探索植物蛋白的最适酶解条件

ｒ木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白的水解作用研究１

黄惠华何铁剑许南燕

ｆ华南理工大学食品与生物工程学院，５１０６４１）摘要

用木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白进行了酶解研究，结果表明：以大豆分离蛋白作为底物，木

瓜蛋白酶的反应动力学参数妇ｌ值为０．３４％，酶的最适反应ｐＨ值为７．５，在ｐＨ争Ｏ的碱性条件下有较好的适应性。酶的最大反应温度为６０＂（２。在此温度条件下，温浴１８０分钟仍能保持７０

％的酶活。２．０％一２ｊ％的大豆分离蛋白溶液经木瓜蛋白酶水解后，丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、

组氨酸、蛋氨酸等游离氨基酸含量明显增加，大豆多肽每ｌＯＯｍｌ提高９２－－９４ｍｇ，等电点分布

范围变宽，由原来大豆分离蛋白的ｐＨ３．１～４．３变为ｐＨ３．１—５．５。关键词：大豆多肽木瓜蛋白酶大豆分离蛋白

ＡＳｔｕｄｙＯｉｌＨｙｄｒｏｌｙｓｉｓｗｉｔｈＰａｐａｉｎｏｎＩｓｏｌａｔｅｄＳｏｙｂｅａｒｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ

ＨｕａｎｇＨ“ｉｈｕａＨｅＴｉｏｊｉａｎ）（ｎＮａｎｙａｎｇ（ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｄｅａｌｓｗｉｔｈｔｈｅ坶ｄｒｏｌｙｓｉｓ０ｎｉｓｏｌａｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈｐ舢．Ｔｈｅｍｓｕｌｔｓ

ｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｋｍｖａｌｕｅｏｆｐａｐａ／ｎｗｉｔｈｉｓｏｌａｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎａｓｓｕｂｓｔｒａｔｅｗａｓ３．４％．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍ

ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨｖａｌｕｅｗａｓ６０＂ＣａｎｄｐＨ７．５．Ｐａｐａｉｎｗａｓａｄａｐｍｂｌｅｔｏｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆ６０＂（２ａｎｄ

ｐＨ９．０．Ｐｅｐｔｉｄｅｗｅｒｅｒｅｌｅａｓｅｄｗｉｔｈｉ．ｎｅｒｃｍｅｎｔｏｆ９２·９４ｍｇ／ｌＯＯｍｌｗｈｉｌｅｔｈｅＳｏｌｕｔｉｏｎｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎ埘ｔｌｌ２．０－２．５％Ｗａｓｈｙｄｒｏｌｙｚｃｄｂｙｐａｐａｉｎ．Ａｎｄｔｈｅｉｓｏｅｌｅｅｔｒｉｃｐｏｉｎｔｓｏｆｔｈｅｐｅｐｔｉ幽ｓｗｅｒｅ

２００７年８月　Ａｕｇ．２００７　汕头大学学报（自然科学版）　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｈａｎｔｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　第２２卷第３期　Ｖ０１．２２　Ｎｏ．３　

文章编号：１００１—４２１７（２００７）０３—００４３—０６　

大豆蛋白酶解物抗氧化及促进微生物生长研究　

陈美珍，廖灶辉，　

（汕头大学理学院生物系，　陈英歌，何锦辉　

广东汕头５１５０６３）　

摘　要：研究Ａｌｃａｌａｓｅ蛋白酶对大豆蛋白的水解作用，通过正交设计确定酶解最佳条件，探　

讨最佳水解条件下不同酶解时间酶解物的抗氧化性和促进微生物生长的作用．结果表明，酶　解最佳条件为：ｐＨ　９．０、温度６５℃、底物酶量比１００　ｇ／ｍＬ；酶解９０　ｍｉｎ的酶解物清除自由　基能力最强，酶解３０　ｍｉｎ的酶解物对酵母菌生长有促进作用，酶解６０　ｍｉｎ酶解物对酵母菌　的代谢作用显著；酶解６０、９０　ｍｉｎ的酶解物对黑曲霉的生长均有较好的促进作用．可见，　酶解时间不同，酶解物的抗氧化活性与促进微生物生长作用有差别．　关键词：Ａｌｃａｌａｓｅ蛋白酶；大豆蛋白酶解物；抗氧化性；促进微生物生长　中图分类号：Ｑ５１４．３　文献标识码：Ａ　

Ｏ　引　言　

大豆多肽具有抗氧化性、降血压等生理功能［１　，作为天然食品抗氧化剂和保健　

食品而深受关注［４】，此外，大豆多肽还能促进有益微生物的生长、发育和代谢，被广　

泛应用于发酵工业［５】．近年来。大豆多肽主要用酶法制备，常用的酶有ｐｒｏｔａｍａｘ酶、　

Ｎｅｕｔｒａｓｅ中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合酶、Ａｌｃａｌａｓｅ碱性蛋白酶等．与其它酶相比，　

