α-淀粉酶酶活力测定实验(碘比色法)

α–淀粉酶活力测定----目视碘比色法一实验目的1. 了解α–淀粉酶酶活力测定原理。

2．掌握α–淀粉酶酶活力测定的方法步骤。

二、实验原理比色法作为一种定量分析的方法，是以生成有色化合物的显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。

常用的比色法有两种：目视比色法和光电比色法，两种方法都是以朗伯比尔定律 (A＝kLC)为基础。

酶活力的大小、即酶量的多少用酶活力单位（U）（active unit）表示。

1961年国际生物化学学会酶学委员会提出采用统一的“国际单位”（IU）来表示酶的活力，规定为：在最适条件（25℃）下，每分钟内催化1微摩尔（μmol）底物转化为产物所需的酶量定为一个活力单位，即1IU = 1μmol /min。

这样酶的含量就可用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少酶活力单位来表示（U/g或U/ml）。

淀粉（紫蓝色，30分子以上）红色糊精（红棕色，7-30分子）无色糊精（7分子以下）、麦芽糖不显色。

通过测定酶促反应分解一定量淀粉的时间，以标准糊精（红色糊精）和碘反应的颜色作为终点指示（所给定的淀粉都已转化为糊精的时间）。

碘比色法酶活力规定：在60℃条件下，1小时转化1g 淀粉变为糊精的酶量定义为1个酶活力单位。

三、实验操作1．取试管1支，加入1ml标准糊精和3ml 标准稀碘液。

2．取锥形瓶一个，加入2%淀粉20ml和Ph6.0的缓冲液5ml。

3．将锥形瓶置于60℃水浴中，保温5分钟。

4．在比色盘中加入比色碘液，每穴2滴。

5．在锥形瓶中加入淀粉酶溶液2 ml，摇匀，开始计时。

6．在反应的前4分钟，每隔1分钟从锥形瓶中取1滴液体，与比色稀碘液混合，而后，每隔30秒从锥形瓶中取1滴液体与稀碘液混合，直至呈色与终点色一致。

四、酶活性计算实验注意事项：（1）测定酶促反应在锥形瓶中进行，标准反应在试管中进行。

（2）比色盘第1号位加入标准糊精和2滴标准碘液。

（3）应时间大约在10-15分钟。

中温α–淀粉酶酶活测定一、原理α–淀粉酶制剂能将淀粉链中的α-1，4-葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特性反应应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。

二、试剂和溶液1. 碘2. 碘化钾3. 原碘液：称取11.0g碘和22.0g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500mL，贮存于棕色瓶中。

4. 稀碘液：吸取原碘液2.00mL，加20.0g碘化钾并定容至500mL，贮存于棕色瓶中。

5. 可溶性淀粉溶液（20g/L）:称取2.000g（精确至0.001g）可溶性淀粉（以绝干计）于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒入其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100mL。

溶液现配现用。

6. 磷酸缓冲液（pH=6.0）：称取45.23g磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）和8.07g柠檬酸（C6H8O7·H2O）,用水溶解并定容至1000mL。

用pH计校正后用。

7. 盐酸溶液[c（HCL）=0.1mol/L]：按GB/T601配制。

三、仪器1. 分光光度计。

2. 恒温水浴：控温精度±0.1℃。

3. 自动移液器。

4. 试管：25mm×200mm。

5. 秒表。

四、分析步骤1. 待测酶液的制备称取1g~2g酶粉（精确至0.0001g）或准备吸取酶液1.00mL，用少量磷酸缓冲液（2.6）充分溶解，将上清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液（2.6）充分研磨，最终样品全部移入定量瓶中，用磷酸缓冲液（2.6）定容至刻度，摇匀。

