下载文档原格式
昆虫知识2007年第44卷总目次昆虫知识(KUNCHONGZHISHI)2O07年第44卷总目次第16期编者的话崔峰乔传令1把昆虫知识办得更具特色626脉翅总目系统发育研究进展研究选萃785量呈学项目简介3蜜蜂行为成熟的遗传学(等7篇)罗晨张芝利155蜘蛛求偶秘诀(等10篇)790"973''项目-?农林危险生物入侵机理与控制基础研309松材线虫对媒介天牛和寄主松树化学信息信窑,,简介号的识别与利用(等8篇)万方浩犏619量多FM样R'等幸谙综述和进展果蝇蛋白的同源物参与调控果蝇原始生殖韧,1''瓜细胞和生殖干细胞的命运(等9篇)19中国养蜂学研究进展783千年蝗灾时间序列揭示长周期温度信号的生态吴杰刁青云李继莲安建东谢文闻效应(等9篇)25对蜜蜂性别决定和蜂王级型确立理论的新诠释王丽华科技前沿29酯酶基因扩增及突变与昆虫抗药性5蜜蜂全基因组出笼前后曲明静许新军韩召军陈茂华贡智男32Wolbachia对赤眼蜂的性别调控机制及生理影响9生物行为变化研究的新模式——工蜂潘雪红陈科伟吕燕青何余容曲宁邓爱华孙亮先徐金森吴学记37蛋白质组学方法在昆虫学研究中的应用l4进化基因组学在昆虫天然免疫研究中的应用前黄志伟黄勇平杜家纬景41橘小实蝇复合体分类学研究进展朱顺义应牡英陈鹏叶辉158973项目"重大农业害虫猖獗危害的机制及可持179大豆蚜的生物防治技术续控制的基础研究"简介刘健赵奎军郝树广186害虫抗药性的显性水平与抗性进化164稻瘿蚊种群DNA指纹及水稻抗稻瘿蚊分子标记何月平刘凤沂须志平沈晋良育种技术研究191昆虫乙酰胆碱酯酶基因变异抗药性机制研究黄炳超张扬谢振文张桂权肖汉祥等曲明静许新军韩召军姜晓静171红脂大小蠹入侵机制与化学生态学研究194害虫及害螨对阿维菌素抗药性研究进展张龙娃鲁敏刘柱东孙江华刘开林何林王进军赵志模311昆虫与植物的协同进化:寄主植物一铃夜蛾一寄327杀虫剂使用失当是甜菜夜蛾大发生的重要原因生蜂相互作用林珠凤罗礼智潘贤丽王琛柱钦俊德333PCR-SSCP技术在昆虫学研究中的应用319整合昆虫发育生物学和果蝇遗传学来研究昆虫杜波迟德富发育与变态336杀蚊苏云金芽孢杆菌及其晶体蛋白研究进展李胜赵新民夏立秋王发祥丁学知323昆虫蜕皮的分子机理及应用342白蚁防治技术赵小凡曹莉赵瑞华陈镜华韩日畴465重大外来入侵害虫——美国白蛾生物防治技术477昆虫信息化学物质的应用进展研究苏茂文张钟宁杨忠岐张永安486蚜小蜂生殖,发育及其与寄主的关系472飞蝗抱对行为的进化意义及两型间相异的交配钱明惠任顺祥胡琼波策略491印楝素的杀虫活性及其对烟粉虱的趋避作用朱道弘文吉辉侯茂林卢伟黎家文621蚊虫抗药性分子机理496马铃薯甲虫防治技术及其抗药性研究进展938?张衡李学锋王成菊邱立红632甜菜夜蛾抗药性研究现状105刘向阳朱福兴张凯637昆虫病原线虫感染寄主行为研究进展110李慧萍韩日畴642生境破碎化对植物一昆虫及昆虫之间相互关系201 的影响杨芳贺达汉205647酢浆草如叶螨研究概述郑兴国洪晓月210798利用植绥螨防治烟粉虱的研究进展孟瑞霞张青文刘小侠214804针叶树树脂的抗害功能及抗害机制曹逸霞张真刘随存李莲芝李典谟219810昆虫谷胱甘肽S一转移酶蛋白纯化技术研究汤方高希武223815森林冠层昆虫多样性研究方法孟庆繁226研究论文48白背飞虱灯下虫量与气象要素关系的相关分析229 吕芬周平黄新动翟秀英53辽宁朝阳地区高梁蚜田间消长规律及防治适期李学军王淑贤郑国孙慧敏张广学57烟蚜为害特征的高光谱比较乔红波蒋金炜程登发陈胜利刘建安等61土耳其斯坦叶螨为害棉叶的生理变化及光谱特征分析241陈鹏程张建华李眉眉雷勇辉66沿海蝗区东亚飞蝗产卵选择的适应性244季荣原惠谢宝瑜李哲李典谟69蛇莓跳甲的生物学初步观察249薛怀君王书永李文柱张学忠杨星科74薄荷油体外抗蠕形螨效果及杀螨机制252赵亚娥郭娜77二种外来斑潜蝇实验种群生物学特征比较256陈兵郝树广康乐82南亚果实蝇对六种果实的趋性和产卵选择性259 李小珍刘映红贺智勇86棉田十一星瓢虫种群动态及空间分布263李进步方丽平吕昭智89温度对黄腹潜蝇茧蜂功能反应的影响267徐鹏尹承山余虹陈学新93环境因子对努利虫疠霉产孢和孢子萌发的影响348 李伟王秀芳宣维健王红托盛承发97中华真地鳖雌虫产卵习性及其卵的发育353金涛吴振廷唐庆峰王学林吴尚澧101中华真地鳖断足再生对发育的影响357939?谭梁飞朱芬熊强周兴苗雷朝亮鞭角华扁叶蜂的营养成分分析黄琼周祖基周定刚胡杰杨伟等江西省庐山地区蜻蜒的多样性虞蔚岩李朝晖黄成陈全战张文光等五种色螅Cytb基因序列及其系统发育关系刘菲张大治郑哲民异翅负蝗配子发生过程中c.kit蛋白表达动态赵卓奚耕思西藏飞蝗的生物学特性李庆封传红张敏蒋凡杨刚等陕西洛河流域不同生境蝗虫的群落结构刘慧廉振民常罡孑L光耀南疆棉田盲蝽类害虫种群数量动态李号宾吴孑L明徐遥杨秀荣姚举等温度对丝带凤蝶生长发育的影响杨秋生王军王小平荣秀兰雷朝亮苹果全爪螨在不同温度下的实验种群生命表韩柏明金大勇吕龙石杂拟谷盗的热适应特性夏继刚王立志李秉一李晓晨二种苹果蠢蛾性引诱剂诱捕器诱捕效率比较及地面植被的影响杜磊张润志蒲崇建贾迎春刘氏蝎蛉雌性生殖系统的构造侯小燕花保祯红褐斑腿蝗血细胞的形态与分类王世贵周志军郑哲民黑胸大蠊下颚须和下唇须上感器扫描电镜观察吴婧王佳董鹏王进军陕西红脂大小蠢天敌种类调查王培新贺虹李健康邢建宏李孟楼绿僵菌侵染对椰心叶甲酚氧化酶活性的影响王九辉张世清黄俊生蝉拟青霉孢子粉对小菜蛾的致病性试验刘又高王根锷厉晓腊柴一秋金轶伟昆虫病原线虫共生细菌的分子生物学鉴定王欢董辉丛斌拟黑多刺蚁提取液可缓解小鼠体力疲劳张庆华吕晓华鄂西南三个自然保护区蚁科昆虫的区系调查王维高温及水稻类型对灰飞虱种群的影响刘向东翟保平胡自强影响麦长管蚜体色变化的主导因素杜桂林李克斌尹姣刘辉曹雅忠双斑长跗萤叶甲的嗜食性陈静张建萍张建华喻峰华李广伟361寄主植物对荔枝蒂蛀虫产卵的引诱作用彭海辉陆永跃梁广文曾玲364橘大实蝇对三种寄主植物的偏好比较张小亚喻法金韩庆海周兴苗雷朝亮367入侵害虫螺旋粉虱及其在我国的适生区预测沈文君万方浩371华卵痣木虱的形态特征及其潜在危险性分析陈连根秦俊胡永红375带土园艺植物传播红火蚁的风险调查黄俊曾玲陆永跃379药材甲发育起点温度和有效积温李灿李子忠382增效物质对AcMNPV.AaIrr感染的增效作用王玲玲李俊张涛秦利385马尾松枝条挥发性组分的鉴定及松墨天牛对其触角电生理反应李水清张钟宁389淡色库蚊对四种化学物质的嗅觉反应丁思悦黄求应雷朝亮393温度对安婀珍蝶生长发育的影响刘雪凌曾玲韩诗畴397双斑恩蚜小蜂的生殖方式及其在烟粉虱体内的发育钱明惠任顺祥邱宝利402人工扩繁管氏肿腿蜂的蜂种复壮研究代平礼徐志强4O6黄河滩区东亚飞蝗天敌种类及其消长规律郝伟江新林张冬菊杨亚丽王爱东409条背萤成虫与幼虫发光器的超微结构观察袁洪海付新华张应郑霞林雷朝亮415胸窗萤的生殖习性王余勇郑霞林付新华雷朝亮419双斑蟋若虫后足的再生观察李华张晓欢那杰423北京国家体育场周边趋光性昆虫物种多样性及优势度分析李竹袁峰覃晓春黄浩常凌小501蜜蜂全基因组中微卫星的丰度及其分布魏朝明孑L光耀廉振民刘慧范永文等505西伯利亚蝗基因组DNA提取及RAPD分析条件的优化葛风伟季荣曾献春王婷王小平509不同小麦品种对麦长管蚜的抗性李军赵惠燕李志刚韩诗畴安新城513云南草坪中东方蝼蛄的空间分布型赵娜刘荣堂贾力张晓宇517气象因子对北疆地区蝗虫发生的影响杨洪升季荣熊玲原惠520二斑叶螨对六种植物的选择性及生长发育刘学辉韩瑞东裴元慧孟庆英孙绪艮524温度对大猿叶虫发育,存活和繁殖的影响董宇奎薛芳森李照会527狗牙根,白三叶草对淡剑纹灰翅夜蛾生长发育和繁殖的影响黄东林蒋芳敏徐波陈军530阿维菌素对椰心叶甲的毒力和防治效果肖广江陆永跃曾玲534美洲大蠊粪便粗提物的聚集活性王柏海周兴苗雷朝亮538紫茎泽兰提取物对美洲大蠊和米蛾的忌避活性程丽坤刘小侠张青文李柏树果春山541松墨天牛对马尾松挥发物的触角电位和行为反应郝德君马凤林王焱戴华国张永慧545芜菁夜蛾线虫和嗜菌异小杆线虫寄生特性的比较万航宇钱海涛董辉丛斌549普通肉食螨对椭圆食粉螨的捕食功能夏斌罗冬梅邹志文许睿朱志民552入侵害虫栗苞蚜的生物学特性与防治效果张发利董宇奎郑方强李照会梁金培556重庆市26个南亚果实蝇种群mtDNA16SrRNA 基因部分序列及其系统进化王泽乐刘映红刘洪张昌伦王梓英562地中海实蝇幼虫分子鉴定叶军周国梁易建平吴家教阮长浩等566烟粉虱对寄主的选择行为安新城任顺祥652小猿叶甲成虫越冬和越夏:滞育和休眠同时存在王小平周兴苗朱芬雷朝亮656铁杉球蚜的生物学及空间分布周建华肖银波肖育贵卢文华66O新疆主要造林树种对光肩星天牛的抗性乔海莉骆有庆冯晓峰孙建华韩新伟665豆野螟成虫日龄对交尾的影响及雄蛾对性信息素的触角电位反应陆鹏飞乔海莉王小平周兴苗朱芬等671侧柏树干的超临界co2萃取物组分分析及双条杉天牛的EAG反应武晓颖王骏刘寰董立京金幼菊676三种植物源杀虫活性成分对东方粘虫中肠细胞的毒力刘亚强彭大勇祁志军940?68O灰毛豆甲醇提取物的杀虫活性李有志黄素青徐汉虹685磷化氢对赤拟谷盗成虫体内CA