Ａｌｃａｌａｓｅ蛋白酶具有用量少、酶解效果好、在低水解度时其蛋白质水解物的苦味较低　

等优点，是生产大豆多肽的优质酶．目前对大豆多肽研究报道多见于酶法制备和酶解　

物的脱苦等［６　】。但对Ａｌｃａｌａｓｅ蛋白酶酶解大豆蛋白产生的酶解物的抗氧化活性及其　

对微生物生长的促进作用的研究少见报道．本文主要研究Ａｌｃａｌａｓｅ蛋白酶对大豆蛋白　

酶解蚕豆蛋白制备降胆固醇肽及其响应面优化

陈丹阳;韩涛;杜斌;丁轲;卞科

【摘 要】为了得到具有较高降胆固醇活性的蚕豆肽,对蚕豆蛋白的酶解条件进行了研究.通过比较6种蛋白酶对蚕豆蛋白的酶解程度以及降胆固醇能力,选择碱性蛋白酶进一步优化酶解条件.以水解度(DH)与降胆固醇能力为指标,利用单因素试验和响应面试验优化确定了酶解蚕豆蛋白制备降胆固醇肽的工艺参数.结果表明,最佳酶解参数为:酶解温度40℃,pH 9.0,酶解时间60 min,加酶量8 000 U/g,料液比1:20.验证试验后得到的水解度为14.29％蚕豆多肽产品,其对胆酸钠、甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠抑制率分别为52.98％、31.87％、25.17％,与理论模型预测值52.49％、31.44％、24.76％基本相符.

【期刊名称】《中国油脂》

【年(卷),期】2018(043)010

【总页数】7页(P46-52)

【关键词】蚕豆;蛋白质;酶解;胆固醇;多肽

【作 者】陈丹阳;韩涛;杜斌;丁轲;卞科

【作者单位】北京农学院食品科学与工程学院,北京102206;北京农学院食品科学与工程学院,北京102206;北京农学院食品科学与工程学院,北京102206;北京农学院食品科学与工程学院,北京102206;河南工业大学粮油食品学院,郑州450052

【正文语种】中 文

【中图分类】TS214;TS218

蚕豆属豆科(Leguminosae)巢菜属，又名川豆、罗汉豆、楼豆等[1]，其蛋白质含量达25%～30%[2]，在豆科植物中位居第二，仅次于大豆(35%～45%)，亦显著高于其他植物蛋白源；蚕豆蛋白氨基酸组成接近于人体和动物所需要的理想比例，赖氨酸含量是谷物的3倍，甲硫氨酸是第一限制性氨基酸，若强化蛋氨酸和色氨酸，可接近全价蛋白质[3]。但蚕豆中含有抗营养成分[4]，如蛋白酶抑制剂、植酸、凝集素，目前市场上还没有蚕豆蛋白及其深加工制品。

高胆固醇血症指血脂中胆固醇含量超过体内正常血脂的水平，可引起动脉粥样硬化、冠心病、动脉斑块等一些严重危害人体健康的疾病。近年来高胆固醇血症成为慢性病中对人类影响最大的一种[5]，长期服用他汀类药物会带来如肌肉无力、 恶心呕吐等副作用，而新兴的高效无毒且具降胆固醇活性的小分子肽引起更多的关注[6]。某些动植物蛋白酶解后具有一定的降胆固醇效果，如大豆蛋白[7]、乳蛋白[8]、紫菜蛋白[9]、花生蛋白[10]、鹰嘴豆蛋白[11]、卵黄蛋白[12]、苦荞蛋白[13]、山杏蛋白[14]、扇贝边蛋白[15]、鲈鱼蛋白[16]、丝素蛋白[17]、葵花籽蛋白[18]、豇豆蛋白[19]、亚麻籽蛋白[20]等。尚未见蚕豆蛋白酶解物降胆固醇效果的报道。

生物工程　食品研究与并发　

Ｆ０ｏｄ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎ　２０１２年３月　第３３卷第３期　

大豆球蛋白的水解研究　ｉ　５９＝：Ｉ　

邹险峰　。吴修利　。陈星　，高长城－－　

（１．长春大学农产品深加工重点实验室，吉林长春１３００２２；２．长春大学生物技术学院，吉林长春１３００２２）　

摘要：采用Ｎａｇａｎｏ法从豆粕中分离：ｋ豆球蛋白，利用大豆蛋白改性酶解大豆球蛋白制备水解肽，以单因素试验和　正交试验确定酶解最佳条件，通过高效液相法分析大豆球蛋白水解肽的分子量分布。结果显示：在２０ｇ／Ｌ的底物浓　度下的最佳条件为酶和底物比１００００Ｕ／ｇ，温度５５℃，ｐＨ８．０，水解时间４ｈ。优组合条件下的水解度为６９．６％。大豆　

球蛋白水解肽主要为１３０　ｕ￣１　０００ａ的短肽，占肽总量的８６．５％，说明大豆球蛋白水解肽的均一性极高。　关键词：大豆球蛋白；大豆球蛋白水解肽；大豆蛋白改性酶　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｉｎｉｎ　

ＺＯＵ　Ｘｉａｎ－ｆｅｎｇ　，ＷＵ　Ｘｉｕ－ｌｉ　，ＣＨＥＮ　Ｘｉｎｇ　，ＧＡＯ　Ｃｈａｎｇ－ｃｈｅｎｇ。’’　

（１．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｉｎ　Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００２２，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ；　

２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉ＆Ｔｅｃｈ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１　３００２２，Ｊｉｌｉｎ，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　Ｎａｇａｎｏ　ｍｅｔｈｏｄ，ｇｌｙｃｉｎｉｎ　ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｏｙｂｅａｎ　ｃａｋｅ　ａｎｄ　ｗａｓ　ｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｓｏｙ　

ｐｒｏｔｅｉｎ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｅｎｚｙｍｅ　ｔｏ　ｐｒｏｄｕｃｅ　ｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅ　ｐｅｐｔｉｄｅ．Ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