用四层纱布过滤，滤液待用。

注：待测中温α–淀粉酶酶液活力控制酶浓度在3.4u/Ml~4.5u/mL范围内，待耐高温α-淀粉活力控制酶浓度在60u/Ml~65u/mL范围内。

2. 测定---吸取20.0mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液5.00mL，摇匀后，置于60℃±0.2℃（耐高温α-淀粉酶制剂于70℃±0.2℃）恒温水浴中预热8min；---加入1.00mL稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反应5min；---立即用自动移液吸取1.00mL反应液，加到预先盛有0.5mL盐酸溶液和5.00mL稀碘液的试管中，摇匀，并以0.5mL盐酸溶液和5.00mL稀碘液为空白，于660nm波长下，用10mm比色皿迅速定其吸光度（A）.五、计算1. 根据吸光度查表A.1，求得测试酶液的浓度。

淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)简介：淀粉酶(Amylase ，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。

淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。

Leagene 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合物，其蓝色深浅与未经酶促反应的空白管比较，可计算出淀粉酶的活力单位。

该试剂盒通过分光光度计检测吸光度值，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。

如果采用酶标仪检测，则检测的样本数较多，100T 的比色法检测试剂盒可以检测。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 比色杯或96孔板2、 生理盐水3、 蒸馏水4、 分光光度计或酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、 KI 工作液：取出KI Solution 恢复至室温，KI Solution ：蒸馏水混匀，即为KI 工作液。

4℃避光可保存一个月。

2、 准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，冻存，用于AMS 的检测。

② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消编号 名称TE0203 100T TE0203 200T Storage试剂(A): AMS Assay buffer 50ml 100ml 4℃ 试剂(B): KI Solution 5ml10ml 4℃ 避光使用说明书1份除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。

③高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS，可以使用生理盐水或PBS等进行稀释，也可以采用ALP Assay buffer稀释。

实验一α－淀粉酶活力‎的测定一、实验目的通过本实验‎，使学生掌握‎α-淀粉酶活力‎测定的基本‎原理、方法和操作‎技能。

二、实验原理α-淀粉酶能将‎淀粉分子链‎中的α-1,4葡萄糖苷‎键随机切断‎成长短不一‎的短链糊精‎、少量麦芽糖‎和葡萄糖，而使淀粉对‎碘呈蓝紫色‎的特异性反‎应逐渐消失‎，呈红棕色，其颜色消失‎的速度与酶‎活力有关，故可通过固‎定反应后的‎吸光度计算‎其酶活力。

三、实验试剂和‎仪器（一）试剂1. 原碘液称取碘（I2）11g，碘化钾（KI）22g，用少量水使‎碘完全溶解‎，然后定容至‎500mL‎，贮于棕色瓶‎中。

2. 稀碘液吸取原碘液‎2.00mL，加碘化钾2‎0g，用水溶解并‎定容至50‎0mL，贮于棕色瓶‎中。

3. 20g／L可溶性淀‎粉溶液称取可溶性‎淀粉（以绝干计）2 000g．精确至0.001g，用水调成浆‎状物．在搅动下缓‎缓倾入70‎m L沸水中‎。

然后，以30mL‎水分几次冲‎洗装淀粉的‎烧杯，洗液并入其‎中，加热至完全‎透明，冷却，定容至10‎0m L。

此溶液需要‎当天配制。

注：采用浙江菱‎湖食品化工‎联合公司生‎产的可溶性‎淀粉。

4. 磷酸缓冲液‎（pH6.0）称取磷酸氢‎二钠（Na2HP‎O4·12H2O‎）45.23g、柠檬酸（C6H8O‎7·H2O）8.07g，用水溶解并‎定容至1 000mL‎。

配好后用p‎H计校正。

（二）仪器1. 分光光度计‎应符合GB‎9721的‎有关规定2. 秒表3. 恒温水浴（60±0.2）℃4. 试管25m‎m×2000m‎m四、实验步骤1. 待测酶液的‎制备称取酶粉l‎-2g，精确至0.0002g‎（或吸取液体‎酶100m‎L），先用少量的‎磷酸缓冲液‎溶解，并用玻璃搅‎拌棒捣研，将上清液小‎心倾入容量‎瓶中，沉渣部分再‎加入少量缓‎冲液，如此捣研3‎-4次，最后全部移‎入容量瓶中‎，用缓冲液定‎容至刻度（将估计酶活‎力除以4，即酶活力应‎在3.7-5.6IU／mL范围内‎），摇匀。

