山腊梅叶醇提物对慢性应激抑郁模型小鼠行为学及脑内单胺类神经递

２０１５年５月　第３７卷第５期　中成药　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｐａｔｅｎｔ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｍａ＿ｖ　２０１５　

Ｖｏ１．３７　Ｎｏ．５　

袁慧．浅议脂肪细胞因子与胰岛素抵抗［Ｊ］．科技致富　向导，２０１１，１９（３０）：２２．　张嫒，李英敏，冯月秋，等．血清脂联素水平与肥胖、　胰岛素抵抗的关系探讨［Ｊ］．山东大学学报：医学版，　２００９，４７（６）：１２４—１２７．　杨智勇，赵晟，夏婷婷，等．脂联素、核因子－．ｃＢ在胰　岛素抵抗大鼠表达［Ｊ］．解剖科学进展，２００７，１３（２）：　１３１．１３３．　崔丽娟，都健，曾芙蓉，等．胰岛素抵抗大鼠脂联素与　ＩＫＫｍＲＮＡ表达的相关性研究［Ｊ］．中国医科大学学报，　２００７，３６（６）：９６４０６６．　Ｓｔｅｐｐａｎ　Ｃ　Ｍ，Ｂａｉｌｅｙ　Ｓ　Ｔ，Ｂｈａｔ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｒｅｓｉｓｔｉｎ　ｌｉｎｋｓ　ｏｂｅｓｉｔｙ　ｔｏ　ｄｉａｂｅｔｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００１，４０９（６８１８）：　３０７－３１２．　ＬｉｕＹ，ＷａｎｇＱ，ＰａｎＹ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆｏｖｅｒ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｒｅ－　ｓｉｓｔｉｎ　ｏｎ　ｇｌｕｃｏｓｅ　ａｎｄ　ｌｉｐｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖ　Ｓｃｉ　Ｂ，２００８，９（１）：４４－５０．　王婉奕，朱森，杨吉春，等．抵抗素与肥胖和２型糖尿　病［Ｊ］．生理科学进展，２００９，４０（２）：１５７・１６０．　Ｐａｌａｎｉｖｅｌ　Ｒ，Ｓｗｅｅｎｅｙ　Ｇ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｕｐｔａｋｅ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｒｅｓｉｓｔ　ｉｎ『Ｊ］．ｎ　Ｌｅｔｔｅｒ，２００５，５７９（２２）：５０４９－５０５４．　朱良荣，管小琴，祁明美，等．抵抗素在非酒精性脂肪肝　大鼠胰岛索抵抗中的作用［Ｊ］．中国生物制品学杂志，　２０１２，２５（２）：１８５—１８９．　马毅超，陈民利．ＮＦ—ＫＢ信号通路与胰岛素抵抗［Ｊ］．中国　比较医学杂志，２０１３，２３（８）：６１－６６．　王丽静，张尉，刘小莺，等．地塞米松诱导３１３．Ｌ１脂　肪细胞胰岛素抵抗模型的建立［Ｊ］．福建医科大学学报，　２００７，４１（３）：２８２－２８４．　Ｑｉ　Ｍ　Ｍ，Ｇｕａｎ　Ｘ　Ｑ，Ｚｈｕ　Ｌ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｅｓｉｓｔｉｎ　ｏｎ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｆａｃｔｏｒ－－ＫＢ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ－ａ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｈｅ－　ｐａｔｉｃ　ｓｔｅａｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｚｈｏｎｇｈｕａ　Ｃａｎ　Ｂｉｎｇ　Ｚａ　Ｚｈｉ，２０１２，　２０（１）：４０　．　Ｒｉｂｅｉｒｏ　Ｐ　Ｓ，Ｃｏｒｔｅｚ—Ｐｉｎｔｏ　Ｈ，Ｓｏｌａ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ　ａｐｏｐｔｏ・　ｓｉｓ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｄｅａｔｈ　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＦ—ｋａｐｐａＢ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ　ｏｆ　ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ａｎｄ　ａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｍｅｒｏｌ，２００４，９９（９）：１７０８—１７１７．　

