测定的注意事项进行了全面评估，从实验材料的准备、反应时间和温度的控制、淀粉酶浓度和pH值的影响，以及实验结果的分析和处理等方面进行了详细阐述。

在总结中，我们对实验过程中可能存在的误差和不确定性进行了分析，并提出了改进的建议，以期得到更准确的实验结果。

个人观点上认为淀粉酶活力测定是一个复杂而重要的实验方法，需要实验者具备扎实的实验操作技能和深刻的实验原理理解。

只有这样，才能够保证实验结果的可靠性和准确性。

一、实验目的1. 了解淀粉酶的生物学特性及其在生物体内的重要作用；2. 掌握淀粉酶活性测定的原理和方法；3. 通过实验，探究温度、pH值等因素对淀粉酶活性的影响。

二、实验原理淀粉酶是一种能够水解淀粉的酶，其活性高低可以反映酶的催化能力。

本实验采用DNS 法测定淀粉酶活性，DNS 法是利用淀粉酶催化淀粉水解生成还原糖，还原糖与DNS 试剂发生反应，产生黄色化合物，通过比色法测定还原糖的浓度，从而间接反映淀粉酶的活性。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 淀粉酶（市售）- 淀粉溶液- DNS 试剂- 碘液- 酚酞指示剂- 蒸馏水- pH 试纸- 温度计2. 实验仪器：- 721分光光度计- 磁力搅拌器- 电子天平- 试管- 移液器四、实验步骤1. 配制淀粉酶溶液：将市售淀粉酶按照说明书配制一定浓度的淀粉酶溶液。

2. 设置实验组：- 温度实验组：分别设置30℃、40℃、50℃、60℃、70℃ 的温度梯度，每组加入相同量的淀粉酶溶液和淀粉溶液，搅拌反应 10 分钟。

- pH 值实验组：分别设置 pH 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 的 pH 值梯度，每组加入相同量的淀粉酶溶液和淀粉溶液，搅拌反应 10 分钟。

3. DNS 反应：- 取反应后的溶液，加入 DNS 试剂，沸水浴加热 5 分钟。

- 取出后，加入 1 滴酚酞指示剂，继续沸水浴加热 5 分钟。

4. 比色：- 使用 721 分光光度计在 540 nm 波长下测定溶液的吸光度值。

5. 数据处理：- 根据标准曲线，计算各组反应生成的还原糖浓度。

- 比较各组实验结果，分析温度、pH 值等因素对淀粉酶活性的影响。

五、实验结果与分析1. 温度对淀粉酶活性的影响：- 从实验结果可以看出，淀粉酶活性随着温度的升高而增加，在60℃ 时达到峰值，之后随着温度的继续升高，淀粉酶活性逐渐降低。

2. pH 值对淀粉酶活性的影响：- 从实验结果可以看出，淀粉酶活性在 pH 6.0 时达到峰值，之后随着 pH 值的继续升高或降低，淀粉酶活性逐渐降低。

α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书微量法UPLC-MS-6004100T/48S试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×1瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1支2-8℃保存试剂三液体30mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入6.25mL试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存8周；2、标准品：10mg淀粉标准品。

临用前加10mL试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成1mg/mL淀粉标准液，2-8℃保存四周。

淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。

α-淀粉酶(EC3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。

α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。

因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。

Unhydrolyzed Starch+Iodine Complex（570nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

酶标仪/可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：称取约0.1g样本，加1mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；6000g，室温离心10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。

2、液体：直接检测。

（若有浑浊则离心后进行测定）二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到570nm，分光光度计蒸馏水调零。

α-淀粉酶活力检测操作规程1酶活定义1g固体酶粉（或1mL液体酶），于60℃、pH=6.0条件下，1h液化1g可溶性淀粉，即为1个酶活力单位，以u/g(u/mL)表示。

2原理在一定温度和PH值条件下，α-淀粉酶将淀粉分子链中的α-1，4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮色的特异性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活力有关，故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。

3仪器和设备3.1 分析天平：感量0.0001g3.2 精密pH计：精确至0.013.3 分光光度计：应符合GB9721有关规定3.4 电热恒温水浴锅：30～100℃，±0.2℃3.5 计时器：每小时误差不超过5秒4试剂与溶液4.1 原碘液：称取碘（I2）11g、碘化钾（KI）22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500mL，贮于棕色瓶中。

4.2 稀碘液：吸取原碘液2.00ml，加碘化钾20g，用水溶解并定容至500mL，贮于棕色瓶中。

4.3 20g/L可溶性淀粉溶液：称取可溶性淀粉2.000g，精确至0.001g，用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾入70mL沸水中，然后，以30ml水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100mL。

此溶液需要当天配置。

4.4 磷酸缓冲液（pH=6.0）称取磷酸氢二钠（Na2PO4·12H2O）45.03g、柠檬酸（C6H8O7·H2O）8.07g，使水溶解并定容至1000mL。

配好后用pH计校正。

5 分析步骤5.1待测酶液的制备：称取酶粉1 g，精确至0.0002g（或吸取液体酶1.00mlL），先用少量的磷酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上请液小心倾入容量瓶，沉渣部分在加入少量缓冲液，如此捣研3～4次，最后全部移入100mL容量瓶中，用缓冲液定容到刻度（将估计酶活力除以4，即酶活理应在3.7～5.6u/mL范围内），摇匀，通过4层纱布过滤，滤液供测定用。