测定淀粉酶活性的两种方法的比较研究一、简述淀粉酶是一种能够催化淀粉分解为糖类物质的生物催化剂，其在食品工业、生物塑料生产以及医药等领域具有广泛的应用价值。

为了更好地了解和评估淀粉酶的活性，本研究将比较分析两种常用的测定淀粉酶活性的方法：碘量法和比浊法。

该方法系通过加入碘与淀粉样液来测量淀粉的水解程度，但是它无法避免一些还原性物质的干扰。

比浊法是基于酶反应产生胶体体系的形成，据此原理可测定淀粉酶活力。

本实验旨在比较这两种方法在测定淀粉酶活性时的优缺点，并分析其可能的原因，以期找到一种更为理想和高效的测定手段。

1. 淀粉酶的简介及重要性淀粉酶是一种能够催化淀粉分解为糖类物质的生物催化剂，它在食品工业、发酵工业以及生物塑料工业等领域具有广泛的应用。

淀粉酶的活性是衡量其性能的重要指标，催化效率越好。

研究淀粉酶活性的方法对于这些行业的发展具有重要意义。

淀粉酶在食品工业中扮演着关键角色。

在制作面条、饼干等食品时，需要确保食品中的淀粉得到充分分解，从而提高食品的口感和品质。

淀粉酶能够有效分解淀粉，使其转化为糖类物质，为食品提供甜味和黏性，因此它是食品工业中不可或缺的酶制剂。

淀粉酶在发酵工业中也有重要应用。

发酵工程中常用的糖化酶就是一种淀粉酶，它能够将淀粉转化为葡萄糖，为微生物提供能量和生长所需的碳源。

通过使用不同类型的淀粉酶，可以对不同种类的微生物进行定向发酵，生产出各种有用的产品，如抗生素、酶制剂等。

淀粉酶在生物塑料工业中也有潜在的应用前景。

生物可降解塑料是一种环保型的生物塑料，其降解过程需要淀粉酶的参与。

通过利用淀粉酶降解塑料中的淀粉成分，可以降低塑料对环境的污染，为实现可持续发展提供新的途径。

淀粉酶在各个领域都具有重要的应用价值。

研究淀粉酶活性的方法，对于推动相关领域的技术进步和产业发展具有重要意义。

2. 淀粉酶活性测定的方法和目的在淀粉酶活性的研究中，有多种方法可用于测定酶活力。

本部分将详细介绍两种常见的淀粉酶活性测定方法：碘量法和比色法，并阐述它们的目的。

α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书微量法UPLC-MS-6004100T/48S试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×1瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1支2-8℃保存试剂三液体30mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入6.25mL试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存8周；2、标准品：10mg淀粉标准品。

临用前加10mL试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成1mg/mL淀粉标准液，2-8℃保存四周。

淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。

α-淀粉酶(EC3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。

α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。

因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。

Unhydrolyzed Starch+Iodine Complex（570nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

酶标仪/可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：称取约0.1g样本，加1mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；6000g，室温离心10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。

2、液体：直接检测。

（若有浑浊则离心后进行测定）二、测定步骤1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长到570nm，分光光度计蒸馏水调零。

淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。

二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。

根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。

测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。

淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。

三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。

2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。

(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。

(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。

(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。

淀粉酶活力的测定方法淀粉酶是一类能够催化淀粉水解的酶，在生物体内和工业生产中都具有重要的作用。

准确测定淀粉酶的活力对于研究酶的性质、生物体的代谢过程以及相关工业应用都具有重要意义。

下面将介绍几种常见的淀粉酶活力测定方法。

一、碘淀粉比色法碘淀粉比色法是一种较为经典且常用的测定方法。

其原理是淀粉经淀粉酶水解后，剩余的淀粉与碘液反应生成蓝色复合物，颜色的深浅与剩余淀粉的量成正比。

通过比色法测定反应后溶液的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。

具体操作步骤如下：首先，准备一系列含有不同浓度淀粉溶液的试管，并向其中加入适量的淀粉酶溶液，在一定的温度和 pH 条件下反应一段时间。

然后，迅速向各试管中加入碘液，使反应终止。

最后，使用分光光度计在特定波长下测定各试管溶液的吸光度。

根据事先绘制的标准曲线，将吸光度值转换为剩余淀粉的浓度，从而计算出淀粉酶水解淀粉的量，进而得出淀粉酶的活力。

这种方法的优点是操作相对简单、成本较低，但缺点是灵敏度相对较低，对于低活力的淀粉酶测定可能不够准确。

二、DNS 法（3,5-二硝基水杨酸法）DNS 法是另一种常用的测定淀粉酶活力的方法。

其原理是淀粉在淀粉酶的作用下水解为还原糖，还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸在碱性条件下共热，被还原成棕红色的氨基化合物。

在一定范围内，还原糖的生成量与淀粉酶的活力成正比，通过比色测定棕红色物质的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。

操作过程如下：将淀粉溶液与淀粉酶溶液在适宜条件下反应一定时间后，取出适量反应液，加入DNS 试剂，在沸水浴中加热一段时间，使反应充分进行。

冷却后，使用分光光度计测定溶液在特定波长下的吸光度。

与碘淀粉比色法相比，DNS 法的灵敏度较高，能够更准确地测定低活力的淀粉酶，但操作过程相对复杂一些。

三、斐林试剂法斐林试剂法也是基于淀粉水解产生还原糖的原理。

斐林试剂由硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液组成，还原糖能将斐林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。

碘试液比色法测定α-淀粉酶抑制剂活性谢雨杉;李多伟;李银芳;智彩辉【摘要】建立α－淀粉酶抑制剂活性的碘试液比色测定方法，对淀粉基质液浓度、反应温度系列试验条件进行确定。

结果显示，最佳测定条件为淀粉基质液浓度为2．5％，酶促反应的最适温度40℃，平均回收率为99．03％（n＝6），精密度RSD＝1．82％。

可见，该测定方法简便、快捷、重复性良好，可作为α－淀粉酶抑制剂活性的常规测定方法。

【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P301-302,303)【关键词】白芸豆;碘试液比色法;α-淀粉酶抑制剂活性【作者】谢雨杉;李多伟;李银芳;智彩辉【作者单位】西北大学生命科学学院，陕西西安710068;西北大学生命科学学院，陕西西安 710068;陕西省西安蓝晓科技新材料股份有限公司，陕西西安710075;陕西省西安蓝晓科技新材料股份有限公司，陕西西安710075【正文语种】中文【中图分类】TS201.2+5α－淀粉酶抑制剂(α －amylase inhibitor，简称α －AI)属于糖苷水解酶。

胃肠道内唾液胰淀粉酶的活性能被α －AI有效抑制，人体对食物中主要碳水化合物的水解和消化受到阻碍或延缓，降低了食物中淀粉糖类物质的分解吸收，起到了降低血糖、血脂作用并抑制了血糖浓度的升高，在糖尿病患者的饮食治疗中起到了很好的作用;α －AI 可减少糖向脂肪转化，延缓肠道排空，增加脂肪消耗，对肥胖患者减轻体质量也起到了很好的作用。

