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高效液相色谱法及其在药物分析中的应用以液体为流动相的色谱法称为液相色谱法。
用常压输送流动相的方法为经典液相色谱法，这种色谱法的柱效能低、分离周期长。
高效液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，简称HPLC）是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法。
与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细（一般为10µm以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。
目前，已经发展了多种不同的固定相，有多种不同的分离模式，使高效液相色谱法的应用范围不断扩大。
下面介绍高效液相色谱法的有关知识，新的方法和技术以及在药物分析中的应用。
一、分类高效液相色谱法按分离机理的不同可分为以下几类：（一）吸附色谱法（adsorptionchromatography）以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。
使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。
在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力的不同而被分离。
组分的极性越大、固定相的吸附力越强，则保留时间越长。
流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。
（二）液-液分配色谱法（liquid-liquidchromatography)液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K)的不同而被分离。
目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法（简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释。
键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法。
按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。
固相萃取-高效液相色谱手性流动相添加剂法测定血浆中氧氟沙星对映体王乃毅;白小红【期刊名称】《山西职工医学院学报》【年(卷),期】2012(022)001【摘要】目的:建立固相萃取-高效液相色谱法(high performance liquid chromatogoraphy,HPLC)拆分及测定血浆中氧氟沙星对映体的方法.方法:以L-异亮氨酸为配合剂,Cu2+为配合离子,采用HPLC手性流动相添加剂法测定血中氧氟沙星对映体的含量.色谱柱为ODS-BP柱(250 mm×4.6 mm,5μm),内标物为环丙沙星,流动相为手性添加剂溶液(含1.31 g/L L-异亮氨酸和0.80 g/L CuSO4)-甲醇(81.5∶18.5),激发波长为330 nm,发射波长为504 nm,流速为0.8 mL/min.其中,应用C18固相萃取小柱萃取血浆中的氧氟沙星.结果:在经过优选的色谱条件下,对映体可以良好分离,分离度达到1.5以上;S-(-)-与R-(+)-氧氟沙星的线性范围均为0.08～20 μg/mL(r分别为0.994 5和0.994 7),最小检测限均为4 ng/mL,平均萃取回收率分别为89.77％和88.07％,平均回收率分别为97.19％和98.39％,日内RSD分别为2.9％和3.0％,日间RSD为2.0％和2.2％.结论:该法血样处理简单,干扰小,灵敏度高,精密度好,可以作为对血浆中左、右旋氧氟沙星分别测定的方法.【总页数】4页(P1-4)【作者】王乃毅;白小红【作者单位】山西职工医学院,山西太原030012;山西医科大学,山西太原030001【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.高效液相色谱法分离药物对映体中手性流动相添加剂的应用 [J], 祝艳琳;章靖;田丹碧2.高效液相色谱手性流动相法测定盐酸肾上腺素注射液中 S-对映体含量 [J], 金丽;周建丽;张晓丹;古卓良;卜莹3.正相高效液相色谱-手性配位基交换流动相法测定人血清中的甲状腺素对映体 [J], 王荣;谢景文;贾正平;胡晓丽;谢华;李永民;陈立仁4.RP－HPLC手性流动相添加剂法分析尿中氧氟沙星对映体 [J], 曾苏;章立;刘志强5.高效液相色谱手性流动相添加剂法拆分愈创甘油醚对映体 [J], 翟明翚;韩爽;王颖;陈志伟;苏立强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
试述手性药物分离CRD、CMP和CSP方法的特点。
HPLC用于手性分离概括起来可分为两大途径：间接法和直接法。
其中直接法包括手性流动相添加剂法（CMP）和手性固定相法（CSP），间接法（CDR)又称为非对映体拆分法或柱前手性衍生化法。
间接法（CDR)，是手性化合物对映体在分离之前把手性药物对映体混合物在预处理液中进行柱前衍生化，形成一对非对映异构体，非对映体对与固定相之间的键合力如偶极-偶极、电荷转移、氢键、疏水性不等，产生差速迁移而被分离。
其优点在于：可采用通用的非手性柱分离；通过衍生化可提高检测灵敏度；分离条件简单；分离效果好。
而其缺点在于：要有可被衍生化的基团；要有高光学纯度的手性试剂；对个对映体衍生化率速和平衡常数应一致；衍生化和色谱过程中不能发生消旋化。
手性流动相添加剂法（CMP）是将手性试剂加到LC流动相中，与手性药物生成可逆的非对映体复合物，根据复合物的稳定性，在流动相中的溶解性和与固定相的键合力差异，于非手性固定相上分离对映体。
优点是：不需昂贵的手性柱，亦无须进行柱前衍生，手性添加剂可视要求而更换，可变范围较宽，使用比较方便。
缺点是：可拆分的化合物范围有限；某些添加剂不够稳定且往往会干扰测验。
手性固定相法（CSP）是将手性试剂化学键合到固定相上制成手性柱，外消旋体中的一个手性物质与手性固定相发生作用，生成不稳定的短暂复合物，而两者在固定相中的保留时间不同，从而达到分离的目的。
优点是：能广泛适用于各类化合物，适于常规及生物样品的分析测定；除非必须衍生化，否则无需高光学纯度试剂；样品处理步骤简单；制备分离方便，定量分析的可靠性较高；缺点是：样品有时也须作柱前衍生（但不一定是手性衍生化试剂）；对样品结构有一定限制，其适用性尚不及普通HPLC固定相（包括正相和反相）那样广泛。
该方法是目前认为非常简单有效，而且应用最为广泛的方法，迄今为止，CSP柱商品已有40多种，但价格大多昂贵，尚未有一种具有类似ODS柱的普遍适用性。
