1 组织病理学讲义
正确的取材、合适的固定和良好的染色是优质病理工作的基础。病理工作最基本、最重要的技术是常规组织病理技术。
为适应新技术的开展，要求所需材料：
1．组织细胞的形态完整保存；
2. 最大限度保存组织或细胞成分的抗原性；
3. 抗原不弥散，以保证其准确定位。
一、组织取材
（一）一般原则
1、厚度 0.2～0.3cm；面积 1 ～ 1.5cm2。
2、皮肤、腔道器官及囊壁组织等应剪成 细条，如过长可将其缠绕成同心圆状。
3、骨组织需先经脱钙处理。
4、若需保存新鲜组织，应将所取织用锡箔纸包好，入液氮速冻，然后置-70 C冰箱中。
（二）、取材注意事项
1、刀剪应锋利、避免前后拉动和挤压。
2、应避开坏死组织和血凝块，去掉异物。
3、应取病变主体、病变与正常交界和正常组织各一块。
二、细胞取材及制片
1、印片法：操作简单、细胞抗原保存完好。
2、穿刺法：直接涂片或离心后涂片。
3、沉淀法：先离心后涂片。
4、活细胞标本制备：将细胞直接培养在盖玻片上（细胞爬片），或培养于培养瓶或培养板内，制成细胞悬液，再涂片。
第二节 固定及常用固定剂
一、概念：将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质能尽量保持其生活状态时的形态结构和位置，这一过程称。
二、固定的作用
1、保持组织、细胞与生活时相似的结构和形态，防止离体组织自溶和细菌繁殖导致的组织腐败。
2、保持定位细胞内特殊的成分，如细胞内的一些蛋白质经过固定，可沉淀或凝固定位在细胞的原有部位。
3、固定可使组织细胞中各种成分沉淀、凝固并易着色，便于区别不同的组织成分。
4、固定剂兼有组织硬化的作用，有利于切片。
5、有利于保存抗原及DNA、RNA，为免疫组化染色和核酸原位杂交做准备。
三、组织固定的注意事项
1、取材后要及时固定，尤其是温度高的季节。
2、容器：最好选择广口的容器，一是避免组织受挤压变形，二是方便取材时易于取出。
病理学的五种研究方法
病理学是研究疾病诊断和治疗的一门学科，为了更好地了解疾病的本质，病理学家们采用了多种研究方法。本文将介绍病理学的五种研究方法。
一、组织学方法
组织学是病理学的基础，它主要研究组织结构的变化。组织学方法是通过取材、制片、染色等技术，对组织进行观察和分析，以确定疾病的类型和范围。
组织学方法的优点是可以直接观察病变组织的形态和结构，有利于确定疾病的诊断和治疗。但是它的缺点是不能直接观察病变组织的功能和代谢过程。
二、细胞学方法
细胞学是病理学的重要分支，它主要研究细胞的形态和功能。细胞学方法是通过采用细胞培养、细胞染色等技术，对细胞进行观察和分析，以确定疾病的类型和范围。
细胞学方法的优点是可以直接观察细胞的形态和功能，有利于确定疾病的诊断和治疗。但是它的缺点是不能直接观察组织结构和代谢过程。
三、免疫学方法
免疫学是病理学的重要分支，它主要研究免疫系统和免疫反应。免疫学方法是通过采用免疫染色、免疫电镜等技术，对免疫反应进行观察和分析，以确定疾病的类型和范围。
免疫学方法的优点是可以直接观察免疫反应的特征和机制，有利于确定疾病的诊断和治疗。但是它的缺点是不能直接观察组织结构和细胞形态。
四、分子生物学方法
分子生物学是病理学的新兴分支，它主要研究生物分子的结构和功能。分子生物学方法是通过采用PCR技术、DNA测序技术等技术，对生物分子进行分析和研究，以确定疾病的基因和突变。
分子生物学方法的优点是可以直接观察生物分子的结构和功能，有利于确定疾病的基因和突变。但是它的缺点是不能直接观察组织结构、细胞形态和免疫反应。
五、影像学方法
影像学是病理学的重要分支，它主要研究疾病的影像学表现。影像学方法是通过采用X光、CT、MRI等技术，对疾病的影像学表现进行观察和分析，以确定疾病的类型和范围。
影像学方法的优点是可以直接观察疾病的影像学表现，有利于确定疾病的诊断和治疗。但是它的缺点是不能直接观察组织结构、细胞形态和免疫反应。
石蜡切片技术
病理诊断是所有其他诊断(包括临床诊断、影像诊断、实验室检查诊断乃至分子诊断)的金标准。因此学习相关病理诊断技术具有重要意义。病理技术不仅可以作为临床诊断的金标准，还可以帮助临床查明死因，对我们研究生来说还可以提供教学、科研的资料。