因此，α－AI 可以用来防治糖尿病、动脉硬化症、高血脂、脂肪过多症及肥胖症［1 －2］。

从白芸豆中获得α－AI 具有高效价及耐热性而倍受关注［3］。

α－AI 能特异性抑制α－淀粉酶，从而减少α－淀粉酶对淀粉的水解，碘试液与淀粉呈蓝色反应，并在一定波长下有最大吸光度。

通过定量测定添加抑制剂前后淀粉量的变化可测得α－AI的活性［4］。

本研究对碘试液比色法测定α －淀粉酶抑制剂活性的试验条件进行系列试验，以期寻找最佳试验条件，为α－AI 的科学研究和生产检测提供可借鉴的参考数据。

实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。

二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。

酶催化的反应称为酶促反应。

生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。

For personal use only in study and research; not for commercial use能提高酶活力的物质，称为激活剂。

激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。

使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。

氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。

应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。

如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。

酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。

温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。

同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。

食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。

但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。

α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。

α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。

α-淀粉酶活力的测定α-淀粉酶活力的测定姓名___学号___ 一、实验目的:1. 掌握α-淀粉酶活力测定的基本原理及其实验方法。

二、实验原理: α-淀粉酶- 是一种内切酶- 只能水解α-1, 4糖苷键- 不能水解α-1,6糖苷键- 不能水解α-1,6糖苷键附近的α-1,4糖苷键- 产物为糊精、低聚糖、麦芽糖和少量葡萄糖α-淀粉酶活力测定的方法1(反应底物: 可溶性淀粉2(反应环境: 60?，pH为6.0，常压。

3(产物: 还原性葡萄糖4(活力测定方法:1)测定还原糖产生速度2)测定淀粉遇碘显色力下降的速度3)测底物粘度下降的进度• 还原糖与黄色的 3,5- 二硝基水杨酸显色反应来测定.• 生成物颜色的深浅与还原糖的量成正比.• 以每克酶在一定时间内生成的还原糖(麦芽糖)量表示酶活大小.三、试剂与仪器:1、仪器(1)电子天平(2)容量瓶 100mL(3)试管(4)恒温水浴锅(5)紫外可见分光光度计(6)烧杯 250 mL2(试剂(1)1% 可溶性淀粉溶液:称取可溶性淀粉(以绝干计)1. 000g(精确至0.001g，用水调成浆状物(在搅动下缓缓倾入70mL沸水中。

然后，以30mL水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100mL。

此溶液需要当天配制。

(2)0.4mol/L 氢氧化钠: 称取 1.6g 氢氧化钠，溶于少量蒸馏水，定容至100 mL.1(3)磷酸缓冲液(pH6.0): 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4?12H2O)45.23g、柠檬酸(C6H8O7?H2O)8.07g，用水溶解并定容至1000mL。

配好后用pH计校正。

(4)3,5- 二硝基水杨酸:精确称取 1g 3,5- 二硝基水杨酸溶于 20mL 1mol/L 氢氧化钠中,加入 50mL 蒸馏水,再加入 30g 酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水稀释至100mL ,盖紧瓶塞,防止CO2进入.(5)麦芽糖标准液(1mg/ml):称取0.100g麦芽糖,溶于少量蒸馏水,定容至100mL .(6)α-淀粉酶:枯草芽孢杆菌生成，最适pH 5.5-7.5,最适温度 50~70? 四、测定步骤:1. 麦芽糖标准曲线的制作:取25ml刻度试管7支,编号.分别加入麦芽糖标准液(lmg/ml) 0, 0.2, 0.6, 1.0,1.4, 1.8,2.0 ml ,然后用吸管向各管加蒸馏水使溶液达 2.0ml ,再各加 3 , 5 -二硝基水杨酸试剂2.0m1 ,置沸水浴中加热5min .取出冷却,用蒸馏水稀释至25 m1 .混匀后用分光光度计在520 nm 波长下进行比色,记录吸光度.以吸光度为纵坐标,以麦芽糖含量(mg)为横坐标,绘制标准曲线.2. 待测酶液的制备:称取酶粉0.1g，精确至0.0002g，先用少量的磷酸缓冲液溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾入容量瓶中，沉渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研3-4次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至100mL，摇匀。