大鼠心缺血再灌注实验设计

尼可地尔后处理对心肌缺血-再灌注损伤大鼠心肌的保护作用李悦玮;张文琪;孙景辉;张科强【摘要】目的:观察尼可地尔后处理对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌的保护作用,并探讨其作用机制.方法:26只SD大鼠随机分为对照组(8只)、盐酸异丙肾上腺素(ISO)组(8只)和尼可地尔后处理组(10只).对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水,ISO组大鼠腹腔注射ISO 5 mg·kg-1,每隔24 h重复注射1次,连续注射3d;尼可地尔后处理组于注射ISO 1 h后尾静脉注射尼可地尔(1 mg·kg-1),每日1次,连续3d.于第3次注射ISO后24 h断尾取血后处死,检测各组大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸激酸(CK)活性；常规HE染色观察各组大鼠心肌组织形态学表现；免疫组织化学染色法检测Caspase-3蛋白的表达；TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况.结果:尼可地尔后处理组与对照组比较血清LDH和CK活性差异无统计学意义(P＞0.05),但2组均低于ISO组(P＜0.05).HE染色,ISO组大鼠局部心肌组织变性坏死,伴有炎细胞浸润；尼可地尔后处理组大鼠坏死心肌细胞明显减少,炎症反应轻微；对照组大鼠心肌无异常表现.免疫组织化学染色,ISO组大鼠大量心肌细胞胞浆表达Caspase-3,对照组和尼可地尔后处理组大鼠Caspase-3无表达.尼可地尔后处理组细胞凋亡指数(AI)较ISO组明显降低(P＜0.01).结论:尼可地尔可减轻大鼠MIRI,其作用机制可能与抑制Caspase-3激活、减少细胞凋亡有关.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(038)006【总页数】5页(P1160-1163,后插4)【关键词】心肌缺血-再灌注损伤;尼可地尔;缺血后处理;药物后处理;细胞凋亡【作者】李悦玮;张文琪;孙景辉;张科强【作者单位】吉林大学第一医院儿内五科,吉林长春130021;吉林大学中日联谊医院心内科,吉林长春130033;吉林大学第一医院儿内五科,吉林长春130021;吉林大学第二医院医务部,吉林长春130041【正文语种】中文【中图分类】R542.2缺血性心脏病一直是引起患者心力衰竭和死亡的主要原因［1］。

心肌缺血动物模型制备方法心肌缺血动物模型是研究心血管疾病，如心肌梗死、心绞痛等的常用方法。

本文将介绍制备心肌缺血动物模型的具体步骤。

材料与仪器1. 大鼠或小鼠2. 氧气和二氧化碳混合气体3. 麻醉仪4. 灭菌扫描仪5. 心电图仪6. 鼠标心脏解剖仪7. 组织染色和电镜检查仪8. 淬灭钳和缝合针9. 氧气麻醉设备10. 细胞色素标记试剂盒方法1. 麻醉动物：选择体重在200-300g的大鼠或小鼠，放入麻醉仪中，将氧气和二氧化碳混合气体注入到呼吸气道，使动物处于深度麻醉状态。

