实验5 小麦萌发前后淀粉酶活力的比较

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小麦萌发前后淀粉酶活力比较
主要实验仪器 生 物 化 学 实 验
移 液 器
752分光光度计 冷冻离心机 恒 温 水 浴 沸 水 浴
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蛋白质的提取、分离纯化及将离心机置于平坦结实的地面或实验台上。 ⑵检查离心机调速旋钮是否处在0置 ⑶装入待离心液体后，把离心机转头对称位 置上的离心管（包括外套管）放在天平上平 衡，装入液体量以距管口1--2cm为宜
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小麦萌发前后淀粉酶活力比较
实验原理 生 物 化 学 实 验
1、淀粉酶的活力:设定在最适条件下(在最适温 度、最适pH、最适缓冲液离子强度等),单位时间(如 3min)内催化淀粉水解产生1mg的还原糖所需酶量 为一个活力单位。
2、还原糖的测定---- 3,5—二硝基水杨酸法: 在碱性条件下, 3,5—二硝基水杨酸与还原糖共热被 还原成红色氨基化合物(3-氨基,5-硝基水杨酸),在一 定浓度范围内,还原糖的量与反应液所呈颜色深浅程 度成正比,用分光光度法测定酶促反应生成还原糖的 量,从而测出淀粉水解的速度和酶活力。 2(C6H10O5)n + nH2 → nC12H22O11
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小麦萌发前后淀粉酶活力比较 实验步骤
生 物 化 学 实 验
一、粗酶液的制备
二、酶活力测定
三、计算酶的总活力单位
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小麦萌发前后淀粉酶活力比较
一、酶液的制备 生 物 化 学 实 验
酶的提取应尽量避免高温或强酸碱或其他激烈条件，全 部过程宜在低温下进行。种子酶与苗酶的提取时间必须相同。
各 加
5mlNaCI
取
粒 加 幼 少 苗 许 石 英 3000r/min5min，测定酶液体积V，取1ml酶液加6.9的缓 砂 冲液至5ml----稀释5倍,取其中1ml进行测定

实验5小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
小麦萌发是影响其产量和品质的重要过程，淀粉酶活力变化也能帮助我们直观的观测外围环境对小麦萌发的影响。

本实验比较了小麦进行萌发前后淀粉酶活力的变化，研究了温度对淀粉酶活力的影响。

实验例表：A组：温度为25℃； B组：温度为32℃； C组：温度为38℃；
实验设计：把不同温度的小麦种子分别放入48小时不间断浸泡，称取干重，在萌发前后测定淀粉酶活力，期间定期监测浸泡液的温度，记录萌发时间、萌发率以及最终收获率。

实验结果：实验结果显示，A组、B组和C组小麦萌发前、萌发后淀粉酶活力相比有显著性差异（P<0.05），C组的淀粉酶活度最低，温度的升高会降低小麦的淀粉酶活度。

小麦萌发率和最终收获率分别是A组最好，B组次之，C组最低。

结论：本实验结果表明，温度升高会使小麦的淀粉酶活度下降，并且可影响小麦萌发率和最终收获率，因此必须根据实际情况合理控制孕育温度，以达到有效提升小麦产量和品质的目的。

取干燥种子或浸泡2.5小时后的种子15粒作为对照（提取步骤 同上） 。
实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
3.酶活力测定 （1）取25 mL刻度试管4支，编号。 按下表要求加入各试剂（各试剂须在25℃预热10分钟） 。
Байду номын сангаас试管号
试剂 酶液（mL）
1
干燥种子（或浸泡 2.5小时后）的酶 提取液
0.5
2
发芽3或4天 幼苗的酶提 取液
释至25 mL。将各管充分混匀。
（3）用空白管作对照：在A540 nm处测定各管的光吸收值，将读
数填入下表。 试管号
1.干燥种 2. 发芽3、4 3. 标准
子的酶提 天幼苗的酶
取液
提取液
4. 空白
光吸收值（ A540 nm）
实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
4.计算 根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，即：
小麦种子， 标准麦芽糖溶液， pH6.9磷酸缓冲液，淀粉溶液 3 ，5-二硝基水杨酸， 氯化钠
分光光
实验四小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
操作步骤
1.种子发芽 小麦种子浸泡2.5小时后，放入25 ℃恒温箱内或在室温下发
芽。（一般在光照培养箱内，2-3天后开始萌发） 2.酶液提取
取发芽第3或第4天的幼苗15株，放入乳钵内，加1% 氯化钠 溶液10 mL, 用力磨碎。在室温下放置20分钟，搅拌几次。然后 将提取液离心6～7分钟（1500 r/min）。将上清夜倒入量筒，测 定酶提取液的总体积。进行酶活力测定时，用缓冲液将酶提取液 稀释10倍（ 1 mL 酶提取液+9 mL缓冲液）。
A标准 —— ＝
A未知
C标准 ——
C未知
则：c（酶液管中麦芽糖的浓度）= A酶×C标准／A标准

实验七小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
实验目的：比较小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。

实验材料和仪器：
1. 小麦种子；
2. 无菌水；
3. 恒温恒湿培养箱；
4. 淀粉酶提取液；
5. 比色皿；
6. 分光光度计。

实验步骤：
1. 准备一组小麦种子，将其分成两组，每组含有相同数量的种子；
2. 将一组小麦种子放入无菌水中浸泡，并放置在恒温恒湿培养箱中，在适宜的温度和湿度下进行萌发；
3. 另一组小麦种子作为对照组，不进行萌发处理；
4. 在小麦种子萌发完成后，取出一部分萌发后的种子；
5. 将萌发后的种子用淀粉酶提取液处理，搅拌均匀，使淀粉酶和小麦种子充分接触；
6. 将处理后的混合液分别倒入两个比色皿中；
7. 分别将比色皿放入分光光度计，设定波长和零位；
8. 记录两个比色皿中的吸光度值，作为小麦种子萌发前后淀粉酶活力的指标。

实验结果和分析：
通过比较两个比色皿中吸光度值的差异，可以得知小麦萌发前
后淀粉酶活力的变化。

如果小麦萌发后比色皿中的吸光度值较低，表示淀粉酶活力较高；如果吸光度值较高，表示淀粉酶活力较低。

根据实验结果可以得出小麦种子萌发后淀粉酶活力的比较结论。