山腊梅叶醇提物对慢性应激抑郁模型小鼠行为学及脑内单胺类神经递　质的影响　

王玉婷　，　丁　虹　，　邱春玉　，　宋　伟　，　（１．湖北科技学院药学院，湖北咸宁４３７１００；　王　诗　２．武汉大学药学院，湖北武汉４３００７０）　

摘要：目的探讨山腊梅叶醇提物的抗抑郁作用及可能机制。方法以氟西汀为阳性对照组，采用慢性不可预知性刺　激抑郁模型造模，用悬尾试验、强迫游泳试验和旷场试验进行行为学研究，并用高效液相色谱一荧光检测方法测定其　脑内单胺类神经递质５・羟色胺（５－ＨＴ）及去甲肾上腺素（ＮＥ）的含有量，观察模型小鼠给药前后的变化。结果模　型组小鼠水平活动和垂直活动均显著下降，强迫游泳不动时间和悬尾试验不动时间明显增加，脑内的５－ＨＴ及ＮＥ含　有量降低。山腊梅叶醇提物（１０　ｇ／ｋｇ、５Ｏ　ｇ／ｋｇ）能显著改善模型小鼠的行为学变化，并增加小鼠脑内单胺类神经递　质５－ＨＴ及ＮＥ的含有量。结论山腊梅叶醇提物通过调节中枢单胺类神经递质具有一定抗抑郁作用。　关键词：山腊梅叶；慢性应激抑郁模型；抑郁症；行为学；单胺类神经递质　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标志码：Ｂ　文章编号：１００１－１５２８（２０１５）０５—１０８７－０４　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１５２８．２０１５．０５．０３６　

抑郁症是一种容易被忽略的常见精神疾病，主要表现　为持续的情绪低落，严重者可出现自杀念头和行为。据　ＷＨＯ保守估计，抑郁症在人群中患病率为３％，患者自杀　率高达１２％～１４％　，严重地危害到了社会和人类健康。　目前对于抑郁症的发病机理研究，认为除了心理－社会因素　和遗传因素外，主要是由于患者体内单胺类递质失衡所致。　目前使用的抗抑郁药物大部分都是以单胺递质为主要机制，　如选择性５－ＨＴ再摄取抑制剂氟西汀　Ｊ，治疗效果明显，　但长期服用产生的副作用不能忽视。因而从天然植物中寻　找治疗神经精神类疾病的药物成为研究的热点　。　山腊梅Ｃｈｉｍｏｎａｎｔｈｕｓ　ｎｉｔｅｎｓ　Ｏｌｉｖ．为腊梅科腊梅属植　物，又名秋腊梅、毛山茶等，为江西原产植物，具有祛风　解表、清热解毒、醒脾化浊之功效　。早期的药理研究主　要集中挥发油及生物碱的药理作用，如预防感冒、镇咳祛　

收稿日期：２０１４－０３－１２　基金项目：湖ｊＥ省教育厅（ＸＤ２０１４２８２）　作者简介：王玉婷（１９８９一），女，硕士，助教，从事药理学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｉｎｔｙｕｗａｎｇｌ＠１６３．ｃｏｒｎ　｝通信作者：王诗（１９８４一），女，博士，讲师，从事药理学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｓｈｉ４１３＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ　１０８７　

叫　１＝１　纠　１＝　Ｈ　川　ｒＬ　［ｒＬ　ｒＬ　［　［ｒＬ　２０１５年５月　第３７卷第５期　中成药　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｐａｔｅｎｔ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｍａｖ　２０１５　Ｖｏ１．３７　Ｎｏ．５　