2. 在鼠胸部上方剃毛并用消毒酒精擦拭，再使用灭菌扫描仪对鼠胸部进行消毒处理。

3. 开始进行手术：使用淬灭钳，穿刺胸骨左侧的第三根肋骨，插入心包中，直到感觉到心脏跳动。

4. 使用鼠标心脏解剖仪，在心脏上滑动，找到左前降支冠状动脉并用缝合针把它们包扎。

包扎的宽度应约为1毫米。

5. 撤回钳子，使心脏恢复跳动，观察心电图，以确认心肌缺血已有效制备。

6. 等待适当的时间进行操作，最好在10-30分钟内制备完毕心肌缺血。

7. 消毒手术部位，关闭氧气和二氧化碳混合气体，将动物放回代表室，进行观察。

8. 24小时后，给予动物一次肟酸钾（16mg/kg）注射治疗。

分析心肌缺血动物模型制备完成后，需要进行心脏和组织染色检查，以及电镜检查。

在实验中，可以使用细胞色素标记试剂盒来检测细胞色素C的排放情况，以评估心肌细胞受损程度。

另外，观察动物濒临死亡时的行为变化，可以对模型的制备成立发挥较为重要的作用。

使用心肌缺血动物模型，以生成动物模型来模拟心肌缺血的病理过程，进行心血管系统方面的研究，对制定相应治疗措施有重要意义。

雷米普利酸预处理对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用徐持华;郭涛【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2005(009)027【摘要】目的:观察雷米普利衍生物雷米普利酸预处理对大鼠缺血再灌注心肌的保护作用,并分析其作用途径与缓激肽的关系.rn方法:实验于2004-06/2005-01在南阳医学高等专科学校药理学教研室完成.成年Wistar大鼠60只随机分为4组,空白对照组;生理盐水模型对照组;雷米普利酸组(30 μg/kg);B1650+雷米普利酸组(125 μg/kg+30 μg/kg),各组均为15只.①制备心肌缺血再灌注模型:除空白对照组行冠状动脉左室支下穿线不结扎外,其余各组均结扎30 min后,再灌注60 min.模型对照组与雷米普利酸组均于结扎前10 min分别静脉输入等容量生理盐水和雷米普利酸持续10 min;B1650+雷米普利酸组结扎前20 min输入B1650,持续时间10 min,再输入雷米普利酸持续10 min.②心电监测:记录各组大鼠再灌注30 min内心律失常出现的时间、持续时间、室性心动过速和室颤的发生率、再灌注后15,60 min时ST段的变化.③心肌组织指标检测:观察各组再灌注后心肌一氧化氮合酶、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶活性、丙二醛和一氧化氮含量的变化.rn结果:60只大鼠均进入结果分析.①各组大鼠缺血再灌注心律失常变化:雷米普利酸组在心肌缺血再灌注60min后,其心律失常出现时间明显延长(P＜0.01),而持续时间、室性心动过速、室颤的发生率及再灌注15,60 min ST段的抬高程度均较B1650+雷米普利酸组与模型对照组显著降低(P＜0.01).②缺血再灌注大鼠心肌一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性的变化:空白对照组一氧化氮含量为(12.2±2.1)μmol/L,模型对照组及B1650+雷米普利酸组显著下降[(8.7±1.9),(8.9±1.3)μmol/L,P＜0.01],雷米普利酸组显著高于模型对照组与B1650+雷米普利酸组[(13.8±2.5)μmol/L,P＜0.01];模型对照组再灌后与空白对照组比较总一氧化氮合酶活性下降[(18.50±5.55),(27.17±4.67)nmol/(min·g),P＜0.01],雷米普利酸组显著高于模型对照组[(25.64±5.24)nmol/(min·g),P＜0.05].③缺血再灌注大鼠丙二醛含量和超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化:雷米普利酸组超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力均显著高于模型组(P＜0.01),雷米普利酸组丙二醛含量显著低于模型对照组(P＜0.01);而B1650+雷米普利酸组在预先静脉注射B1650后,再给予雷米普利酸,则雷米普利酸抗心肌缺血再灌注所致丙二醛升高的作用被减弱,具有显著性差异(P＜0.05).rn结论:一氧化氮产生不足是心肌再灌注损伤的主要因素,雷米普利酸通过调节缓激肽活性,维持正常一氧化氮水平对缺血再灌注心肌损伤大鼠可产生药理预适应保护作用,该作用由缓激肽所介导.【总页数】3页(P45-47)【作者】徐持华;郭涛【作者单位】南阳医学高等专科学校药理学教研室,河南省,南阳市,473003;郑州大学基础医学院药理学教研室,河南省,郑州市,450052【正文语种】中文【中图分类】R542.2【相关文献】1.肉桂酸预处理通过激活Akt信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 郝霁萍;高宇勤;贺少辉;赵国平2.葛根素预处理与缺血预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 高翔;李涛;高全;李保罗;陆德琴3.藏红花酸预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用及机制探讨 [J], 孙经武;王艳艳;房灿;樊维娜4.氙气预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞保护作用研究 [J], 朱婧;郭建丽5.三参丹饮预处理对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌的保护作用初探 [J], 韩淑丽;齐玲;姜文月;李鹏东;唐明哲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

180第11卷 第12期 2009 年 12 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 11 No. 12 Dec .，2009天麻是一种功效很多而效果显著的名贵中药，天麻素（化学名为对羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷，又称天麻苷）是天麻的有效单体。

近年来研究发现，天麻素具有镇静、抗惊厥、抗癫痫、镇痛，增加脑血流量，改善椎基底动脉、小脑前下动脉、迷路动脉及内耳供血不足，保护神经细胞，促进心肌细胞能量代谢的功能。

心肌缺血再灌注 I/R 损伤是导致心肌损害的常见原因,深入研究心肌 I/R 损伤的发病机制、不断寻找有效的治疗药物一直是国内外医药界的重要研究领域之一[5]。

本实验采用 Langendorff 灌流的大鼠心脏，探讨天麻素的抗心肌 I/R 损伤作用及可能的作用机制。

1　材料和方法1.1　药品及试剂天麻素购于中国药品生物制品检定所；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所；其它化学药品均为国产分析纯。

1.2　动物和实验分组健康wistar 大鼠雌雄各半 ,体重 180~260g ,由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供。