T和SOD活性的影响魏朝明张琳琳廉振民689石菖蒲根茎甲醇提取物对谷蠹的生物活性黄衍章杨长举薛东宋旭红邱艳694短期高温对感染Wolbachia的松毛虫赤眼蜂发育和繁殖的影响崔宝玉钱海涛董辉丛斌李旭辉698明亮熊蜂繁育室内印度谷斑螟的形态特征与生物学特性安建东国占宝李继莲罗其花吴杰703微小花蝽对温室白粉虱的捕食作用汤方李生臣刘玉升王开运赵克思707松褐天牛的捕食性天敌莱氏猛扣甲的生态位宋冀营骆有庆严晓素蒋平陈翼龙711豚草条纹萤叶甲各虫态的空间分布型孟玲徐军716乌蔹莓鹿蛾的生物学特性王勇周福才陆自强719烟粉虱若虫在甘蓝和花椰菜莲座期不同叶位层上的分布王红杨益众王冬生李琳一722施用钾肥对烟粉虱实验种群生命表参数的影响卢伟侯茂林文吉辉黎家文726柿绒粉蚧的发生规律及防治邓根明罗标卿澈蔡少雄821棕尾别麻蝇雄性附腺分泌物的生理功能高熹吴国星叶恭银潘贤丽82630K蛋白对家蚕细胞及幼虫存活的作用唐平李兵沈卫德陈劲频王文兵830南大港湿地飞蝗种群分布与芦苇空间格局的关系季荣谢宝瑜李典谟原惠杨洪升834危害西瓜幼苗的韭菜迟眼蕈蚊的生物学特性及防治李红朱芬周兴苗黎娜雷朝亮837温度对二斑叶螨实验种群生长的影响粱妍周玉书刘洪敏84O银纹夜蛾幼虫气门形态特征的扫描电镜观察宋月芹仵均祥孙会忠成卫宁844云杉八齿小蠹的有效积温佟雪杨彬王志明847槐树长珠蚧的生物学特性韩晓梅赵锡京程桂芳刘瑛武三安850黑翅土白蚁与其它二种白蚁种群间的相容性陈艳孟子烨黄求应雷朝亮855小火蚁及其在中国的适生区预测陈乃中王艳平陈洪俊陈岩刘泽良859蜜蜂幼虫血淋巴游离氨基酸和微量元素含量的差异对其抗螨特性的影响王星王强代平礼刘锋周婷863萜类化合物对小菜蛾幼虫的拒食活性韩招久王宗德姜志宽金宪杨钱万红等867柑橘大实蝇的产卵特性张小亚周兴苗黄绍哲韩庆海雷朝亮871人工饲料对龟纹瓢虫生长和繁殖的影响张丽莉李恺张天澍王斌877黄粉甲低温贮存对管氏肿腿蜂发育和繁殖的影响陈倩刘冰高灵旺沈佐锐882家蝇作为饲料添加剂对清远良种鸡肉质和风味的影响常斌韩日畴曹莉刘秀玲刘小芬886黄粉虫幼虫对硒的生物积累高红莉周文宗张硌李洪涛890宁夏黄河湿地蝗虫区系组成分析张大治安玉英张志高杨贵军宁春晓研究简报116山东广翅蜡蝉的生物学特性及防治沈强王菊英柳建定陈永法范秀华等119金纹细蛾的发育起点温度和有效积温孙瑞红李爱华曲健禄李尧三121闽东约马蜂的生物学习性观察陈勇童迅271浙江临海小菜蛾成虫数量季节消长规律汪恩国郑永利275野生角额壁蜂与果园角额壁蜂的生活力金大勇吕龙石277三峡河谷地区柑橘大实蝇羽化,交配及产卵习性吕志藻赵逸潮姜自民280小十三星瓢虫对苜蓿斑蚜的捕食功能反应张蓉杨芳马建华283泰州口岸首次截获黄唇树白蚁高振兴陈瑞辉朱林朱宏斌安榆林285冬虫夏草寄主玉树蝠蛾幼虫的生物学李玉玲徐成体何力剑428螺旋粉虱入侵我国海南虞国跃张国良彭正强刘奎符悦冠431管氏肿腿蜂的胚胎发育观察代平礼徐志强434大青叶蝉在新疆阿勒泰发生为害调查及防治金格斯金思斯古丽努尔曼苏尔94l?437利用引诱剂监测林木主要蛀干害虫牟爱友林云华卓礼富赵锦年朱金杏等571金绿宽盾蝽的生物学特性李虎王晓贝574广东省春季三叶草斑潜蝇寄主种类刘春燕陆永跃曾玲柳浩张维球577菜用短梗五加四种害虫为害习性及防治杨坡郭日晖孙宝俊刘娥陶玉良578日本长白蚧的生物学特性及其防治甘建斌郑强581杨四刺瘿螨的生物学特性及发生为害特征谢玉靳永殷宪莲郭庆海姚少永585云南德膏对樱桃果蝇成虫寿命的影响伍苏然李江涛兰建强孙阳肖春7312005年褐飞虱大暴发原因及其应对策略沈建新沈益民734茶黑刺粉虱的生物学特性及防治靳永谢玉张波涛邵永杨列芳737李实蜂的生物学特性及涂环防治石祥740泡桐网蝽的发生规律及防治王穿才刘万成743樱桃新害虫——黑腹果蝇的生物学特性郭建明746红蚁净防治红火蚁的药效试验庄天勇田伟金李小妮王春晓吴仕豪等749杀虫双对菲隐翅虫的毒力测定张志林郑发科王振吉751柳蚕的生物学习性与饲育方法孙孝龙896西藏飞蝗各发育阶段的耐寒性王思忠李庆封传红张敏蒋凡等898茶翅蝽在生态苹果园的危害和防治策略张君明王合赵连祥张帆虞国跃901甘蓝薄翅螟的生物学特性高华曾东强韦家书邓国荣黄大兴9O4番石榴果实蝇与桃实蝇的形态区别赵菊鹏梁帆梁广勤胡学难马骏等9O6我国首次截获检疫性害虫——葫芦寡鬃实蝇梁帆赵菊鹏胡学难梁广勤吴佳教技术与方法130昆虫体内多胺的高效液相色谱(HPLC)测定张志春王满困李慧王楠李娟等135蝗虫消化道形态结构研究的一种新方法张小民李晓玲郭亚平马恩波289一种室内饲养麦蚜的方法鲁艳辉高希武290橘小实蝇染色体研究与相关技术探讨方颖林敏杰王莹294尘螨连续石蜡切片的制备及染色技术张莺莺刘志刚孙新包莹李盟452一种适合美洲斑潜蝇实验研究的新型纱虫笼及吸虫器许三军刘万学万方浩陶玫455中华稻蝗脂肪提取方法郭崇友周玉书孟祥梅459芫菁科昆虫体内斑蝥素的气相色谱法测定李晓飞陈祥盛国兴明588二种大实蝇的PCR.RFLP快速鉴定方法林丽莉吴佳教曾玲梁广文胡学难等593一种提取小型昆虫总RNA的有效方法邓顺张友军褚栋596台湾根螨属种类,寄主,分布与检验技术范青海苏秀霞陈艳754用正交试验法优选二化螟人工饲料配方刘慧敏张国安758研究红火蚁工蚁活动性的新方法——刻度图示法高亿波陆永跃曾玲黄俊909中国常见仓储书虱PCR.RFLP快速识别秦萌李志红孙晓康芬芬伍秫912一种测定鳞翅目幼虫取食选择的方法——叶碟法及其改进和注意事项汤清波王琛柱916无土壤基质饲养中华真地鳖金涛吴振廷吴磊梁广文基础知识138前翅鞘翅型的蝽类昆虫崔建新彩万志143几何形态测量法在生物形态学研究中的应用白明杨星科147秉志与昆虫学的渊源翟启慧297昆虫足的吸附机制周群何斌岳继光3o2昆虫的黑化机理朱福兴李建洪王沫440昆虫数字化博物馆的建设杨红珍沈佐锐刘芳张建伟赵若琼446土壤重金属向节肢动物的传递及影响朱春香季相华蒋明星程家安603昆虫单眼的结构和功能刘红霞彩万志608"昆虫的荷马"——法布尔942?王荫长樊建庭孙江华763黑翅土白蚁的生物学及综合防治技术778论文评论漫谈徐志德李德运周贵清熊继东黄志农齐心769昆虫几丁质合成酶及其抑制剂920谈谈昆虫的预蛹杨化恩刘守柱李友忠杜翠敏杨忠歧王小艺928检疫性害虫枣实蝇的鉴定与入侵威胁923北京中华蜜蜂的保护与利用张润志汪兴鉴阿地力?沙塔尔王凤鹤杨甫耿金虎徐希莲931浅谈色彩在昆虫绘画中的应用-h"{亚李文柱崔俊芝617超个体的生物学奥秘:评E.O.Wilson二本昆虫争鸣学着作的中译本125松墨天牛是否存在雌性接触信息素?王琛柱信息与动态2001年与昆虫学相关的国家自然科学基金资助项目一览表(149);2002年与昆虫学相关的国家自然科学基金资助项目一览表(306);2003年与昆虫学相关的国家自然科学基金资助项目一览表(450);2004年与昆虫学相关的国家自然科学基金资助项目一览表(614);2005年与昆虫学相关的国家自然科学基金资助项目一览表(774);2006年与昆虫学相关的国家自然科学基金资助项目一览表(934)简讯我刊推荐的论文荣获"第四届科协期刊优秀学术论文"(150);《昆虫知识12006年度优秀论文评选结果(2);昆虫学SC1期刊2006年影响因子排名(516);《昆虫知识》中国学术期刊综合引证年度报告(2007)(833);世界含量最高的昆虫病毒杀虫剂在中国诞生(115);广东昆虫学研究突出创新与发展(152);江苏建设家蚕种质资源基因库(36);让蚊子找不到要咬的人(73);《自然一材料学》蚕丝的本质(104);蜜蜂大批失踪威胁美国农业(232);洞穴蜘蛛的多样性(228);蜘蛛的"裹尸布"(190);蜘蛛丝的好记性(240);"蜘蛛侠"找到科学依据(276);蜘蛛用丝搭建"碉堡"(279);北极蜘蛛习性变化暗示全球变暖(366);超基因帮蝴蝶"变脸"(401);基因调控使蚕能够吐出各种颜色的蚕丝(433);"象鼻"蜜蜂采花有秘诀(436)陕西发现世界珍稀蝴蝶——周氏虎凤蝶的二种形态(454);中国科学院动物研究所松材线虫快速取样技术在湖北试验取得成功(587);中国科学院动物研究所研发的美国白蛾性诱芯取得成功(616);贪婪甲虫的蜗牛大餐(537);四川大面积暴发稻飞虱虫害首次启动稻飞虱Ⅱ级应急防控预案(745);国际着名杂志{Nature),(Science),{PNAS}专题报道和评价中国科学院动物研究所气候变化生态学研究国际合作成果(820);蜜蜂嗡嗡声可助人象和谐共处(834);雌性甲虫交配只为解渴(870);陆生动物植食性起源:节IJ芷动物取食植物组织的最初模式(908);中澳昆虫学研究团队揭示烟粉虱入侵机制(937)会讯第四届烟粉虱国际研讨会及第一届国际粉虱基因组国际研讨会简介(151);海外中国昆虫学者协会(OCEA)2006年年会在美国印地安那波里斯市举行(485);第四届亚太地区化学生态学大会在日本召开(927);新书介绍《昆虫种群生态学——基础与前沿》(185)联合征订启事欢迎订阅2008年《昆虫知识》(715),《遗传》和《遗传》(675),《大豆科学》(631),《蜜蜂杂志》(655),《中国蚕业》(762),《农业科研经济管理/(757),《中国农业信息》(776),《中国农业资源与区划》(777),2008年生命科学,基础医学,农学类学术期刊联合征订表(777),欢迎订阅2008年《农药学》(814)封面照片1期:意大利蜜蜂Apumett~femL.(黄智勇摄,文:5)2期:棒状派模蛛PimoaclavataXu&Li(李枢强摄,文:228)3期:大斑芫菁My~ruphalerataPallas(陆永跃摄,文:405)4期:金绿宽盾蝽PoecilocorislewisiDistan的卵粒(李虎摄,文:571)5期:微芒食虫虻Microstyligmdux(Wiedemann)(薛大勇张莉莉摄,文:748)6期:危险检疫害虫枣实蝇幼虫CarpomyavesuvianaCosta(张润志摄,文:928)943?CHINESEBULLETINoFENToMoLoGY(KUNCHONGZHISHI)CoNTENTSV oI.44.No.1—6FR0NTIERS5Thehoneybeegenome:theuntoldstoriesZachary"HUANG9Honeybeeworkersareamodelsystemtostudyor—ganismbehavioralchangesQuNing,DENGAi—tiua,SUNLiang—Xian,eta1.14Evolutionarygenomics—basedapproachesforstudies ofinsectinnateimmunityZHUShun-Yi,Y1NGMu-Ying158Anintroductionto"973"program:"Basicresearch onoutbreakmechanismandsustainablemanage—mentformajoragriculturalpestinsects"HAOShu-Guang164DNAfingerprintingoftheAsianricegallmidge, Orseollaoryze,andbreadingfortheresistantvari—etiesbymarker—assistedsetectionHUANGBing-Chao,ZHANGY ang,X1EZhen—Wen,etal l7lProgressoninvasionbiologyandchemicalecology ofredturpentinebeetle,Dendroctonusvalens