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西妥昔单抗联合顺铂对鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤生长作用的影响

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󰀁基础研究󰀁中国临床药理学与治疗学中国药理学会主办CN34󰀁1206󰀁R,ISSN1009󰀁2501E󰀁mail:ccpt96@21cn.com2008Jul;13(7):735-739

2008󰀁03󰀁28收稿󰀁2008󰀁05󰀁16修回国家自然科学基金(30572363);广东省自然科学基金(05001693)李婧婧,女,硕士,研究方向:肿瘤生物治疗。Tel:020󰀁87343150󰀁E󰀁mail:ljj830606@yahoo.com.cn张晓实,通讯作者,男,主任医师,研究方向:肿瘤生物治疗。Tel:020󰀁87343383󰀁E󰀁mail:zxs617@hotmail.com西妥昔单抗联合顺铂对鼻咽癌

荷瘤裸鼠移植瘤生长作用的影响

李婧婧1,2,冯公侃1,3,朱孝峰1,3,张晓实1,2

1华南肿瘤学国家重点实验室,2中山大学肿瘤防治中心生物治疗研究中心,

3中山大学肿瘤防治中心实验研究部,广州510060,广东

摘要󰀁目的:探讨靶向表皮生长因子受体(EGFR)

特异性单抗西妥昔单抗单药及与顺铂联合应用对

鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的作

用机制。方法:将鼻咽癌细胞HONE1制成细胞悬

液后接种于裸鼠皮下,待成瘤后将裸鼠随机分入

4个处理组:生理盐水组、西妥昔单抗组、顺铂组

及两药联合组。定期测量每只裸鼠肿瘤最大径和

最小径,计算肿瘤体积。用药结束后,处死裸鼠,

取出肿瘤组织,称重,计算抑瘤率。用免疫组化方

法检测肿瘤组织中磷酸化蛋白激酶B(p󰀁AKT)和

人磷酸化细胞外信号调节激酶(p󰀁ERK)表达。结

果:与生理盐水组相比,西妥昔单抗单药组肿瘤体

积变化及治疗后平均瘤重差异均无统计学意义,

顺铂单药组及两药联合组均有抑瘤效应,以两药

联合组抑瘤效果尤为显著。免疫组化显示肿瘤组

织AKT和ERK磷酸化水平在顺铂处理组上调,而

在西妥昔单抗单药及联用组则较低。结论:西妥

昔单抗单药对HONE1鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤的

生长无明显影响,但其与顺铂联用可增加顺铂的

抑瘤作用。

关键词󰀁鼻咽癌;表皮生长因子受体;西昔妥单

抗;顺铂中图分类号:R965.1

文献标识码:A

文章编号:1009󰀁2501(2008)07󰀁0735󰀁05

在肿瘤发生、发展过程中,多种因素可导致表

皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,

EGFR)表达上调。EGFR的过表达可导致受体过

度激活,从而使得下游信号途径异常活化,最终影

响细胞转化、增殖、凋亡、血管生成、侵袭和转移等

生物学行为[1]。西妥昔单抗(cetuximab,IMC󰀁

C225)是特异性靶向EGFR胞外区人鼠嵌合型单

克隆抗体,体外研究已显示西妥昔单抗对多种肿

瘤细胞株均具有显著抑瘤作用[2-4],目前已被美

国FDA批准用于晚期结、直肠癌和化疗失败复发

性和转移性头颈肿瘤。鼻咽癌是华南及东南亚地

区高发肿瘤之一,因其恶性程度高、进展快、淋巴

结转移率较高,确诊病人多数为晚期患者。而晚

期病人对于常规的放、化疗均存在不同程度耐

受[5]。已有研究报道EGFR在鼻咽癌组织中广泛