大鼠被随机分成4组 ,每组10只，分别给予以下药物: ①正常灌流组; ②模型组; ③天麻素高剂量组0.1mmol/L;④天麻素低剂量组0.025mmol/L。

1.3　实验操作腹腔注射肝素750U/kg 麻醉后、制备Langendorff心脏[7],恒温（37.5℃）恒压（60 cmH 2O ）灌流。

灌流液成分为：118mmol/L NaCl，4.7mmol/L KCl，2.5mmol/LCaCl 2，1.2mmol/L MgSO 4，1.2mmol/L KH 2PO，11mmol/L Glucose，25mmol/L NaHCO 3, PH 7.35~7.45,持续通入混合气体（95%O 2和5%CO 2）[7]。

丹红注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究齐惠丽;赵广荣;王典瑞;唐志书
【期刊名称】《现代中医药》
【年(卷),期】2007(27)4
【摘要】目的研究丹红注射液(DH)对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。

方法通过
建立大鼠心肌缺血再灌注模型,研究不同剂量丹红注射液对心肌缺血再灌注损伤的
保护作用。

结果DH对大鼠缺血再灌注心肌梗塞范围的缩小作用呈剂量依赖性;减
少缺血再灌注心肌细胞内肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的释放;降低心肌缺血再灌注诱发的ST-T段的抬高。

结论DH对大鼠心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用。

【总页数】3页(P65-67)
【关键词】丹红注射液;心肌缺血再灌注损伤;心肌梗塞
【作者】齐惠丽;赵广荣;王典瑞;唐志书
【作者单位】天津大学化工学院;吉林医药学院;陕西中医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R542.2
【相关文献】
1.丹红注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 郄素会;郝哲;刘增娟;武
月华
2.丹红注射液激活AMPK保护心肌缺血再灌注损伤模型大鼠的实验研究 [J], 田心;王渊博
3.丹红注射液对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其对白细胞介素-8的影响[J], 于洪艳;朱丹;丁宁
4.丹红注射液预处理对大鼠心肌缺血／再灌注损伤的保护作用 [J], 于洪艳;朱丹;孙兴华
5.干漆对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究 [J], 赵震;石月萍;唐莎莎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

大鼠活体心肌缺血再灌注损伤模型的建立与综合评估邓宇珺;杨敏;谭卫萍;苏健;符永恒;谭宁;曾红科;单志新;林秋雄;李晓红;董小莉;余细勇【摘要】AIM: To estahlish and evaluate a rat model of heart ischemia - reperfusion injury in vivo.METHODS : Seventy - two male Sprague - Dawley rats weighing( 250 ±50 )g were randomly divided into sham operation group( sham ), ischemia - reperfusion group( I/R ) and normal group.The animals were anesthetized and heparinized.Myocardial ischemia - reperfusion was induced by ligating the left anterior descending coronary artery with " U - shape tube" for 35 min followed hy 120 min or 240 min reperfusion in vivo.The heart infarct size was measured by triphenyltetrazolium chloride( TTC ) staining.The myocardial cell apoptotic index was determined by the method of terminal deoxynucleotidyl transferase - mediated dUTP - biotin nick - endlabeling( TUNEL ).Immunohistochemical method was used to detect the expression of Bcl - 2 and Bax in rat ischemia myocardium.The blood level of MB isoenzyme of creatine kinase ( CK - MB ), cardiac troponin Ⅰ( cT nI ), nitric oxide( NO ), malondialdehyde( MDA ), total superoxide dismutase( T SOD )and glutathione peroxidase( GSH - Px ) were detected after reperfusion for 2 h and 4 h.RESULTS : Compared with normal group and sham group, there were obvious changes of ST - T segment and Q wave in the electrocardiogram of I/R group.The blood level of CK - MB, cTnI, NO, MDA and GSH - Px in I/R group increased( P ＜0.05 ,P ＜0.01 ) after reperfusion for 2 h and 4 h, and the hlood level of T - SOD in I/R groupafter reperfusion for 2 h and 4 h also increased ( P ＜0.05 ).The heart infarct size in I/R group was the largest as compared to other groups.Among these groups, the apoptotic index of I/R group was the highest and the Bcl - 2/Bax ratio in I/R group decreased( P ＜ 0.01 ).CONCLUSION : The rat model of heart ischemia - reperfusion injury in vivo can be successfully established with the " U - shape tube" .There are obviously changes of heart infarct size. blood level of CK - MB, cTnI, NO, MDA, T - SOD and GSH - Px, myocardial apoptotic index and Bcl - 2/Bax ratio hetween I/R rats and control animals.%目的:构建并评估大鼠活体心肌缺血再灌注损伤(I/R)的实验动物模型. 方法:将清洁级成年SD雄性大鼠72只,随机分为正常组、假结扎组和I/R模型组, 手术的两组全麻下开胸暴露心脏,假结扎组只过线不结扎,模型组使用"U形金属管"进行冠状动脉左前降支结扎,持续心电图监测,并于再灌注2 h与4 h后进行血浆生化﹑心肌组织学的检测.结果:与正常组和假结扎组比较,I/R模型组心电图有明显ST-T改变和再灌注后病理性Q波,再灌注2 h和4 h时存在比较明显的ST-T改变;血标本检测示心肌型肌酸激酶同功酶(CK-MB)、心肌钙蛋白I(cTnI)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平显著升高(P＜0.05或P＜0.01),T-SOD水平在2 h和4 h也应激性升高(P＜0.05);心肌组织病理学检测显示模型组左心室心肌损伤疤痕明显,且2 h模型组左室心肌存在间隔性梗死区域,4 h模型组心肌组织区域性梗死和梗死面积明显增加;TUNEL法与Bcl-2﹑Bax蛋白实验显示2 h和4 h心肌细胞凋亡数量明显增加;Bcl-2/Bax蛋白表达阳性细胞比值下降显著(P＜0.01). 结论:成功建立大鼠活体心肌I/R模型,模型大鼠的心电图、血清学、心梗面积﹑心肌细胞凋亡和心肌组织病理学等发生显著改变.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)002【总页数】5页(P412-416)【关键词】大鼠;再灌注损伤;细胞凋亡【作者】邓宇珺;杨敏;谭卫萍;苏健;符永恒;谭宁;曾红科;单志新;林秋雄;李晓红;董小莉;余细勇【作者单位】广东省人民医院,广东省医学科学院急危重症医学部,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院图书馆,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院广东省心血管病研究所心内科,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院急危重症医学部,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院广东省心血管病研究所心内科,广东,广州,510080;广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】R542.2随着老龄化人口的增多，临床上由于心肌缺血引起的一系列心血管病越来越常见，且治疗效果欠佳。