ZANGLong-Wa,LUMin.L1UZhu—Dong.etal3I1Insect—plantco-evolution:multitrophicinteractions concerningHelicoverpaspeciesⅥANGChen—Zhu.Q1NJun-De319Synergismofinsectdevelopmentalbiologyand Drosophilageneticsforstudyinginsectdevelopment andmetamorphosisL1Sheng323Molecularmechanismofinsectmoltingandapplica—tionZHAOXiao.Fan465ResearchesontechniquesforbiocontrolofthefaI1 webworm,Hyphantriacunea,asevereinvasivein—sectpesttoChinaY ANGZhong—Qi,ZHANGY ong—An472Theevolutionarysignificanceofprecopulatorymountingandphase-relateddifferencesinmating strategyofLocustamigratoriaZHUDao—Hong62lThemolecularmechanismsofinsecticideresistance inmosquitoesCU1Feng.Q1AOChuan—Ling626ResearchadvancesinphylogenyofNeuropterida LIUXing—Yue,LIWen—Liang.Y ANGDing785Anintroductionto''973"programrelatedtoento—mologyLUOChen.ZHANGZhi—LiJan.一Dec..2007790Anintroductionto"973"program"invasionbiology andcontrolstrategyofalienspeciesinagriculture andforest''W ANFang—HaoREVIEWSANDPR0GRESSl9AdvanceofapiculturalreasearchfieldsinChinaⅥUJie,I)IAOQing-Yun.IIJi—Lian,eta1.25Anewaunotationonthetheoriesofsexdetermina—tionandqueencasteestablishmentinHoneybee (Ap)W ANGLi—HHa29Esterasegeneamplificationandmutationassociated withinsecticideresistanceQUMing—Jing,XUXin—Jun,HANZhao—Jun?eta1. 32Sexdeterminationandphysiologicaleffectinduced byWolbachiaonnhogrammawasps PANXue—Hong.CHENKe—ei.LuY ah-Qing.eta1. 37ApplicationofproteomicsinentomologyresearchesHLANGZhi一ei.HUANGY ong—Ping.1)UJia一ei 41AdvancesintaxonomyofBactroceradorsafiscom? plexCHENPeng,YEHni179Biologyandcontroltechniquesofsoybeanaphid, AphisglycinesLII5Jian,Z14AOKui.Junl86Thedominancelevelsandevolutionofinsectresis? tancetoinsecticidesHEYue—Ping,L1UFeng—Yi,XUZhi—Ping?etall9lAdvancesinstudiesofacetyIcholinesterasegene variationassoiatedwithinsectresistance QUMing—Jing,XUXin-Jun,HANZhao—Jun?etal 194Advancesintheresearchonthepestresistanceto avermectinsL1UKai—Lin,HELin,W ANGJin.Jun.etal327Insecticideabuseisanimportantcauseofbeetar? mywormoutbreakL1NZhu—Feng.LUOLi—Zhi,PANXian-Li333TheapplicationofPCR-SSCPintheresearchofen- tomologyDUBo.CHlDe—Fu336ResearchprogressonmosquitocidalBacillus thuringiensisanditscrystalproteinsZHAOXin.Min.X1ALi-Qiu.gANGFaXiang,etal 342Advancesinthecontroltechniqueoftermites CAOLi,ZHAORui—Hua,CHENJing—Hua,ela1.944?477Developmentofapplicationforinsectssemiochemi- caIsSUMao—Wen,ZHANGZhong—Ning486Reproduction,developmentandhostrelationshipof aphelinidsQIANMing-Hui,RENShun—Xiang,HUQiong—Bo 491Insecticidalactivitiesofazadirachtinandeffectson sweetpotatowhitefly,Bemisiatabaci,)【'ENJi—Hui.HOUMao-Lin.LUWei,et496Advancesintheresearchesoncontrolandinsecti- cideresistanceinLeptinotarsadecemlineata. ZHANGHeng,LIXue—Feng,W ANGCheng—Ju,eta1. 632Thestatnsofinsecticideresistanceinthebeetarmy- worni,odopteraexiguaLIUXiang—Y ang,ZHUFu—Xing,ZHANGKai637Advancesintheresearchesontheinfectivebehav- iorsofentomopathogenicnematodesLIHui—Ping,HANRi-Chou642Effectsofhabitatfragmentationonplant—-andinsect?? insectinteractioilsY ANGFang.HEDa-Han647Anoverviewoftheresearchontheoxalisspidermite.TetranychinaIll口ZHENGXing-Guo,HONGXiao—Yue798ResearchprogressinbiolocalcontrolofBemism tabaciwithphytoseiidpredatorsMENGRui-Xia,ZHANGQing-Wen,LIUXiao—Xia8O4Advancesintheresearchonresistanceofconifer resintopestsCAOYi—Xia,ZHANGZhen,LIUSui—Gun,etal810Amini—reviewonthetechniqueofinsectglutathione S—transferasepurificationTANGFang.GAOXi-Wu815Samplingmethodsforinsectdiversityinforestcan. opyMENGQing-FanRESEARCHARTICLES535761 Thecorrelationanalysisofrelationshipbetweenme- teorologicalfactorsandlighttrapcatchesofSogn- tellafurciferaLVFen,ZHOUPing,HUANGXinDong,eta1. Fieldpopulationdynamicsandoptimumcontrolpe. riodofMeknnphissacchariinChaoyangregion.Li- aoningLIXue.Jun.WANGShu—Xian,ZHENGGuo,eta1. Comparisonofhyperspectralcharacteristicsinto. baccoaphiddamageQIAOHong.Bo.JIANGJin-Wei,CHENGDeng—Fa,eta1. Physiologicalchangeandhyperspectralcharacter analysisofcottonleavesinfestedbyTetranychusfH,★estaniCHENPeng—Cheng,ZHANGJlan—Hua,LIMei—Mei 66OvipositionsiteselectionbyLocustamigratoriatna- nilensisinthecoastallocustareasJIRong,YUANHui,XIEBao—Yu,LIZhe,eta1.69BionomicsofAlticafragariaeXUEHuai-Jun.W ANGShu—Y ong.LIWen-Zhu.et. 74Thepesticidaleffectandmechanismofpeppermint oilinvitroagainstDemodexZHAOYa—E.GUONa77Comparativestudyonsomebiologicalcharacteris- ticsoflaboratorypopulationsoftwoexoticleafmin- ersCHENBing.HAOShu—Guang.KANGl82TaxisresponseandselectivepropensityofBactro- ceratautosixhostfruitsLIXiao-Zhen.IJIIJYing—Hong.HEZhi—Y ong86Thepopulationdynamicsandthespatialdistribu- tionofCoccinellaundecimpanctataincottonfield LIJin—Bu,FANGLi—Ping,LVZhao—Zhi90Influenceoftemperatureonfunctionalresponseof OpiuscaricivoraetolarvaeofLiriomyzasativae XLPeng,YINCheng-Shan,YUHong,etal93Environmentalfactorsaffectingsporalationand germinationofPandoranouryiLIWei。