高表达,并且是鼻咽癌独立预后因素[6-7]。因此,

针对EGFR分子靶向治疗可能成为提高鼻咽癌治

疗疗效有效策略。为明确西妥昔单抗与顺铂联用

在体内对鼻咽癌细胞生长的影响,进行了西妥昔

单抗和顺铂联用对鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤生长实

验研究,并探讨了可能作用机制。

1󰀁材料与方法

1.1󰀁细胞株与细胞培养󰀁人鼻咽癌细胞株HONE1由本中心保存,在含有10%胎牛血清、󰀁735󰀁100󰀁g󰀁mL青霉素和100󰀁g󰀁mL链霉素以及

2mmol󰀁L谷氨酰胺RPMI󰀁1640培养液中,置

37󰀁、体积分数为5%CO2温箱中培养。取处于

对数生长期细胞进行实验。

1.2󰀁药品与试剂󰀁西妥昔单抗(cetuximab)为

Merk公司产品;顺铂(cisplatin,DDP)为云南生物

谷公司生产;RPMI󰀁1640培养基和胎牛血清购自

GIBCO公司;磷酸化蛋白激酶B(p󰀁AKT)(Ser473)

为SantaCruz公司产品;人磷酸化细胞外信号调节

激酶(p󰀁ERK)购自Cellsignaling公司;免疫组化试

剂盒PV6001、PV6002;DAB显色试剂盒;山羊血清

封闭液、EDTA抗原修复液等均购自中山金桥生

物公司分装的美国Zymed公司产品。

1.3󰀁实验仪器󰀁细胞CO2培养箱(美国Forma

Scientific公司),5804R高速离心机(德国Eppen󰀁

dorf公司),DP71图像采集系统(日本Olympus公

司)。

1.4󰀁实验动物󰀁40只4~5周龄的BALB󰀁C(nu󰀁

nu)裸鼠,SPF级,体重(20󰀁2)g,雌雄各半,购自

广州中医药大学实验动物中心,实验动物质量合

格证号:SYXK(粤)2003󰀁0001粤监证字2007A015,

SPF级BALB󰀁C裸鼠。所有裸鼠均由中山大学实

验动物中心饲养,医学实验动物使用许可证号:

SYXK(粤)2007󰀁0081。

1.5󰀁体内抗瘤实验󰀁将处于对数生长期的

HONE1细胞用0.25%胰酶消化,血清中和后离心

5min,1000r󰀁min,再重悬于无血清RPMI󰀁1640培

养液中制成1󰀁107细胞悬液。取0.2mLHONE1

细胞悬液接种于裸鼠右侧腋窝皮下,4d后肿瘤

体积约在100mm3左右,根据性别分组,按肿瘤体

积大小将裸鼠随机分成4个处理组,每组动物数

为10只,雌雄各半,分别为生理盐水组(0.2mL󰀁dose,q2d)、西妥昔单抗组(1mg󰀁dose,q3d)、顺铂

组(3mg󰀁kg,q2d)和两药联用组。两药联用时,同

时给药,无特定给药顺序要求。药物处理前及处

理后由同一实验人员每2d用毫米游标卡尺测量

每只裸鼠肿瘤最大、最小直径,计算肿瘤体积:肿

瘤体积(mm3)=󰀁󰀁6󰀁[(最大径+最小径)󰀁2]3。

腹腔注射给药,连续10d,停药2d后,处死裸鼠,

取出肿瘤组织,称重,计算抑瘤率:抑瘤率(IR%)

=(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)󰀁对照组

平均瘤重󰀁100%,重复实验3次。

1.6󰀁免疫组化󰀁将取出新鲜瘤组织用4%福尔

马林溶液固定,并石蜡包埋,制成5󰀁m左右切

片。免疫组化采用即用型二步法具体操作步骤如

下:切片常规脱腊,梯度酒精水化,抗原修复(ED󰀁

TA缓冲液,pH7.8),山羊血清室温封闭0.5h,

一抗(1󰀁200)室温封闭2h,二抗室温封闭1h,

DAB显色,苏木素复染,晾干封片(具体参考免疫

组化试剂盒及DAB显色试剂盒说明书),重复实

验3次。

1.7󰀁统计学方法󰀁数据以均数󰀁标准差(x󰀁s)