乌司他丁对大鼠缺血再灌注心肌细胞的保护机制王媛媛;曹建;银邓莉;陈勤;欧阳先国【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2014(000)020【摘要】Objective To observe the protection mechanism of Ulinastain on heart ischemia/reperfusion injury in rats. Methods Experimental model was established by ligation of coronary artery with PTCA balloon, 30 Wistar rats were randomly divided into three groups: sham operation group (n=10); ischemia/reperfusion (I/R) group (n=10); I/R+Ulinas-tain group (n=10). The GSH and MDA of cardiac muscle tissues, and the serum biomarkers CK-MB in three groups were detected; ischemic and infarct areas in three groups were measured by TCC dyeing; the expression of IL-6 and IL-8 were analyzed by Western-blot analysis. Results Compared with sham operation group, the level of MDA which reflect the degree of oxidative damage inI/R group increased significantly [(4.13±3.27)nmol/L vs(11.13±2.13)nmol/L], and the CK-MB was increased [(15.21±6.24)U/L vs(2752.21±1276.36)U/L], the value of GSH was decreased signifi-cantly, the differences were statistically significant (P<0.01);compared with I/R group, MDA ofI/R+Ulinastain group [(8.25±4.26)nmol/L], CK-MB [(1873. 24±621.43)U/L] decreased, the differences were statistically significant (P<0.05). Infarction area of I/R+Ulinastain group [(12.27±4.26)%] was lowe r than that of I/R group [(17.12±3.18)%], the difference was statistically significant(P<0.05);the levels of IL-6 and IL-8 in sham operation group [(0.412±0.550),(0.132±0.071)] were lower, after ischemia reperfusion, the levels of IL-6and IL-8 in I/R gr oup [(1.785±0.720), (0.926±0.247)] was increased, the differences were statistically significant (P<0.01);compared with I/R group, the level of IL-6 and IL-8 in I/R+Ulinastain group [(1.102±0.780),(0.672±0.240)] was decreased, the differences were statist ically sig-nificant (P<0.05). Conclusion Ulinastain may protect myocardium from ischemia reperfusion injury by modulating the expression of IL-6 and IL-8 proteins and inhibiting inflammation.%目的：观察乌司他丁对心肌缺血再灌注后大鼠心肌细胞的保护机制。

一、实验背景心力衰竭（Heart Failure，简称HF）是一种复杂的临床综合征，表现为心脏结构和功能的异常，导致心脏泵血功能减退，无法满足全身组织器官的代谢需求。