南京农业大学学报 2009,32(3):7177Journal of Nanjing Agricultural University 谷春艳,范加勤,杨雪,等.彩色马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定及其群体感应淬灭的研究[J].南京农业大学学报,2009,32(3): 7177彩色马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定及其群体感应淬灭的研究谷春艳1,范加勤1*,杨雪1,胡白石1,刘凤权1,张永春2(1.南京农业大学植物保护学院/农业部病虫监测与治理重点开放实验室,江苏南京210095;2.上海市农业科学院花卉研究中心,上海201106)摘要:近几年南京种植的彩色马蹄莲软腐病发生严重,从不同品种的彩色马蹄莲不同部位病组织中分离到6个菌株,经形态特征与培养性状比较㊁生理生化测试㊁16S rDNA序列分析和致病性测定,鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovora subsp.carotovora,P.c.c)㊂信号分子检测结果表明,分离菌株可产生并释放出N酰基高丝氨酸内酯(AHLs)类信号分子㊂利用PCR技术扩增土壤根癌农杆菌中的attM基因,其编码的AttM解酯酶可以显著降解AHLs,在离体条件下可有效地减弱该病原菌的致病性,这为有效控制彩色马蹄莲细菌性软腐病提供了一种新途径㊂关键词:彩色马蹄莲;细菌性软腐病;病原菌鉴定;attM;群体感应淬灭中图分类号:S682.2+64;S432.4+2 文献标志码:A 文章编号:10002030(2009)03007107 Identification of the pathogen and quorum quenching studyon bacterial soft rot of colored calla lilyGU Chun⁃yan1,FAN Jia⁃qin1*,YANG Xue1,HU Bai⁃shi1,LIU Feng⁃quan1,ZHANG Yong⁃chun2(1.College of Plant Protection/Key Laboratory of Monitoring and Management of Plant Diseasesand Insects,Ministry of Agriculture,Nanjing Agricultural University,Nanjing210095,China;2.Flowers Research Center,Shanghai Academy of Agricultural Sciences,Shanghai201106,China) Abstract:Bacterial soft rot occurred seriously in colored calla lily(Zantedeschia spp.)in Nanjing,China.Six isolates from dif⁃ferent parts of rotted calla lily were identified as Pectobacterium carotovora subsp.carotovora by morphological observation,bio⁃chemical and physiological characteristics,16S rDNA sequences analysis and pathogenicity determination.The results showed that the isolated strains produced N⁃acyl homosrine lactones(AHLs)detected by AHL⁃bioassay strain JZA1.Furthermore,the lacto⁃nase AttM coded by gene attM amplification from Agrobacterium tumefaciens could degrade AHLs effectively.Suppression of calla lily soft rot was observed after the plants were inoculated with the mixture of the pathogen and AttM,which provided a promising means to control the bacterial soft rot disease of colored calla lily.Key words:colored calla lily;bacterial soft rot disease;pathogen identification;attM;quorum quenching20世纪90年代初,全球性的市场需求促进了彩色马蹄莲(Zantedeschia spp.)的产业形成,并使其成为具有发展潜力的球根花卉品种㊂但由于细菌性软腐病发生严重,且没有理想的防治对策,极大阻碍了彩色马蹄莲的发展[1-3]㊂20世纪末,中国开始引种彩色马蹄莲[4];易建平等[5]报道了进口马蹄莲海关抽样材料中存在软腐病㊂随着组培产业化技术的应用[6],国内种植规模不断增加,软腐病发生严重时达100%;王敏等[7]报道云南马蹄莲软腐病病原菌中,除Pectobacterium carotovora subsp.carotovora 外,还有P.chrysanthemi;而彩色马蹄莲病害防控方面的研究报道则较少[8]㊂细菌不同细胞间存在化学信号调节,当群体达到一定密度时,该信号分子达到一定浓度,进而启动控制各种生物行为的基因(包括致病基因)表达,即群体感应(quorum sensing)[9]㊂针对P.carotovora subsp.carotovora的信号分子(AHL)㊁作用方式和群体感应淬灭(quorum quenching)已有较多的研究收稿日期:20080401基金项目:江苏省农业三项工程项目(SX(2002)058);江苏省科技兴农项目(BC2001357);上海市农业科技攻关项目(沪农科攻字(2007)第12号)作者简介:谷春艳,硕士研究生㊂*通讯作者:范加勤,从事植物病理学研究,E⁃mail:fanjq@㊂报道[9-12]㊂Dong 等[9-10]证实源于Bacillus sp.的aiiA 基因产生的解酯酶AiiA 可降解马铃薯软腐病菌的群体感应信号分子AHL;Molina 等[13]提出解酯酶AiiA 不但可以防治软腐病的发生,而且具有一定的治疗效果㊂attM 基因与aiiA 基因相似,Zhang 等[14]和Dong 等[15]对其干扰细菌群体感应进行了报道,但国内尚无有关的研究报道㊂本研究以南京栽培彩色马蹄莲软腐病为研究对象,对病原菌进行分离鉴定㊂利用PCR 扩增,从土壤根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens )中获得attM 基因,通过病原菌群体感应信号分子AHL 的生物检测,以及attM 基因和aiiA 基因对病原菌致病性抑制作用比较,为进一步利用attM 基因防控彩色马蹄莲细菌性软腐病奠定基础㊂1 材料与方法1.1 供试菌株及来源 本研究所用菌株与质粒及其特性见表1㊂表1 供试菌株和质粒Table 1 Strains and plasmids used in this study 菌株/质粒Strain /plasmid相关特性Relevant characteristics 来源Reference /source 菌株Strain 胡萝卜软腐果胶杆菌P .carotovora 初次分离菌株(PccS)Isolate from rotted tissue Wild type 本研究This study 回接分离菌株(RPccS)Isolate from rotted tissue inoculated with PccS Wild type,isolated from the rotted plant cultured in greenhouse 本研究This study 胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种 Pectobacterium carotovora subsp.carotovora (P .c .c )Wild type,the standard strain 本研究室This laboratory 大肠杆菌E .coli DH5αΦ90lacZ Δm 15,recA 1本研究室This laboratory DH5α/pME6000DH5αtransformant with pME6000plasmid 本研究This study DH5α/pME6863DH5αtransformant with pME6863plasmid,AHL degrader 本研究This study DH5α/pUCM DH5αtransformant with pUCM plasmid,AHL degrader 