嗜人按蚊雌蚊消减cDNA文库的构建及分析

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嗜人按蚊雌蚊消减ｃＮＤＡ文库的构建及分析＊
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摘要：的目构建嗜人按蚊雌雄蚊差异表达ｅＮＡ文库。进一步筛选、隆嗜人按蚊雌雄蚊差异新基因奠定基础。Ｄ为克
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２００８，２（）４７
ＣｈｉｓｕｎａｎｅｅＪｒｌｏｆＺｏｏｓｓｏｎｏｅ
中国人兽共患病学报
６０３
文章编号：０２—２９（０８）７６３４１０６４２００ —００ —０
方法以嗜人按蚊为实验模型．分别将雌蚊和雄蚊作为Ｔ组和Ｄ组．用抑制消减杂交方法和ＴＡ克隆技术构建嗜人按蚊采／
差异表达ｅＮ文库。扩增正向消减ｅＡ文库获得３００余个阳性克隆．机挑取１０个克隆进行ＰＲ扩增，Ｏ的克隆ＤＡＤＮ０随０Ｃ９中均有２Ｏ１０ｂＯ～０ｐ的插入片段。测序显示．与冈比亚按蚊未知功能基因同源的克隆，除重复序列，到７０有去得２个ＥＴ序Ｓ列．中４其０与已知序列具有相似性．２个为新的ＥＴ序列。本项研究成功构建了嗜人按蚊雌蚊差异表达ｅＡ文库，得３ＳＤＮ获
了３２个新的ＥＴ序列。而为下一步筛选、隆嗜人按蚊性别差异新基因打下了基础。Ｓ从克关键词：嗜人按蚊；制差减杂交；别差异表达基因抑性中图分类号：３４１文献标识码：Ｒ８．Ａ
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构建cDNA文库

用被感染的蝗虫体液构建昆虫病原菌——绿僵菌的cDNA文库的方法摘要为了克隆在宿主中表达的真菌的基因，形成了构建被感染昆虫致病真菌的cDNA文库的方法。

这种方法根据病原菌的细胞结构和组成部分与宿主细胞的结构和组成部分存在明显的差别这个优势来设计的。

宿主体液细胞只含细胞膜，很容易被SDS/PK（蛋白激酶）降解掉，而真菌有细胞壁，能够保护细胞不被SDS/PK降解。

利用这种方法体液细胞被SDS/PK降解后释放出的动物的DNA和RNA然后进一步地被DNA 酶和RNA酶彻底分解。

因此，得到的生长在昆虫体液里的真菌不会被宿主的DNA和RNA 污染。

从被感染的体液里得到的纯化的真菌可以用来提取mRNA和构建cDNA文库。

用PCR和RT—PCR证实了真菌的mRNA的纯度，分别用宿主的特异性引物对和真菌的特异引物对，并且分析了用真菌构建的cDNA文库的克隆。

结果表明，真菌mRNA中没有发现真菌污染物DNA或RNA的存在。

从cDNA文库中随机选择cDNA克隆体用BlastX进行序列分析，没有发现与昆虫序列有显著相似的序列存在。

这个结果进一步证实了从宿主动物中纯化致病性真菌的方法是可靠的，从真菌中提取的mRNA适合于构建cDNA 文库和其他一些分子分析包括RT—PCR。

这个方法适用于其它一些致病性真菌和它们的宿主动物的研究。

关键词致病真菌，昆虫，mRNA提取，cDNA文库说明近年来，有很多关于致病性真菌如何通过昆虫表面侵染昆虫的报道，并且已基本弄明白了它的侵染机制。

然而很少有关于昆虫病原菌如何克服昆虫防御机制甚至进入后杀死昆虫的这方面知识的报道。

因此，分析昆虫宿主中真菌基因的表达有利于探索其发病机制。

目前，为了阐明真菌感染的机制，有好几种用来分析真菌基因体内表达的方法。

其中一种是构建三种cDNA文库（包括宿主和真菌混合的cDNA文库、健康宿主的cDNA 文库、真菌的cDNA文库），之后分析三种文库去寻找真菌侵染后表达的基因。

嗜人按蚊中肠单克隆抗体的制备及初步鉴定

嗜人按蚊中肠单克隆抗体的制备及初步鉴定李强;俞石芳;梁韶辉;谭峰;秦倩;潘长旺【期刊名称】《中国病原生物学杂志》【年(卷),期】2006(1)1【摘要】目的制备并鉴定抗嗜人按蚊中肠单克隆抗体杂交瘤细胞株。