心力衰竭是全球范围内常见的心血管疾病，严重影响患者的生存质量和寿命。

本研究旨在通过实验分析，探讨心力衰竭的发生机制、诊断方法和治疗策略。

二、实验目的1. 了解心力衰竭的病理生理机制。

2. 掌握心力衰竭的诊断方法和评估指标。

3. 分析心力衰竭的治疗策略和药物作用。

三、实验方法1. 动物实验（1）实验动物：选择健康成年雄性大鼠，体重200-250g。

（2）分组：将实验动物随机分为正常组、模型组和治疗组，每组10只。

（3）建模：采用心肌缺血再灌注损伤法建立心力衰竭模型。

（4）干预：治疗组给予心力衰竭治疗药物，正常组和模型组给予等体积的生理盐水。

（5）指标检测：分别于实验前、实验后1周、2周和4周，检测各组大鼠的心功能、心肌酶谱、血清心肌标志物和心脏病理学指标。

2. 细胞实验（1）细胞来源：取大鼠心肌细胞进行培养。

（2）分组：将心肌细胞分为正常组、模型组和治疗组。

（3）干预：治疗组给予心力衰竭治疗药物，正常组和模型组给予等体积的生理盐水。

（4）指标检测：分别于实验前、实验后24小时、48小时和72小时，检测各组心肌细胞的存活率、细胞凋亡率和心肌损伤相关蛋白的表达水平。

四、实验结果1. 动物实验结果（1）心功能：与正常组相比，模型组大鼠的心功能明显下降，表现为左心室射血分数（LVEF）降低、左心室舒张末期内径（LVESD）增大。

（2）心肌酶谱：与正常组相比，模型组大鼠的心肌酶谱明显升高，如肌酸激酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）和谷草转氨酶（AST）等。

（3）血清心肌标志物：与正常组相比，模型组大鼠的血清心肌标志物明显升高，如肌钙蛋白I（cTnI）和心肌肌酸激酶同工酶（CK-MB）等。

（4）心脏病理学：与正常组相比，模型组大鼠的心脏出现心肌细胞水肿、纤维化、炎症细胞浸润等病理改变。

度洛西汀对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响及机制蔡茜茜;徐旭仲【摘要】目的探讨度洛西汀对大鼠心脏缺血再灌注心律失常的影响及机制.方法30只Sprague Dawley (SD)大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR 组)和度洛西汀组(Dulo组).IR组大鼠左前降支结扎30min后再灌注120min,Dulo 组大鼠结扎左前降支30min前腹腔注射盐酸度洛西汀40mg/kg,之后处理同IR 组,Sham组仅暴露左前降支,未行结扎.二导联心电监测并记录3组心律失常发生情况,应用LabChart8软件分析心电图参数.Triphenyhetrazolium chloride(TTC)染色对比IR组及Dulo组大鼠心肌梗死面积.蛋白免疫印迹试验检测各组心脏组织Akt、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,Erk)、caspase-3、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)1、SOD2和连接蛋白43(connexin 43,Cx 43)蛋白改变.结果与IR组比较,缺血期Dulo组大鼠室性期前收缩次数和室性心动过速次数减少(P＜0.05);再灌注期Dulo组的室性心动过速减少(P＜0.05),室性期前收缩次数差异无统计学意义(P＞0.05).度洛西汀抑制缺血和再灌注所致校正后Q-T间期(QTc)的延长(P＜0.05),并减小心肌梗死面积(P＜0.05).度洛西汀抑制Akt和Erk蛋白的磷酸化,减少cleaved caspase-3、cy-tochrome C蛋白表达并增加SOD1、SOD2和Cx43蛋白表达.结论度洛西汀降低Akt和Erk蛋白磷酸化,抑制氧化应激及细胞凋亡,减低心脏缺血再灌注损伤过程中室性心律失常发生,减少梗死面积.%Objective To explore the protective effects of duloxetine on ventricular arrhythmia in rats with ischemia reperfusion injury.Methods Thirty Sprague Dawley (SD) rats were randomly divided into 3 groups:Sham group,ischemia reperfusion group (IRgroup),duloxetine-treated group (Dulo group).The rats in IR group weresubjected to 30min-ischemia of left anterior descending artery ligation followed by 120min of reperfusion,while intraperitoneal injection of duloxetine 40mg/kg were give prior ischemia in Dulo group,and the remaining experiment protocols were same as IR group.The left anterior descending artery of rats in sham group was exposed without being clamped.Two biopotential leads ECG monitor was used to record the arrhythmia in each group,and ECG parameters were analyzed by LabChart 8 software.Triphenyltetrazolium chloride (TTC) was used for determination of infarct area.The protein expressions of Akt,extracellular regulated protein kinases (Erk),caspase-3,superoxide dismutase (SOD) 1,SOD2 and Connexin 43 (Cx 43) were measured by western blot analysis.Results As compared to IR group,the incidences of both ventricular extrasystoles and tachycardia were decreased during ischemic period (P ＜0.05),and the incidence of ventricular tachycardia was decreased with no significant changes in ventricular extrasystoles during reperfusion period in Dulo group (P ＜ 0.05).Duloxetine decreased the prolonged QTc and infraeted area during IR injury (P ＜ 0.05).Duloxetine inhibited the phosphorylation of Akt and Erk,and downregulated the protein expressions of cleaved caspase-3,cytochrome C,while upregulated SOD1,SOD2 and Cx 43 protein expression during I/R injury (P ＜ 0.05).Conclusion Duloxetine decreases the phosphorylation of Akt and Erk,inhibits oxidative stress and apoptosis,exerts anti-arrhythmogenic effects and decreases the occurrence of ventricular arrhythmia and infracted area induced by myocardial IR.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2018(047)004【总页数】5页(P19-23)【关键词】度洛西汀;缺血再灌注损伤;室性心律失常;氧化应激【作者】蔡茜茜;徐旭仲【作者单位】325000 温州医科大学附属第一医院;325000 温州医科大学附属第一医院【正文语种】中文【中图分类】R5心血管疾病发生率和病死率占各类疾病之首，其中冠状动脉功能异常导致致命性室性心律失常占死因的1/4[1]。