本研究This study DH5α/pUC19DH5αtransformant with pUC19plasmid 本研究This study 土壤根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens本研究室This laboratory JZA1AHL biosensor strain KYC55(pJZ372)[Tc R ](pJZ384)[Spe R ](pJZ410)[Gm R ][11] R10(pCF 218)Ptet⁃traR,Tc R ,high AHL production strain [12]质粒Plasmids pME6000Broad⁃host⁃range cloning vector,Tc R [16] pME6863pME6000carrying the aiiA gene from Bacillus sp.A24under the constitutive Plac promoter [17] pUC19Cloning vector,Amp R 本研究室This laboratory pUCM pUC19carrying the attM gene from A .tumefaciens EHA105本研究This study 1.2 菌株分离将来自种植圃或回接发病的病株组织表面消毒后采用平板划线分离法[18],在肉汁胨(NA)平板培养基上培养分离纯化3次,-20℃保存备用㊂1.3 细菌形态特征观察及生理生化测试1.3.1 细菌染色试验 按常规方法采用结晶紫㊁草酸铵染色法[19],赖夫生鞭毛染色法和西萨基尔染色法[18]进行染色㊁镜检㊂1.3.2 生理生化测试 参照Krieg 等[20]和Duveiller 等[21]的方法进行氧化酶㊁接触酶反应,测定淀粉水解㊁好氧性和厌氧性;蛋白胨葡萄糖磷酸盐培养[19],进行甲基红(MR)和V.P.试验;常规方法[18]观察H 2S 变黑反应㊁硝酸盐及亚硝酸盐的还原反应㊁利用氨基酸和碳水化合物产酸反应㊂1.4 致病性测定1.4.1 烟草过敏性反应 将28℃培养24h 的菌株,用无菌水配成1×108CFU㊃mL -1的菌悬液,注射普通烟叶背面的表皮下,温室培养24h 后观察㊂27 南 京 农 业 大 学 学 报 第32卷1.4.2 彩色马蹄莲致病性测定 分离物在NA 固体培养基上培养24h,用无菌水配制1×108CFU㊃mL -1的菌悬液,注射彩色马蹄莲叶柄背面距土面5cm 处,每株注射10μL,脱脂棉保湿8~12h㊂种球用70%乙醇表面消毒,切成厚约5~6mm 薄片,每片接10μL 菌悬液,以无菌水作为对照,均重复3次,28℃恒温培养,观察发病情况㊂1.4.3 马铃薯㊁大白菜的致病性测定 取新鲜马铃薯块茎和大白菜叶柄洗净,用70%乙醇表面消毒,马铃薯块茎切成厚约5~6mm 薄片,大白菜叶柄切成约30mm ×90mm 的长条㊂每个培养皿放1片马铃薯块茎或1块大白菜叶柄,培养皿中加灭菌水5mL㊂每片接3处,每处接5μL 菌悬液,以无菌水和P .c .c 作对照,均重复3次,28℃培养12h 观察结果㊂1.5 16S rDNA PCR 扩增1.5.1 DNA 提取 分离物按1%体积比接入NA 液体培养基,28℃㊁220r㊃min -1振荡培养20h㊂用购自TIANGEN 的TIANamp Bacteria DNA Kit 提取病菌基因组DNA㊂取3μL DNA 溶液于1%琼脂糖凝胶上电泳,确定PCR 时的模板量㊂1.5.2 PCR 反应体系 10×Buffer (10mmol㊃L -1Tris⁃HCl,pH 8.3,50mmol㊃L -1KCl)2.5μL,25mmol㊃L -1MgCl 21.5μL,2.5mol㊃L -1dNTP 1μL,r Taq polymerase 0.5U (以上试剂均购自大连宝生物有限公司),16S rDNA 特异性引物(20mmol㊃L -1)(Invitrogen 公司合成)各1μL,病菌基因组DNA 1μL,双蒸水补足至25μL㊂PCR 反应程序:95℃5min;94℃30s,54℃30s,72℃2min,30个循环;72℃10min㊂取8μL 扩增产物,1%琼脂糖凝胶电泳分离检测㊂1.5.3 PCR 扩增产物测序 部分PCR 产物,按胶回收试剂盒说明回收纯化,送上海英骏生物技术有限公司测序㊂将测得的序列与GenBank 数据库中已注册的序列用BLAST 搜索软件进行同源性搜索,运用Mega 生物软件进行分析㊂1.6 分离菌株的自诱导物检测经分离鉴定的菌株,参照Zhu 等[11]的生物显影方法检测群体感应自体诱导物AHL,JZA1为检测菌株,R10为阳性对照,NA 液体培养基为阴性对照㊂1.7 pUCM 载体的构建根据已公布的Agrobacterium tumefaciens 中的attM 基因序列(GenBank 登录号U59485,所处的位置15833~16603)设计引物(attmF ∶5′⁃GCCAAGCTTATGCTTCAGTCGGGTACG⁃3′;attmR ∶5′⁃GCCGAAT⁃TCTTACGCGTAAAATTCGGG⁃3′),以A .tumefaciens EHA105的基因组DNA 为模板扩增attM 基因㊂用TaKaRa 公司提供的高效保真酶(code:DR010S)进行PCR 扩增,反应条件:98℃5min;98℃10s,60℃30s,72℃1min,30循环;72℃8min㊂将PCR 产物酶切回收连接于pUC19上,转化宿主菌DH5α,进行PCR 扩增和酶切验证,并送上海英骏生物技术有限公司进行序列测定㊂1.8 解酯酶AttM 对病原菌信号分子降解作用的检测将DH5α/pUCM ㊁DH5α/pUC19分别与AHL 阳性菌株R10上清液,按体积比1∶1共同接种于含有氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)的液体LB 培养基中,37℃振荡过夜,各自取菌液和上清液分别利用JZA1菌株进行生物显影㊂以R10为阳性对照,以DH5α/pUC19的菌液和上清液分别作阴性对照㊂用β半乳糖苷酶法[22]检测β半乳糖苷酶活性,重复3次,所得结果用SAS 软件Duncan′s 多重比较法进行统计分析㊂1.9 解酯酶AttM 对彩色马蹄莲软腐病菌菌体生长的影响将DH5α/pUC19㊁DH5α/pUCM 和测序鉴定的彩色马蹄莲软腐病分离物(PccS1)培养12h,利用分光光度计分别将各菌液的D 600调整为0.1㊂将空白LB 培养液㊁DH5α/pUC19㊁DH5α/pUCM 分别与PccS1等体积混合后分别接种到20mL LB 培养液中㊂经30℃过夜培养后利用分光光度计分别将各菌液的D 600再次调整为0.1,立即按梯度稀释法稀释105倍㊂吸取各菌液100μL 分别涂于含有Amp 抗生素和不含抗生素的LB 平板上,每个处理重复3次,30℃培养48h㊂统计含有抗生素和不含抗生素平板的菌落数,按Duncan′s 新复极差法测验各处理间的差异显著性㊂1.10 离体条件下,解酯酶AiiA ㊁AttM 对彩色马蹄莲软腐病菌的致病性影响37℃下,DH5α/pME6863㊁DH5α/pME6000㊁DH5α/pUCM㊁DH5α/pUC19培养12h,PccS128℃下培养12h,均用无菌水配成1×108CFU ㊃mL -1的菌悬液㊂将DH5α/pME6863㊁DH5α/pME6000㊁37第3期 谷春艳,等:彩色马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定及其群体感应淬灭的研究DH5α/pUCM㊁DH5α/pUC19的菌悬液分别与病原菌分离物的菌悬液等体积混合,接种于彩色马蹄莲种球切片(厚约5~6mm)㊂每培养皿1片,加灭菌水5mL,每片接种10μL菌悬液混合物,以PccS1和无菌水分别作对照,每个处理重复3次,28℃恒温箱培养12h㊂用十字交叉法计算腐烂面积的大小㊂所得数据按Duncan′s新复极差法测验各处理间的差异显著性㊂2 结果与分析2.1 病菌的培养性状及形态特征 从彩色马蹄莲不同品种㊁不同部位的病组织中,获得6个分离物(PccS),NA平板上培养24h后可见直径约1mm的圆形菌落,灰白色,透明,表面湿润光滑稍隆起,后期变为半透明㊂将PccS回接健康植株,再分离发病组织,获得的回接分离物(RPccS)培养性状与PccS一致㊂菌体均为直杆状,单生或串生㊂革兰氏反应阴性,周鞭2~5根㊂2.2 生理生化测定分离的菌株和对照菌株P.c.c均为兼性厌气菌㊂氧化酶㊁淀粉酶反应均为阴性,接触酶阳性㊂发酵产酸,产气,甲基红试验㊁硝酸盐还原反应为阳性,V-P试验为阴性,能利用多种碳水化合物和氨基酸,但分离菌株均不能利用半胱氨酸产生硫化氢,而P.c.c可以利用半胱氨酸产生硫化氢㊂2.3 彩色马蹄莲软腐病菌分离及致病性测定6个分离物,分别接种盆栽彩色马蹄莲健康株,均能引起发病,症状与田间自然症状一致(图1)㊂起初接种处出现水渍状,界限明显,随着病势的发展,病组织开始软化㊁腐烂最后全株倒伏死亡㊂图2显示初次分离菌株PccS㊁回接分离菌株RPccS及对照菌株P.c.c在烟叶背面注射接种,24h后均有过敏性反应㊂图3所示,P.c.c㊁PccS接种马铃薯块茎和彩色马蹄莲种球切片㊁大白菜叶柄均引起软腐, 3种情况下,后者产生的病斑面积均大于前者,对照(接种无菌水)未出现腐烂㊂图1 分离物回接盆栽健康植株症状Fig.1 Potted colored calla lily soft rotted after inoculated with cells collected from pathogen on agar plate图2 烟叶过敏性反应Fig.2 Hypersensitive reaction on tobacco leaf 1.对照菌株P.c.c;2.无菌水H2O;3.初次分离菌株1 PccS1;4.回接分离菌株1RPccS1;5.初次分离菌株2PccS2;6.回接分离菌株2RPccS2图3 分离物及对照菌株P.c.c接种离体植物组织发病症状Fig.3 Plant in vitro inoculation with isolated pathogen and P.c.cA.马铃薯块茎切片Potato tuber slice;B.