表示,显著性检验采用t检验,以P<0.05为差

异有统计学意义。

2󰀁结果

2.1󰀁各处理组裸鼠肿瘤体积变化󰀁各处理组治

疗前后未见药物毒副反应,裸鼠体重无明显变化。

西妥昔单抗单药组肿瘤体积变化与生理盐水对照

组相比差异无统计学意义(P>0.05),而顺铂单

药组和两药联用组肿瘤体积均明显小于对照组

(P<0.05),两药联合组肿瘤体积增长较顺铂单

药组慢,差异有统计学意义(P<0.05,表1,图1)。

表1󰀁各组裸鼠肿瘤体积的动态变化(x󰀁s,n=10)

处理天数(d)肿瘤体积(mm3)

生理盐水组西妥昔单抗组顺铂组两药联用组

024681012101󰀁13275󰀁117457󰀁129731󰀁212991󰀁2181143󰀁2841243󰀁31998󰀁13222󰀁104321󰀁81562󰀁190764󰀁22510264󰀁36241146󰀁37699󰀁9189󰀁59297󰀁97b

409󰀁126b

524󰀁126b

672󰀁150b

706󰀁149b99󰀁13177󰀁59b

210󰀁87b

314󰀁182b

422󰀁196b458󰀁209b484󰀁209b与生理盐水组比较bP<0.05󰀁736󰀁ChinJClinPharmacolTher2008Jul;13(7)

图1󰀁各组裸鼠肿瘤生长曲线(x󰀁s,n=10)

2.2󰀁各处理组抑瘤率及平均瘤重比较󰀁用药结

束后2d,处死裸鼠,取出肿瘤组织,称重,计算各

组抑瘤率。西妥昔单抗组抑瘤率为4.3%;顺铂

组抑瘤率为45.4%;两药联用组抑瘤率为

58.1%。西妥昔单抗组瘤重(1.16󰀁0.31)g较生

理盐水组(1.21󰀁0.14)g差异无统计学意义。而两药联合组瘤重(0.51󰀁0.15)g明显低于顺铂

单药组(0.66󰀁0.09)g(P<0.05,图2)。

2.3󰀁肿瘤组织中p󰀁AKT及p󰀁ERK表达情况󰀁

免疫组化结果显示p󰀁AKT及p󰀁ERK在顺铂单药

处理组中较生理盐水组明显上调,而西妥昔单抗

组和两药联合组则无明显变化(图3)。

图2󰀁各组处理结束后的平均瘤重(x󰀁s,n=10)

图3󰀁p󰀁AKT和p󰀁ERK在各组裸鼠肿瘤组织中表达(SP法,󰀁400)

3󰀁讨论

目前,放化疗是鼻咽癌主要治疗手段,顺铂是

常用药物之一[8],但常易引发耐药而致预后较差,

同时顺铂毒性反应所导致低耐受性也限制了其临

床应用。因此,寻找低毒安全的化疗增敏药物是

提高顺铂临床应用效果中的一个重要方向。EG󰀁

FR信号通路异常活化在肿瘤发生、发展过程中起

到重要作用,靶向EGFR小分子抗体西妥昔单抗

已在多种肿瘤体外和临床实验中取得了良好抑瘤

效果[9-11]。在体外实验中证实,西妥昔单抗其单药并无明显生长抑制作用,但具有增敏鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、SUNE1、HONE1对顺铂敏感性

作用。为进一步确认西妥昔单抗在体内对于鼻咽

癌生长的影响,及其与顺铂联用的抑瘤作用,本研

究对西妥昔单抗单药及与顺铂联用抑制HONE1

鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤生长进行了研究。本实验

采用了生理盐水作为阴性对照,以细胞毒药物顺

铂为阳性对照,对西妥昔单抗单药处理和与顺铂

联用处理疗效进行观察评估。对各处理组生长曲

线和处理后平均瘤重比较,结果显示西妥昔单抗

对鼻咽癌荷瘤裸鼠移植瘤生长无明显抑制作用,

而其可明显提高顺铂抑制作用。本研究中,西妥

昔单抗对于鼻咽癌细胞株HONE1体内效应与在󰀁737󰀁中国临床药理学与治疗学2008Jul;13(7)