麝香通心滴丸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制李蒙1,刘用2,张健真2,郝学增1,张立晶1摘要目的:观察麝香通心滴丸预处理对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤后心肌细胞和血管的保护作用及潜在机制㊂方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)㊁I/R组㊁麝香通心滴丸组(SXTX组)和阳性组,每组15只㊂SXTX组以18.90mg/(kg㊃d)的浓度灌胃;阳性组以尼可地尔1.35mg/(kg㊃d)的浓度灌胃;Sham组和I/R组给予等体积去离子水灌胃㊂各组均灌胃1周后,行冠状动脉前降支结扎-松解手术,除Sham组外其余各组大鼠结扎左冠状动脉前降支30min后,再灌注120min,构建心肌I/R模型㊂通过心肌苏木精-伊红(HE)染色㊁心肌Masson染色观察大鼠心肌组织及血管改变;电镜观察心肌细胞和血管的超微结构改变;免疫组织化学法观察血管相关蛋白低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)表达情况㊂结果:与Sham组比较,I/R组大鼠心肌细胞坏死和血管损伤明显,心肌组织中HIF-1α表达增加;与I/R组相比,SXTX组心肌细胞和血管病理结构损伤减轻,缺血区心肌组织VEGF含量明显增加㊂结论:麝香通心滴丸预处理可保护大鼠心肌细胞和血管I/R损伤,可能与上调VEGF蛋白表达㊁促进缺血区微血管新生有关㊂关键词缺血/再灌注损伤;麝香通心滴丸;保护作用;低氧诱导因子-1α;血管内皮生长因子;实验研究d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2024.02.008Protective Effect of Shexiang Tongxin Dropping Pill Pretreatment on Myocardial Ischemia-reperfusion Injury in RatsLI Meng,LIU Yong,ZHANG Jianzhen,HAO Xuezeng,ZHANG LijingDongzhimen Hospital,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing100700,ChinaCorresponding Author ZHANG Lijing,E-mail:****************Abstract Objective:To observe the protective effect of Shexiang Tongxin Dropping Pills on myocardial cells and blood vessels after myocardial ischemia-reperfusion(I/R)injury in rats.Methods:Sixty male SD rats were randomly divided into sham operation group (Sham group),I/R group,Shexiang Tongxin Dropping Pills group(SXTX group),and positive control group,with15rats in each group.The rats in SXTX group were given SXTX18.90mg/(kg㊃d)by gavage,and the rats in positive control group were given nicorandil1.35 mg/(kg㊃d)by gavage.The rat in Sham group and I/R group were given the same volume of deionized water by gavage.After one week of gavage,the rats left anterior descending coronary artery was ligated for30min and then reperfused for120min to build the myocardial I/R model except for the Sham group.The changes of myocardial tissue and blood vessels in rats were observed by myocardial hematoxylin-eosin(HE)staining and myocardial Masson staining.The ultrastructural changes of cardiomyocytes and blood vessels were observed by electron microscope.The expressions of hypoxia-inducible factor-1α(HIF-1α)and vascular endothelial growth factor (VEGF)were observed by