彩色马蹄莲种球切片Colored calla lily tuber slices;C.大白菜叶柄Cabbage leafstalk1.对照菌株P.c.c;2.初次分离菌株PccS;3.无菌水H2O2.4 16S rDNA PCR扩增及序列测定将6个分离物用16S rDNA的特异性引物进行PCR扩增㊁测序㊂6个分离物的同源性为100%,选47 南 京 农 业 大 学 学 报 第32卷其中一个代表菌株PccS1与GenBank 数据库中已注册P .c .c 的序列用BLAST 程序进行同源性比较,结果同源性为99%,由此确定分离的6个菌株均为Pectobacterium carotovora subsp.carotovora ㊂图4为用Mega 生物软件所作的同源性比较聚类图㊂图4 PccS116S rDNA 同源性比较聚类图Fig.4 Clustering for homologic comparison of the PccS116S rDNA2.5 分离菌株的AHL 活性测定 图5结果表明,上述6个分离物中的2个代表菌株与R10阳性对照均能产生显色反应,而NA 液体培养基不能㊂表明彩色马蹄莲软腐病病原菌能够产生并释放出AHL 信号分子㊂2.6 AttM 解酯酶对AHL 信号分子的降解作用从图6可以看出,载体DH5α/pUC19与R10共同培养的菌液及上清液能够产生显色反应,而DH5α/pUCM 与R10共同培养的菌液及上清液显色反应很弱,β半乳糖苷酶活性明显降低,均不足阳性对照的1/6㊂由此可见,DH5α在导入attM 基因后能够显著降解R10产生的AHL 信号分子㊂图5 分离菌株的AHL 活性测定Fig.5 AHL activation of the isolated pathogen 1.R10;2.PccS1;3.PccS2;4.NA图6 AttM 解酯酶对AHL 信号分子的降解作用Fig.6 Degradation effects of AttM on AHL左图:AHL 生物显色反应;右图:β半乳糖苷酶活性㊂Left:AHL⁃bioassay strain JZA1;Right:Activities of β⁃galactosidase.1.R10;2.DH5α/pUCM+R10(上清液Supernatant);3.DH5α/pUCM +R10(菌液Mixture);4.DH5α/pUC19(上清液Superna⁃tant);5.DH5α/pUC19(菌体悬浮Bacteria);6.DH5α/pUC19+R10(上清液Supernatant);7.DH5α/pUC19+R10(菌液Mixture)不同大写字母表示邓肯氏检验1%水平上差异显著㊂The different capital letters show the significance at 0.01level using Duncan′s test.The same as follows.2.7 解酯酶AttM 对彩色马蹄莲软腐病菌菌体生长的影响由图7显示,DH5α/pUC19和DH5α/pUCM 与PccS1混合培养,均对PccS1生长存在抑制作用,但57第3期 谷春艳,等:彩色马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定及其群体感应淬灭的研究图7 AttM对PccS1菌体生长的影响Fig.7 Effects of AttM on the cell growth of PccS1 1.PccS1;2.DH5α/pUC19+PccS1;3.DH5α/pUCM+PccS1两者之间差异不显著㊂表明DH5α/pUC19和DH5α/pUCM对彩色马蹄莲细菌性软腐病菌PccS1生长的影响与解酯酶AttM关系不显著㊂2.8 AttM解酯酶对彩色马蹄莲软腐病菌致病性的抑制如图8所示,分离物PccS1接种彩色马蹄莲种球切片产生腐烂面积最大,其与等体积DH5α/ pME6000㊁DH5α/pUC19混合接种,腐烂面积均稍有减小,与DH5α/pME6863㊁DH5α/pUCM共同接种,腐烂面积显著减小;无菌水接种则不发病㊂表明DH5α/pUCM中的attM基因编码的产物,与DH5α/pME6863中的aiiA基因编码的产物对P.carotovora subsp.carotovora引起的彩色马蹄莲软腐病具有类似的防治效果㊂图8 AiiA和AttM对彩色马蹄莲软腐病菌致病性抑制Fig.8 The control effects of AiiA and AttM on colored calla lily soft rot caused by P.carotovora subsp.carotovora 左图Left:上排从左到右The top row left to right:PccS1,DH5α/pME6000+PccS1,DH5α/pME6863+PccS1下排从左到右The bottom row left to right:H2O,DH5α/pUC19+PccS1,DH5α/pUCM+PccS1,respectively 右图Right:1.PccS1;2.DH5α/pME6000+PccS1;3.DH5α/pME6863+PccS1;4.DH5α/pUC19+PccS1;5.DH5α/pUCM+PccS1;6.H2O不同小写字母表示经邓肯氏检验在5%水平上差异显著㊂The different small letters show the significance at0.05level usingDuncan′s test.3 讨论本研究表明,根据分离物的形态特征㊁培养性状㊁生理生化特性㊁致病性和16S rDNA测序结果,南京地区彩色马蹄莲软腐病的病原菌被鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacterium carotovo⁃ra subsp.carotovora,P.c.c),与多数研究结果一致[1-3,5],排除了P.chrysanthemi同是病原菌[7]的可能㊂在几种情况下,分离物的致病力比标准菌株P.c.c强,这可能与保存菌株的致病性下降有关[16]㊂生物显色反应表明:1)自彩色马蹄莲细菌性软腐病组织中分离获得的菌株能够产生AHL;2)自A.tumefaciens中获得的attM基因,能在DH5α中有效地表达并产生AHL降解酶(AHL⁃lactonase),与有关文献报道结果一致[14-15]㊂attM基因编码的解酯酶AttM对彩色马蹄莲软腐病菌菌体生长和致病性的测定试验结果证实,解酯酶AttM不影响彩色马蹄莲软腐病菌的菌体生长,但可以通过降解AHLs影响软腐病菌的致病性,这与当前国际植物病理界研究热点的aiiA基因[9-10]具有相似功能,为进一步对彩色马蹄莲细菌性病害防治开创了良好的理论基础㊂本试验中DH5α/pUC19和DH5α/pUCM与PccS1混合物中PccS1生长量降低,可能与2种微生物在同一环境中的营养竞争有关㊂因本研究中使用的表达载体是pUC19,启动子为lac,其活性相对较弱,可能会影响attM基因的表达量,且在表达过程中需要IPTG诱导,如能采用强启动子,如Plpp等,可能会取得更好的效果㊂后续工作可通过转基因技术,将attM基因导入彩色马蹄莲或构建生物防治基因工程菌,可有效防控彩色马蹄莲细菌性软腐病,因为利用aiiA基因在这两方面研究已取得了令人兴奋的结果[9-13]㊂参考文献:[1] 陈俊位,林俊义.彩色海芋细菌性软腐病防治方法之探讨[J].植物病理学会刊,2000,9(3):10711467 南 京 农 业 大 学 学 报 第32卷[2] Snijder R C,Cho H R,Hendriks M M W B,et al.Genetic variation in Zantedeschia spp.(Araceae )for resistance to soft rot caused byErwinia carotovora subsp.carotovora [J].Euphytica,2004,135:119128[3] 李世峰.是什么制约了彩色马蹄莲切花生产[J].中国花卉园艺,2001(13):1617[4] 王爱红,吴彩琼,贾彩娟,等.彩色马蹄莲引种栽培实验[J].广东园林,2006,28(2):3942[5] 易建平,戚龙君,陶庭典,等.马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定[J].植物检疫,2002,16(1):810[6] 范加勤,张雯雯,张娜,等.几个彩色马蹄莲品种的离体培养与快速繁殖[J].南京农业大学学报,2005,28(2):2831[7] 王敏,姬广海,修建华,等.云南省马蹄莲细菌性软腐病原鉴定[J].西南大学学报:自然科学版,2007,29(8):7982[8] 赵培飞,吴丽芳,郑凌,等.云南彩色马蹄莲的生产及发展前景[J].