方法用嗜人按蚊中肠做抗原,用细胞融合技术制备单克隆抗体,并采用ELISA法对单克隆抗体进行筛选和鉴定。

结果建立了1株持续分泌抗嗜人按蚊中肠单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

BALB/c小鼠腹水单克隆抗体的最高稀释度达1∶12 800;单克隆抗体的重链属IgG1亚类;Western blot证实单抗能与嗜人按蚊中肠抗原特异性结合。

结论成功制备了抗嗜人按蚊中肠单克隆抗体。

【总页数】3页(P12-14)【关键词】嗜人按蚊;杂交瘤;单克隆抗体;肠单克隆抗体;制备;鉴定【作者】李强;俞石芳;梁韶辉;谭峰;秦倩;潘长旺【作者单位】温州医学院【正文语种】中文【中图分类】R384.1【相关文献】1.人突触小体相关蛋白25单克隆抗体的制备及初步鉴定 [J], 孙志杰;许永亮;刘凌志;付楚溪;熊向华;毕秀丽;张惟材2.降钙素基因相关肽受体单克隆抗体的制备与初步鉴定 [J], 王佳星; 许永亮; 付楚溪; 张丹雨; 薛冲; 张惟材; 王升厚; 熊向华3.猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用 [J], 王宁; 谨瑾; 刘璐; 刘欢欢; 姜立波; 辛九庆; 刘恒贵4.抗血管紧张素Ⅱ单克隆抗体制备及初步鉴定 [J], 徐彬瑗;白云鹏;曾玲5.抗刚地弓形体单克隆抗体制备鉴定及初步应用 [J], 闫文娟;崔京涛;解宏杰;张伟红;王巧凤;许少侠;倪安平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库的构建

人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库的构建苏红英;张鹏飞;郑秋红;郑天荣;黄雄飞【期刊名称】《福建医科大学学报》【年(卷),期】2004(38)2【摘要】目的构建人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库.方法采用抑制性消减杂交技术,以胃印戒细胞癌组织为检测子,正常胃黏膜组织为驱动子,分离胃印戒细胞癌组织特异性表达的基因片段,并与T载体连接,构建人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库.结果成功构建高消减效率的人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库,获得200多个阳性克隆,随机挑取50个克隆鉴定均有长度为100～750 bp插入片段.结论应用抑制性消减杂交技术构建人胃印戒细胞癌组织cDNA消减文库,为进一步筛选和克隆人胃印戒细胞癌组织特异性表达基因奠定基础.【总页数】5页(P141-145)【作者】苏红英;张鹏飞;郑秋红;郑天荣;黄雄飞【作者单位】福建医科大学,基础医学院病理学系,福州,350004;福建医科大学,基础医学院病理学系,福州,350004;福建省肿瘤医院,肿瘤分子生物学研究室,福州,350014;福建省肿瘤医院,肿瘤分子生物学研究室,福州,350014;福建医科大学,基础医学院病理学系,福州,350004【正文语种】中文【中图分类】R735.202【相关文献】1.应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库[J], 徐劲松;蔡绍曦;邹飞;佟万成;万为人;赵海金2.应用抑制性消减杂交技术构建人肝癌组织特异表达cDNA文库 [J], 王顺启;冯占宁;刘国红;王广良;程华;王同顺;倪虹;宋文芹;陈力3.人大肠癌和癌旁组织消减cDNA文库的构建和鉴定 [J], 叶方鹏;肖冰;南清振;吴保平;崔生达;张万岱4.应用抑制消减杂交技术构建哮喘病人嗜酸细胞差异表达基因消减cDNA文库[J], 徐劲松;蔡绍曦;邹飞;佟万成;万为人;赵海金5.中国美利奴羊不同时期卵巢组织cDNA消减文库(SSH)的构建及序列分析 [J],林杉;陈磊;张文祥;李大全;赵宗胜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

我国嗜人按蚊分布、生态、传疟作用及防制效果的研究进展

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翘北预防医学杂志２０年第１卷第１０２３期
我国嗜人按蚊分布、态、疟作用及防制效果的研究进展生传
黄光全
关键词：嗜人按蚊；行病学流中图分类号：Ｒ３．５１３文献标识码：Ａ文章编号：０６２８（０２００６０１０ —４３２０）１０１－３
省文昌县１９年发现的嗜人按蚊飙成蚊形态及生态习性与９０
率为９．＂～９．，１９．９０畜房内为８３～６．，同地区／－．４７不吸人血率也不一致，如云南威信畜房内为４１，．广西环江为２３，．四川筠连为６． “ ．４７：湖北应城为６．６２９由此表明嗜人按蚊主吸人血。嗜人按蚊吸血活动始于日落后ｏ５．～２小时．可持续至黎明５时．吸血高峰通常在子夜前后，～８７月份为２～１时，３９月份为２～１。２时２４季节消长量的调查研究，今曾有嗜人按蚊分布的地区共１个至５省、市分布区位于北纬２８～３６．径１８２１１１４３３东０。４～２
１东部止于上海市金山县，部止于四川泸州市，部止８，西南于广西防城港区．北部止于江苏洪泽县其中上海、江西湖南在６ｏ年代筮现该蚊并开展了大力防治．０代初对原嗜８年人按蚊地区多次调查再未发现该蚊。江苏、安静、建原查有福嗜人按蚊分布的大部分县（９年代也未查到谤蚊。海南市）Ｏ

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