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西妥昔单抗联合放化疗治疗进展期鼻咽癌效果分析

西妥昔单抗联合放化疗治疗进展期鼻咽癌效果分析

西妥昔单抗联合放化疗治疗进展期鼻咽癌效果分析

曾甜;张艳玲;李建军

【期刊名称】《中国医学前沿杂志（电子版）》

【年(卷),期】2016(8)4

【摘 要】ObjectiveTo analyze the clinical effect of cetuximab combined

with chemotherapy and radiotherapy in the treatment of advanced

nasopharyngeal carcinoma.MethodThe clinical data of 138 patients with

advanced nasopharyngeal carcinoma treated in our hospital from August

2010 to August 2012 were retrospectively analyzed. According to the

treatment plan, 74 patients who received chemotherapy and radiotherapy

were included in control group, and 64 patients treated with cetuximab

combined with chemotherapy and radiotherapy were included in

observation group. The recent and future curative effects and adverse

reactions in the two groups of patients were compared.ResultThe total

effective rate, total control rate, overall survival rate, and no distant

西妥昔单抗在鼻咽癌治疗中的临床应用及护理

西妥昔单抗在鼻咽癌治疗中的临床应用及护理

西妥昔单抗在鼻咽癌治疗中的临床应用及护理

龙素华;陈国焱

【期刊名称】《健康天地》

【年(卷),期】2010(004)003

【摘 要】@@ 西妥昔单抗,是一种肿瘤分子靶向药物.分子靶向药物利用肿瘤细胞与正常细胞之间分子生物学上的差异(包括基因、酶、信号转导等不同特性),抑制肿瘤细胞的生长增殖,最后使其死亡.分子靶向药物的作用途径包括调节细胞增殖的信号转导途径、调节血管生成的转导途径、肿瘤抑制基因丢失功能的转导等.

【总页数】2页(P54,56)

【作 者】龙素华;陈国焱

【作者单位】550003,贵州省肿瘤医院头颈肿瘤科;550003,贵州省肿瘤医院头颈肿瘤科

【正文语种】中 文

【相关文献】

1.同期放化疗联合西妥昔单抗在局部晚期鼻咽癌的临床应用及护理对策 [J], 陈晓红;赵倩;王彤鑫;徐飞飞;马广敏

2.西妥昔单抗联合FOLFOX4方案在转移性结直肠癌治疗中的临床应用价值分析

[J], 徐全晓;赵旭林;马磊

3.面罩及低熔点铅挡块在鼻咽癌治疗中的临床应用 [J], 梁锦辉;朱锦贤;钟伟铭;余海坤

4.西妥昔单抗在晚期鼻咽癌治疗中的疗效和安全性分析 [J], 赵高洋 5.诱导化疗联合放疗在中晚期鼻咽癌治疗中的临床应用 [J], 张艳玲;胡绍毅;边志衡;左文伟;梁后杰

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西妥昔单抗对鼻咽癌放疗敏感性的增强作用及机制

西妥昔单抗对鼻咽癌放疗敏感性的增强作用及机制

西妥昔单抗对鼻咽癌放疗敏感性的增强作用及机制

杨洁;祝淑钗

【期刊名称】《中国老年学杂志》

【年(卷),期】2013(033)022

【摘 要】目的 探讨西妥昔单抗(C225)对鼻咽癌细胞放疗的增敏作用及作用机制.方法 MTT生长抑制实验检测Co60-γ线对鼻咽癌CNE1细胞生长的半数抑制照射剂量(IC50值);Western印迹检测表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化和总蛋白表达的变化.结果 Co60γ线照射对鼻咽癌CNE1细胞生长的IC50值为(4.21±0.56) Gy,联用C225后,IC50值变为(2.07±0.34)Gy,有显著性差异(P＜0.01),联用C225后放疗对鼻咽癌CNE1细胞的敏感性增加了2.03倍.Co60γ线照射CNE1细胞后6、12、24 h均检测到p-EGFR表达增加,联用C225后p-EGFR的表达出现了下调,总EGFR的表达无显著性改变.结论 鼻咽癌放疗过程中存在EGFR的激活,C225抑制鼻咽癌放疗后所诱发的EGFR激活可能是其对鼻咽癌细胞放疗增敏作用的主要作用机制.