湖南农业科学,2002(3):6970[9] Dong Y H,Wang L H,Xu J L,et al.Quenching quorum sensing dependent bacterial infection by an N ⁃acyl homoserine lactonase [J].Nature,2001,411:813817[10]Dong Y H,Xu J L,Li X Z,et al.AiiA,an enzyme that inactivates the acylhomoserine lactone quorum⁃sensing signal and attenuates the virulence of Erwinia carotovora [J].Proc Natl Acad Sci USA,2000,97:35263531[11]Zhu J,Chai Y,Zhong Z,et al.Agrobacterium bioassay strain for ultrasensitive detection of N ⁃acylhomoserine lactone⁃type quorum⁃sensing molecules:detection of autoinducers in Mesorhizobium huakuii [J].Appl Environ Microbiol,2003,69:69496953[12]Fuqua W C,Winans S C.A LuxR⁃LuxI type regulatory system activates Agrobacterium Ti plasmid conjugal transfer in the presence of a plant tumor metabolite [J].J Bacteriol,1994,176:27962806[13]Molina L,Constantinescu F,Michel L,et al.Degradation of pathogen quorum⁃sensing molecules by soil bacteria:a preventive and curative biological control mechanism [J].FEMS Microbiol Ecol,2003,45(1):7181[14]Zhang H B,Wang L H,Zhang L H.Genetic control of quorum⁃sensing signal turnover in Agrobacterium tumefaciens [J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99(7):46384643[15]Dong Y H,Zhang L H.Quorum sensing and quorum⁃quenching enzymes [J].The Journal of Microbiology,2005,43:101109[16]Maurhofer M,Reimmann C,Schmidli⁃Sacherer P,et al.Salicylic acid biosynthetic genes expressed in Pseudomonas fluorescens strain P3improve the induction of systemic resistance in tobacco against tobacco necrosis virus [J].Phytopathology,1998,88:678684[17]Reimmann C,Ginet N,Michel L,et al.Genetically programmed autoinducer destruction reduces virulence gene expression and swarming motility in Pseudomonas aeruginosa PAO1[J].Microbiology,2002,148:923932[18]方中达.植病研究方法[M].3版.北京:中国农业出版社,1998[19]任欣正.植物病原细菌的分类和鉴定[M].北京:农业出版社,1994[20]Krieg N R,Holt J G.Bergey′s Manual of Systematic BacteriologyⅠ[M].Baltimore:Williams and Wilkins,1984[21]Duveiller E,Bragard C,Rudolph K,et al.The Bacterial Diseases of Wheat:Concepts and Methods of Disease Management [M].Mexico D F:CIMMYT,1997[22]高轶静,钟增涛,郑会明,等.华癸根瘤菌中自体诱导物的初步研究[J].微生物学报,2005,45(1):1922责任编辑:夏爱红77第3期 谷春艳,等:彩色马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定及其群体感应淬灭的研究。
*基金项目:国家科技部基础研究快速反应支持项目、国家教育部重点项目和四川省青年基金资助项目。
尚海英：女，1978年生，硕士研究生，E-mail:〈sauhyshang@ 〉.**通讯作者。
Author for correspondence ，E-mail:〈grmb@ 〉.收稿日期：2002-12-02接受日期:2002-03-17农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2003,11(6):566~571·研究论文应用RAMP 标记研究黑麦属遗传多样性*尚海英郑有良**魏育明吴卫颜泽洪(四川农业大学小麦研究所，都江堰611830）摘要:对黑麦属（L.）10个野生居群和11个栽培居群共21份材料进行了RAMP(random amplified microsatellitepolymorphism )标记分析，结果表明，被测材料间RAMP 标记多态性较高。
80个RAMP 引物中，有41个引物（占50.5%）可扩增出清晰且具多态性的条带。
这41个引物共扩增出445条带，其中428条（占95.9%）具有多态性，每个引物可扩增出3~19条多态性带，平均10.4条。
RAMP 标记遗传相似性系数（）变异范围为0.266~0.658，平均值为0.449。
RAMP 标记可将所有21份黑麦材料完全区分开，聚类结果与材料的地理分布有一定关系，但与黑麦属传统的系统分类体系存在明显差异。
据此认为，RAMP 标记可以有效地评价黑麦属植物的遗传多样性，并为其物种亲缘关系的界定提供信息。
关键词:黑麦属；RAMP 标记；遗传多样性；聚类分析Genetic Diversity of Based on RAMP MarkersShang Haiying Zheng Youliang**Wei Yuming Wu Wei Yan Zehong(Triticeae Research Institute,Sichuan Agricultural University ，Dujiangyan 611830,China)diversity of 21accessions ofL.,including 10wild and 11cultivated species or subspecies,wasevaluated by using random amplified microsatellite polymorphism (RAMP)markers.Forty-one out of 80(50.5%)RAMP primers,which could amplify polymorphic bands clearly,were selected for the PCR amplification of genomic DNA.A total of 446bands were amplified from 41primers,while 428bands (about 95.9%)were polymorphic.Three to 19polymorphic bands could be amplified from each primer,with an average of 10.4bands.The RAMP-based genetic similarity ()among 21accessions ranged from0.266to 0.658,with a mean of 0.449.A high level of genetic variation was found between or within the wild populations and thecultivars.Based on thematrix,a dendrogram was constructed using the unweighted pair group method with arithmetic average(UPGMA).All the 21accessions could be distinguished by RAMP markers.Clustering results showed that the genetic diversity ofbased on RAMP markers were correlated with the geographical distribution.Six rye cultivars,originated respectively from Poland,Portugal,Maxico,Hungary,Armenia and Ukraine,were clustered into one group.The six countries are all located in the transition region between maritime temperate broad-leaved forest climate zone and continental temperate broad-leaved forest climate zone,with narrow latitude span.In comparison,the other five cultivars from countries scattering over the region with large latitude span were distributed within different groups or subgroups.Genetic relationships based on RAMP markers had much deviation from original taxonomy.Some subspecies of the same species were distributed within different groups,while some accessions of different species were closely clustered into one subgroup.These results suggested that the RAMP markers could be used as an effectivemolecular technique for detecting the genetic diversity amongand give some useful information for the phylogenic studyofRAMP;genetic diversity;cluster analysisRAMP （random amplified microsatellite poly-morphism ）是Wu 等[1，2]1994年提出的一种分子标第6期尚海英等：应用RAMP标记研究黑麦属遗传多样性记技术。