immunohistochemistry.Results:Compared with Sham group,the myocardial cell necrosis and vascular injury of the rats in I/R group were obvious,and the expression of HIF-1αin the myocardial tissue pared with I/R group,the myocardial cell and vascular pathological structural damage in SXTX group alleviated,and the protein expressions of VEGF in the ischemic area significantly increased.Conclusion:Shexiang Tongxin Dropping Pills pretreatment can protect myocardial cells and vascular I/R injury in rats,which may be related to the up-regulation expression of VEGF protein and the promotion of microangiogenesis in ischemic areas.Keywords ischemia/reperfusion injury;Shexiang Tongxin Dropping Pills;protective effect;hypoxia-inducible factor-1α;vascular endothelial growth factor;experimental study急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是心血管疾病的最危重类型之一,其发病急㊁预后差㊁病死率高,是急性心源性致死性疾病的主因㊂无论是药物溶栓㊁冠状动脉支架植入,还是冠状动脉旁路移植术,再灌注治疗都是其必然过程[1]㊂然而,心肌再灌注基金项目2021年度北京中医药大学新教师启动基金项目(No.2021-JYB-XJSJJ057);中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(No. 2020-YJB-ZDGG-116)作者单位 1.北京中医药大学东直门医院(北京100700);2.北京中医药大学通讯作者张立晶,E-mail:****************引用信息李蒙,刘用,张健真,等.麝香通心滴丸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用机制[J].中西医结合心脑血管病杂志,2024, 22(2):250-253.过程本身可诱导心肌细胞损伤㊁坏死进一步加重,这一过程即为缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤[2]㊂因此,预防和治疗再灌注损伤尤为关键㊂麝香通心滴丸由‘太平惠民和剂局方“中至宝丹衍生而来,具有芳香益气通脉㊁活血化瘀止痛的功效㊂前期研究发现麝香通心滴丸对经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后慢血流病人的有效性及安全性较好[3]㊂关于麝香通心滴丸对I/R后心肌细胞和血管的保护作用及作用机制尚未明确㊂本研究通过构建I/R损伤大鼠模型,观察麝香通心滴丸预处理对大鼠心肌I/R损伤后心肌细胞和血管的保护作用,以及对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)㊁血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,进而探讨其保护I/R的潜在作用机制,为麝香通心滴丸防治I/R的临床应用提供实验依据㊂1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物无特定病原体(SPF)级雄性SD大鼠60只,9~ 10周龄,体质量(250ʃ10)g,购自北京华阜康生物科技股份有限公司㊂实验操作通过北京中医药大学东直门医院动物伦理的要求,伦理号(No):21-49㊂1.1.2实验药物麝香通心滴丸,规格:35mg,批准文号:国药准字Z20080018,由内蒙古康恩贝药业有限公司提供,以去离子水配成[18.90mg/(kg㊃d)]溶液,超声溶解,高压灭菌后于-20ħ贮存备用㊂尼可地尔片,规格:每片5 mg,批准文号:国药准字H20160540,由Nipro Pharma Corporation Kagamiishi Plant生产,使用去离子水配制成1.35mg/(kg㊃d)的混悬液保存备用㊂1.1.3实验试剂及仪器实验试剂:苏木素染液(武汉市皮诺飞生物科技有限公司生产),HIF-1α抗体(28b)(Santa,sc-13515-200μg/mL),VEGF Rabbit Polyclonal Antibody(proteintech, 