生物酶解技术经验

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精心整理

天然植物有效成分的提取新技术——生物酶解技术

酶是生物体活细胞产生的,以蛋白质形式存在的一类特殊的生物催化剂。某些酶可以在常温、常压和温和的酸碱条件下,将植物细胞壁分解,较大幅度提高天然植物中有效成分的提取率,改善生产过程中的滤过速度和纯化效果,提高产品纯度和制剂的质量。

1原理

22.1 2.1. (角质、木。

最适pH 值4~52.1 半纤维素包括木聚糖、甘露聚糖、阿托伯聚糖、阿拉伯半乳聚糖和木葡聚糖等多种组分,约占植物干重的35%。含量仅次于纤维素。

半纤维素酶由β-甘露聚糖酶、β-木聚糖酶等内切型酶,β-葡萄糖苷酶、β-甘露糖苷酶、β-木糖苷酶等外切型酶以及阿拉伯糖苷酶、半乳糖苷酶、葡萄糖苷酸酶和乙酰木聚糖酶等组成。具有消化植物细胞壁的作用。

2.1.3果胶酶

果胶质属于黏液质类,是植物细胞的正常产物,多见于植物的地下部分及种子中。

果胶酶是分解果胶质的聚糖水解酶、果胶质酰基水解酶的一类复合酶的总称。固体的呈浅黄色,易溶于水;液体的呈棕褐色。最适作用温度45-50℃,作用pH 值3~6。

2.2用于分离精制、改善提取澄清度的酶

有木瓜蛋门酶、菠萝蛋白酶、葡萄糖苷酶、转糖苷酶。

3应用

3.1酶法提取

3.1.1含生物碱类成分酶法提取

以黄连提取盐酸小檗碱为例:将黄连粗粉按每g加入10U量的纤维素酶(活力单位2000U·g-1),充分混匀,加3倍量水,用0.3%硫酸调pH值至5后浸泡,在40℃下恒温水浴90min,将黄连及0.3%硫酸作溶剂置于渗漉筒中,浸渍、渗漉,收集渗漉液,用石灰乳调pH值至10~12,沉淀,抽滤,滤液用浓盐酸调pH值至l~2,加精制食盐使含盐量达7%,充分搅拌,静置24h,滤过,i)l=淀,在60℃下干燥,得盐酸小檗碱粗品。用薄层扫描法进行含量测定,结果表明:黄连经酶法提取后,所得盐酸小檗

碱含量为4

3.1.2

0.5%纤维素酶(1h,

7.68%。两种T

3.1.

4.5,3.1

6种3.2

果胶酶分解果胶、淀粉酶分解淀粉),将其降解为小分子物质或分解除去,可改善水提取液的过滤困难问题,提高液体制剂的澄清度和制剂纯度。

以决明子提取总蒽醌、青皮提取陈皮苷为例:决明子中加热水少许,温浸30min,用10倍水煎煮2h,再8倍水煎煮1.5h,滤过,合并两次滤液,浓缩至物料与药液l:5,均分为5份,分别加入复合蛋白酶I(调节到60~70℃)、复合蛋白Ⅱ(55-60℃)、果胶酶(55-65℃)、澄清剂(50~60℃)、对照空白,保温2h,定时搅拌,离心(3000rpm),过滤,将上清液和沉淀分别蒸干,结果用复合蛋白酶I处理效果较好,总蒽醌含量0.717%,而空白对照为0.223%。青皮的试验,用果胶酶处理效果较好,陈皮苷含量6.26%,而空白对照为4.47%。

4技术关键

4.1酶的种类

采用酶法处理时,所用酶的种类应根据天然植物中的有效成分,辅助成分及物料的性质来确定,不能一概而论。若采用复合酶,则复合酶的组成、比例也应筛选。关于酶的用量,需在含相同底物的提取液中加入不同量的酶进行酶解。通过测定酶解产物的含量,以确定最适用量。

4.2酶解温度

在其他条件相同的情况下,将酶反应液分成若干份,分别控制在不同的温度下进行酶解反应,测定酶反应的活性。以酶反应活性对温度作图,曲线上酶活性最高点所对应的温度就是该反应的最适温度,此时酶表现出最大的活性。若温度超出该范围,酶活性逐渐降低。

4.3酸碱度

酶反应需在一定pH值条件下进行,不同的天然植物使用酶的种类不同,酶解时的最佳pH值应根据试验来确定。

4.4

4.5

饲料博览