痰、消毒抑菌抗炎以及降压等作用，而其醇提物在精神疾　病方面的研究较少　ｊ，山腊梅叶的醇提物抗抑郁是否有作　用尚未见文献报道。　本研究用乙醇提取山腊梅叶得到山腊梅叶醇提物，通　过复制小鼠慢性应激抑郁模型，采用悬尾试验、强迫游泳　试验和旷场试验，观察山腊梅叶醇提物对小鼠行为学的影　响，并测定了小鼠脑内单胺类递质５－ＨＴ及ＮＥ的变化，初　步探讨了山腊梅叶抗抑郁作用机制，为其开发利用提供　依据。　１材料　１．１动物雄性昆明小鼠６０只，体质量２０～２５　ｇ（购自　湖北省疾控中心，许可证号ＮＯ．４２０００６００００２００２，动物合　格证号ＳＣＸＫ　２００８－０００５）。实验前小鼠适应环境一周。　１．２　药品与试剂　生理盐水；盐酸氟西汀片，批号　２０７９Ａ，礼来苏州制药有限公司生产，临用前用生理盐水　配制成混悬液；山腊梅叶购自成都荷花池中药材市场；其　他试剂均为分析纯。　１．３仪器　酶标仪，ＫＨＢ　ＳＴＹ６０（上海科华实验系统有　限公司）；水浴锅，ＨＨ－６００型电热恒温水箱（科华仪器有　限公司）；旋转蒸发仪，ＲＥ一２００２（上海东玺制冷设备有限　公司）；ＨＰＬＣ，ＬＣ－１０Ａｖｐ　ｐｌｕｓ（岛津公司）。　２方法和结果　２．１　山腊梅叶的醇提物称取山腊梅叶粉碎，按１：３的物　料比，加入９５％的乙醇，搅拌均匀，７０℃回流２　ｈ，倒出回　流液，再次１：３的物料比，加入９５％的乙醇７０℃回流２　ｈ，　收集两次回流液旋转蒸发成浸膏状得到山腊梅醇提物，配成　生药量为１０　ｋｇ的低剂量和５Ｏ　ｋｇ的高剂量溶液。　２．２小鼠分组造模及给药　２．２．１小鼠分组及给药正常昆明雄性小鼠６０只，２４　ｈ　禁水不禁食后，给予１％蔗糖水，测定１　ｈ内的消耗量。根　据蔗糖水消耗量随机分成５个组，每组１２只，即空白组、　模型组、山腊梅提取物高（５０　ｇ／　）、低（１０　ｇ／ｋｇ）剂量　组、阳性药氟西汀组（２　ｍｓ／ｋｇ）。造模同时给药，每日１　次，连续给药２１　ｄ。各组均按１．０　ｍＬ／１００　ｇ灌胃给药。模　型组和空白组给予生理盐水。　２．２．２小鼠造模　参照文献［６—７］方法，４℃冰水游泳　（５　ｒａｉｎ）、４５℃热烘（５　ｍｉｎ）、夹尾（１　ｒａｉｎ）、潮湿饲养　（潮湿垫料）、昼夜颠倒（２４　ｈ），禁食（２４　ｈ），禁水（２４　ｈ）等刺激随机安排到２１　ｄ内，每日于下午ｌ５：Ｏ０给予１　种刺激，各组动物均自由饮食。室温（２４±１）℃，相对湿　度（６０±１０）％。　２．３行为学测定在第７天、第１４天、第２１天进行旷场　试验、悬尾试验和强迫游泳试验。　２．３．１旷场试验参照文献［８］，取雄性小鼠６０只，随机　分成５组，每组１２只。按“２．２．１”项所写，每天１３：００　时分别灌胃给药。分别在第７、１４和２１天给药１　ｈ后进行　旷场试验。在安静环境中，将小鼠放入敞箱中心格中，记　录５　ｒａｉｎ运动情况（直立次数、水平格数）。直立次数以　双前爪同时抬起为准；水平穿格数以三只爪同时在一个格　子为穿越一个格子。　２．３．２悬尾试验　实验分组、给药剂量和给药时间等与　“２．３．１”项一致。分别在第７、１４和２１天给药１　ｈ后进行　悬尾试验，将小鼠尾端１　ｃｍ的部位贴在一木盒上，头朝　下，使小鼠前后左右均无攀抓的地方，一段时问后小鼠活　动减少，记录６　ｍｉｎ，其中前１　ｒａｉｎ不作记录，记录后５　ｍｉｎ　内小鼠悬尾不动时间　。　２．３．３强迫游泳试验实验分组、给药剂量和给药时间等　与“２．３．１”项一致。分别在第７、１４、２１天给药１　ｈ后进　行强迫游泳试验。将小鼠置于一个透明容器内（高度为２０　ｃｍ，直径为１４　ｃｍ），并保持水位在１２（３ｍ，水温（２５±２）　℃。总共在水中游６　ｍｉｎ，记录后５　ｍｉｎ内小鼠的不动时间　（不动时间定义为小鼠在水上漂浮没有四肢的挣扎，偶尔　移动仅是保持头部露在水面以上）　。　２．４山腊梅叶醇提物对慢性应激型小鼠脑内单胺类递质的　影响各组小鼠分别在在实验第２ｌ天强迫游泳试验完成　后，断头处死，迅速在冰上剥离大脑，称定质量后置组织　冷冻管中用液氮快速冷冻后，放人一７０℃冰箱保存至测　定。根据大脑组织的质量，加入预冷的０．１　ｍｏｌ／Ｌ过氯酸　（内含０．３　ｍｍｏｌ　ＥＤＴＡ二钠和０．５　ｍｍｏｌ亚硫酸钠），２　ｍＬ　ＤＨＢＡ，超声匀浆，１０　０００　ｒ／ｍｉｎ离心１０　ｍｉｎ，上清液　用于５一ＨＴ测定　。采用高效液相色谱－荧光检测器系统进　行测定，色谱条件为：色谱柱为４　ｍｍ×２５０　ｎｌｍ，Ｎｏｖａ．ｐａｋ　Ｃ　５　ｍ（武汉大学实验中心提供）；流动相为１５　ｍｍｏｌ　盐酸一乙酸钠缓冲液，ｐＨ　４．０（内含０．５％三乙胺，０．５　ｍｍｏｌ　ＥＤＴＡ二钠），体积流量０．６　ｍＬ／ｍｉｎ。　３结果　３．１　旷场试验造模给药后，模型组的水平和垂直自主活　动都显著低于空白组。与模型组相比，山腊梅叶醇提物低、　高剂量组明显增加了大鼠旷场试验水平穿格数和直立次数，　但随着给药时间的增加，效果逐渐减弱。详见表１和表２。　表１　山腊梅叶醇提物对旷场试验中小鼠水平方向移动格数的影响（　±　，　＝１２）