中国科学院大学621植物学真题汇总（整理：JZ）2016年中科院621植物学考生须知：1．本试卷满分为150 分，全部考试时间总计180分钟。
2．所有答案必须写在答题纸上，写在试题纸上或草稿纸上一律无效。
一、名词解释（3’*10=30’）1.实生苗2.种子的生活力3.趋同进化4.年轮5.物候期6.单系类群7.假果8.系统发育9.生态位10.表型可塑性二、填空（1’*40=40’）1.地衣是（）和（）复合体，分为（），（），（）三个纲。
2.蓝藻中能够固氮的是（）属和（）属。
3.营养组织分为（），（），（），（）和（）。
维管组织分为（）和（）。
4.国际上植物命名法是（），由（）和（）构成，是由瑞典植物学家（）提出的。
5.根尖从前往后依次是（），（），（）和（）。
6.植物的繁殖方式（），（），（）。
7.核酸存在于（），（）和（）等细胞器中。
8.胚乳有（），（）和（）型，胚乳是从（）来的，且它的染色体数为（）。
三、简答题（6’*8=48’）1.列举植物激素，至少6种。
2.举例说明性状与性状状态的联系（至少三例）。
3.简述核酸分子杂交技术的基本原理和在植物生物研究中的应用。
4.简述DNA分子标记技术的类型及其在植物生物研究中的应用。
5.双子叶植物叶的结构和功能的统一性。
6.写出拉丁学名和果实类型：大白杨，拟南芥，番茄，大豆，棉花，水稻7.8.四、论述题（10’*2=20’）1.与裸子植物相比，被子植物有哪些更适合陆地环境的特征。
2.自然进化的影响因素及其相互关系。
五、分析题（12’）已知物种A的变异基因w有特定的表型特征，其近缘物种B的w基因有三个等位基因x.y.z，分别位于三条不同的染色体上，A与B均为二倍体生物。
给出分析研究方案，x.y.z中哪个基因是w的直系同源基因，并对其功能进行验证。
2015 年招收攻读硕士学位研究生入学统一考试试题一、名词解释（32 分）1、分蘖2、浆果3、伞形花序4、异源四倍体5、雌雄异株6、配子体7、光周期8、同源器官二、填空（30 分）（还有五个空暂缺）1、完全叶由（1）、（2）、（3）构成。
蒙古栎、辽东栎的遗传分化：从形态到DNA
恽锐;王洪新;胡志昂;钟敏;魏伟;钱迎倩
【期刊名称】《Acta Botanica Sinica（植物学报：英文版）》
【年(卷),期】1998(40)11
【摘要】通过植物群落结构、壳斗、叶脉形态特征、同工酶及ＤＮＡ等多方面调
查与测定，分析了帽儿山的蒙古栎（ＱｕｅｒｃｕｓｍｏｎｇｏｌｉｃａＦｉｓｃｈ．）和东灵山、关帝山的辽东栎（Ｑ．ｌｉａｏｔｕｎｇｅｎｓｉｓＫｏｉｄｚ．）的遗传分化及多样性。
各种水平的研究一致说明：两种植物的遗传分化较小，东灵山种群是典型蒙古栎、辽东栎种群的中间类型。
确切地说，从东北到山西组成一个地理渐变群，存在大范围。
【总页数】7页(P1040-1046)
【关键词】栎树;形态学;同工酶;RAPD;DAF;遗传分化
【作者】恽锐;王洪新;胡志昂;钟敏;魏伟;钱迎倩
【作者单位】中国科学院植物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S792.180.1;Q943
【相关文献】
1.蒙古栎与辽东栎幼苗生长规律与生物量特征 [J], 厉月桥;吴志庄;李刚;王守利
2.辽东栎基因组DNA提取方法比较与优化 [J], 叶青雷;曾宪云
3.国产辽东栎和蒙古栎挥发性物质提取工艺优化及其香气轮廓分析 [J], 吴娟弟;牛
见明;张波;杨博;张瑜;王莹捷;韩舜愈
4.辽东栎和蒙古栎心材挥发性成分分析 [J], 牛见明;张波;吴娟弟;安双弟;马朝玲;史肖;韩舜愈
5.北京东灵山辽东栎种群DNA多样性的研究 [J], 恽锐;钟敏;王洪新;魏伟;胡志昂;钱迎倩
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
/jingpin/C93/index.htm《生态学》考研试题集60套说明：近60套试题只是从网站转载整理或考研学生提供，仅供参考、复习用河大生态学2001一、名词（30）环境,生态因子,生态幅,群落,生态位,顶级群落,群落优势度,初级生产力,生态效率,物种多样性二、填空（20）1、生态学按研究层次可分为------、-----、----、-----。
2、按环境的性质可将环境分为-----、----、------。
环境的范围大小可将环境分为----、------、-----、-----、-------。
3、生态因子一般可分为----、----、----、-----、-----。
4、生物的------期通常是一个临界期，环境因子最可能起限制作用。
5、生态系统的功能包括------、-----、----。
6、中国的植物群落分类系统以-----这依据，主要分类单位有3级-----、------、------。
7、种群的空间分布格局指------------，它一般有-----、-----、-----三种类型。
8、食物链指------，它一般可分为----、----两种类型。
9、生态金字塔指----------，按采用的单位不同，可分为----、----、----三种。
10、生物的分布主要决定于温度条件和------条件，其中，影响生物分布的重要温度指标有----、-----、----。
三、判断（10）1、如果一种生物对某一生态因子的耐受范围很广，而且这种因子又非常稳定，那么这种因子就可能成为限制因子（-）。
2、对所有生态因子耐范围都很宽的生物，它的分布一般很广（-）。
3、在自然界中经常看到生物并不在某一特定的环境因子最适的范围内生活，这是属于Shelford耐受性定律的例外情况（-）。
4、影响种群动态的因素有种群增长率、种群死亡率。
（-）5、动态生命表是根据某一特定时间对种群作一个年龄结构调查，并根据调查结果而绘制的生命表（-）。
峨眉山车前草、水辣蓼及天名精RAPD遗传多样性分析熊莉丽;王万军;谭睿;李迪强;茆灿泉【期刊名称】《现代农业科学》【年(卷),期】2009(000)006【摘要】采用RAPD分子标记技术对峨眉山保护区不同海拔高度的车前草、水辣蓼、天名精野生资源进行遗传多样性分析。
从24条随机引物中分别筛选得到5条（车前草）、3条（水辣蓼）、5条（天名精）能够产生可重复DNA片段的随机引物，PCR扩增片段的多态率分别为45％、63．9％、71％；通过遗传距离的计算和聚类分析，结果表明峨眉山不同海拔高度的车前草、水辣蓼、天名精在遗传距离上存在着一定的差异，遗传距离最大的是不同海拔之间的天名精，其次是水辣蓼，最小的是车前草。
笔者对峨眉山车前草等3种药用植物的鉴定和资源保护、利用具有一定的指导意义。
【总页数】3页(P31-33)【作者】熊莉丽;王万军;谭睿;李迪强;茆灿泉【作者单位】西南交通大学生物工程学院,四川成都610031;中国林业科学院森林生态环境与保护研究所,北京100091【正文语种】中文【中图分类】Q311.3【相关文献】1.基于RAPD标记的新疆荒漠稻区稻水象甲遗传多样性分析 [J], 王小武;付开;丁新华;吐尔逊·阿合买提;何江;郭文超2.世界双遗产四川峨眉山民族医药代表植物RAPD指纹分析 [J], 熊莉丽;王万军;郭志云;李迪强;茆灿泉3.大麦条纹病原菌的RAPD遗传多样性分析及大麦亲本抗性评价 [J], 侯静静; 马小乐; 王化俊; 何智宏; 司二静; 姚立蓉; 汪军成; 马占军; 李葆春; 杨轲; 孟亚雄4.花生RAPD反应体系的优化及其遗传多样性分析 [J], 徐彪;冯艺川;李玉发;何中国;吴松权5.贵州3种车前草的随机扩增多态性DNA(RAPD)亲缘关系分析 [J], 谭萍;李煜;赵饮虹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胡枝子属植物野生居群遗传多样性RAPD分析张吉宇;袁庆华;王彦荣;张文淑【期刊名称】《草地学报》【年(卷),期】2006(014)003【摘要】利用RAPD标记分析胡枝子属14个野生居群遗传多样性,对其60个10碱基随机引物进行筛选,选择能产生多态性谱带的20个引物,共获得209个RAPD 标记,182个显多态性,占总谱带数的87.08%.居群间观测等位基因数Aa和有效等位基因数Ae分别为1.8708和1.5868,Nei's 基因多样性指数H和Shannon's 信息指数I分别为0.3344和0.4921,揭示了居群间存在较高的遗传多样性.遗传距离介于0.1006～0.651之间,14个材料的聚类结果与形态学分类结果有相同的趋势.本研究对胡枝子属植物种质资源的保存和育种利用有一定参考价值.【总页数】5页(P214-218)【作者】张吉宇;袁庆华;王彦荣;张文淑【作者单位】兰州大学草地农业科技学院,甘肃草原生态研究所,兰州,730020;中国农业科学院畜牧研究所,北京,100094;中国农业科学院畜牧研究所,北京,100094;兰州大学草地农业科技学院,甘肃草原生态研究所,兰州,730020;中国农业科学院畜牧研究所,北京,100094【正文语种】中文【中图分类】S5【相关文献】1.福建野生蕉(Musa spp.,AB Group)3个自然居群遗传多样性的RAPD分析 [J], 张锐;赖钟雄;刘生财;张梓浩;吴金寿2.胡枝子属植物40个野生居群种子蛋白谱带多样性研究 [J], 闫伟红;徐柱;师文贵;李临杭;马玉宝3.胡枝子属野生居群遗传多样性的等位酶分析 [J], 袁庆华;张吉宇;张文淑4.岛屿植物舟山新木姜子居群遗传多样性的RAPD分析 [J], 王中生;安树青;冷欣;丁方明;郑建伟;陈琳5.濒危植物香果树自然居群遗传多样性的RAPD分析 [J], 张文标;金则新;李钧敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