病理学科是一门基础与临床之间起着桥梁作用的重要学科，病理研究方法在技术工作上又是多方面的，有尸体解剖，大体标本的制作、制片技术（石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片、半薄切片、超薄切片）组织化学方法，免疫酶标技术、荧光技术、摄影技术等。
第一节 组织制片的概述
组织制片技术的应用，从1665年由HOOk发现细胞开始，已有300多年的历史。最早应用冰冻切片；随后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成石腊切片；后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制作切片。
第二节 制片的种类
1、组织切片法
任何组织切片必须依靠切片机将组织切成薄片（厚度以μm计），再进行染色而得到结果。在切成薄片以前必须设发使组织内部渗入足够的支持物质，使组织保持一定的硬度，然后使用切片机进行切片。渗透到组织中的支持剂（物质）有多种，如石腊、明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等。冰冻组织切片发是直接利用快速冷冻法进行切片。
2、组织非切片法
不用切片机，不经过切片手续而制成组织切片的方法，包括整体封藏法、浮片法、压碎法和组织直接印片法。这些方法操作简单而快，可根据制片的需要进行选择使用。
石蜡切片技术
石蜡切片法组织切片的主要程序： 取材→组织固定→固定后处理→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→脱蜡→水化→水洗→常规或特殊染色→脱水→透明→树胶封片。
一、取材
取材(DrawMaterials)是根据实验目的及临床活检、尸解组织的病变程度而合理取得组织材料。为了制作优质的切片，取材时组织愈新鲜愈好，并应及时固定。 （一）病理标本的来源分类：
有临床活检、尸体解剖、实验动物、培养细胞
.
1 / 26 荧光原位杂交 FISH
用DNA探针与组织切片上互补的DNA杂交,通过观察荧光信号在染色体上的位置和颜色来反映相应基因的情况 .
第一章 病理检验技术概述
病理学的作用：
1、研究疾病的病因、发病机制,认识
疾病的发生发展规律
2、为临床诊断疾病、治疗疾病、分析预
后提供依据等.
病理检验的定义：
------在临床医疗实践中,通过对患者病变组织或细胞进行检查,以协助临床诊断疾病的方法称为病理检验.
一、病理检验的主要任务
〔一〕确定疾病的诊断
〔二〕为临床选择治疗方案提供依据
〔三〕提供有关预后因素的信息.〔最正确、最可靠、最后的诊断〕
〔四〕了解疾病的发展与分析疗效
〔五〕为科学研究积累资料
〔六〕为提高临床诊断水平服务
二、病理检验分类
〔一〕细胞学检验〔脱落细胞、细针穿刺吸取〕
〔二〕组织学检验---最后的诊断
活体组织检验、手术标本检验、手术中病理检验
〔三〕尸体剖验
病理学技术：
在病理学临床与科学研究工作中使用的各种技术方法统称为病理学技术.病理检验技术的质.
2 / 26 量和水平是临床病理诊断工作中至关重要的因素."技术是病理学之母.〞
第二节、病理检验技术常规工作
收发工作
协助取材和尸体剖检工作
制作制作切片与细胞学涂片
病理资料管理与检索
药品、物资的管理与仪器维护
大体标本的收集和制作
第六章 组织制片技术 P39
常规石蜡切片制作程序
组织固定→取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→染色→封片→观察
第一节 组织块的处理
〔一〕组织切片制作过程中的各种操作：
1、取材与固定：合理取材、与时固定；
2、洗涤、脱水、透明；
4、浸蜡、包埋；
5、切片、贴片〔展片、捞片〕和染色：
6、封片：长期保存.
一、取材：
-------按照病理检查的目的和要求,切取适当大小和数量的组织块,用于制作组织切片的过程.