【总页数】3页(P5669-5671)

【作 者】杨洁;祝淑钗

【作者单位】河北医科大学第四医院放疗科,河北 石家庄050011;河北医科大学第四医院放疗科,河北 石家庄050011

【正文语种】中 文

【中图分类】R739.6 【相关文献】

1.EGFR通路与结直肠癌细胞放疗敏感性的关系及西妥昔单抗对结直肠癌放疗敏感性的影响效果研究 [J], 梁磊

2.西妥昔单抗联合紫杉醇对人鼻咽癌CNE－1细胞活力的影响及其可能的分子机制探讨 [J], 王文慧;王晓玲

3.西妥昔单抗及氟尿嘧啶对大肠癌细胞放疗敏感性影响 [J], 任宏涛;王中卫;王宝锋;王亚利;黄珊;王西京

4.Epstein Barr病毒编码的microRNA bart7调节鼻咽癌放疗敏感性的机制 [J],

PENG Xianbing;DAI Runzhi

亚砷酸联合顺铂对人鼻咽癌裸鼠移植瘤及增殖细胞核抗原和Ki-67的影响

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黄雪琴;胡俊丽;周慧;陈喜德;王燕燕;张月飞

【期刊名称】《中国耳鼻咽喉头颈外科》

【年(卷),期】2016(0)2

【摘 要】目的研究亚砷酸(As_2O_3)对人鼻咽癌CNE-2Z裸鼠移植瘤与增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、Ki-67的作用,探讨该药物的抗肿瘤机制。方法建立人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组(Na Cl)组、As_2O_3组、顺铂(Cisplatin,DDP)组和As_2O_3+DDP组,观察裸鼠移植瘤生长情况;采用HE染色,于光镜下观察各组移植瘤组织细胞病理形态学变化,同时观察心、肝、肺、肾组织有无病理学改变及瘤细胞转移。进行血常规检测,采用免疫组织化学方法检测PCNA、Ki-67的表达。结果 As_2O_3、DDP及两药联用均明显抑制人鼻咽癌裸鼠移植瘤生长,裸鼠的心、肝、肺和肾未见病理学改变和瘤转移,联合用药未增加造血系统的毒性,并能下调PCNA和Ki-67的表达。结论亚砷酸可抑制人鼻咽癌CN E-2Z裸鼠移植瘤的生长,此作用可能与下调PCNA、Ki-67的表达相关。

【总页数】5页(P93-97)

【关键词】顺铂;鼻咽肿瘤;增殖细胞核抗原;免疫组织化学;亚砷酸;裸鼠

【作 者】黄雪琴;胡俊丽;周慧;陈喜德;王燕燕;张月飞

【作者单位】广东医学院附属医院耳鼻咽喉科;广东医学院附属医院骨科;东莞市厚街医院 【正文语种】中 文

【中图分类】R735.2

【相关文献】

1.亚砷酸联合顺铂对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长和p16基因甲基化的作用 [J], 黄雪琴;王晓刚;胡俊丽;周慧;周克元;张月飞;罗国庆

2.亚砷酸对人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长及survivin、PTEN表达的影响 [J], 黄雪琴;周慧;胡俊丽;王晓刚;张月飞

3.莪术醇联合氟尿嘧啶对裸鼠胃癌移植瘤生长、增殖细胞核抗原和P27表达的影响 [J], 王冬;范立侨;马希中;李勇;赵群;檀碧波;张志栋;崔平