19003-1-AP-150μL),过氧化氢溶液(国药集团化学试剂有限公司生产,10011218),牛血清白蛋白(BSA) (Solarbio,A8020),包埋液(环氧树脂Epon812),二抗[辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗兔/鼠通用二抗] (DAKO,K5007),组化试剂盒二氨基联苯胺(DAB)显色剂(DAKO,K5007)㊂实验仪器:超薄切片机(徕卡ULTRACUT R),光学显微镜(CIC,XSP-C204),透射电镜(日本日立H-7650),正置光学显微镜(日本尼康),成像系统(日本尼康)㊂1.2实验方法1.2.1动物造模对SD大鼠进行冠状动脉前降支结扎松解手术构建心肌I/R模型㊂将SD大鼠以4%戊巴比妥钠(0.4mL/100g)腹腔麻醉注射,之后气管插管,接动物呼吸机和心电图机,于左侧第三肋与第四肋间切开皮肤,钝性分离肌层,打开胸腔,充分暴露心脏,用带线缝合针在左心耳与肺动脉圆锥之间,于左心耳根部下方约2mm处进针,将左前降支连同少量的心肌组织一起结扎,先缺血30min㊁再灌注120min制备大鼠心肌I/R模型㊂抬高的ST段下降1/2以上为大鼠心肌I/R 模型造模成功㊂1.2.2分组及给药适应性喂养1周,采用随机数字表法将60只SD 大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)㊁I/R组㊁麝香通心滴丸组(SXTX组)和阳性组,每组15只㊂所有用药剂量按照人与大鼠体表面积换算,SXTX组按成人用量的2倍,给予麝香通心滴丸18.90mg/(kg㊃d)灌胃,阳性组以尼可地尔1.35mg/(kg㊃d)灌胃,Sham 组和I/R组给予等体积去离子水灌胃㊂每日1次,连续灌胃1周,末次灌胃1h后构建大鼠I/R模型㊂1.3观察指标1.3.1心肌苏木精-伊红(HE)染色实验结束后取出心脏,立即将10%多聚甲醛溶液50mL注入离体心脏主动脉内,5min后将左心室前壁心肌组织中间层切成条状,放在上述固定液中固定48h 后,蒸馏水清洗㊁梯度乙醇脱水,后制作病理切片,切片厚度为4μm,脱蜡㊁复水后行HE染色,封固,光镜下观察大鼠心肌组织及血管改变㊂1.3.2心肌Masson染色取出甲醛中固定24h后的心肌组织,按乙醇浓度由低至高脱水,石蜡包埋,切片,脱蜡后蒸馏水水洗㊂Weiger氏铁苏木素染色5~10min后流水充分水洗,再用1%的盐酸乙醇分化,再用丽春红酸性品红染液染色5~10min后用蒸馏水水洗,加1%磷钼酸水溶液5min,后苯胺蓝液复染5min,随后1%冰醋酸即刻洗涤后用95%乙醇多次脱水,后置于二甲苯透明,中性树胶封片,光镜下观察心脏组织纤维化情况㊂1.3.3电镜观察心肌血管内皮细胞超微结构留取再灌注末左心室梗死周边缺血区心肌体积约1mm3的标本,放置于4%戊二醛内固定,0.1mol/L二甲膦酸钠缓冲液漂洗,1%四氧化锇固定,然后梯度丙酮脱水,使用环氧树脂进行包埋㊁聚合,制作超薄切片,最后用醋酸双氧铀㊁柠檬酸铅染色,在透射电镜下观察并拍照㊂1.3.4免疫组织化学法检测血管相关蛋白HIF-1α㊁VEGF的表达情况取10%甲醛固定梗死周边缺血区心肌组织,并进行常规石蜡包埋及心肌切片(5μm),石蜡切片脱蜡至水,抗原修复,阻断内源性过氧化物酶,3%牛血清白蛋白室温封闭30min,加一抗(HIF-1α1ʒ50稀释,VEGF 1ʒ200稀释),4ħ孵育过夜,加HRP标记山羊抗兔二抗孵育30min,DAB显色,复染细胞核,脱水封片,光镜下分别观察HIF-1α㊁VEGF蛋白的表达情况㊂1.4统计学处理采用SPSS20.0统计软件进行数据分析㊂正态分布的定量资料以均数ʃ标准差(xʃs)表示,组间比较采用单因素方差分析,方差齐性采用Student-Newman-Keuls检验,方差不齐用Tamhane's T2检验㊂以P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1HE染色结果Sham组心肌组织结构正常㊁完整,心肌细胞分布均匀㊁有序,轮廓清晰可见,胞核与胞质边缘分明,血管管腔完整㊂I/R组心肌组织染色着色较浅,有细胞轮廓不清及破碎现象,组织排列异常紊乱㊁呈无序状,并伴有炎性细胞浸润,坏死区充血出血㊂阳性组心肌细胞部分相互连接,排列整齐,心肌细胞形态正常,心肌纤维中少量心肌纤维变性坏死及脂肪变性,伴少量炎性细胞浸润㊂与I/R组比较,SXTX组心肌组织排列较为整齐,着色相对更均匀,有炎性细胞浸润,血管管腔完整度较好㊂详见图1㊂图1各组大鼠心肌组织病理变化比较(HE染色,ˑ400)2.2Masson染色结果Sham组Masson染色心肌纤维无纤维化,仅在血管壁周边有着色㊂I/R组显示紫红色的心肌组织明显减少,存在大量呈蓝色的胶原纤维,血管破碎,部分血管呈管腔狭窄和闭合㊂与I/R组相比,阳性组㊁SXTX 组Masson染色显示以紫红色心肌组织为主,蓝色胶原纤维增生沉积现象显著减轻㊂详见图2㊂图2各组大鼠心肌组织病理变化比较(Masson染色,ˑ400)2.3透射电镜观察心肌血管内皮细胞超微结构Sham组微血管基底膜未见增厚,内弹性膜未见变窄,管腔规整,内皮细胞排列整齐,内皮细胞胞质和核仁结构清楚,周围心肌细胞形态完整,未见脂质沉积;I/R组内膜下结缔组织肿胀,内弹性膜局部变窄,管腔严重变形,内皮细胞胞质肿胀,可见胞质碎片,核膜部分缺失,周围心肌细胞出现明显损伤,细胞破碎严重,大量的脂质沉积;与I/R组相比,SXTX组微血管基底膜轻度增厚,内弹性膜局部变窄,管腔稍有变形,内皮细胞排列较整齐,可见内皮细胞质和核仁结构,周围心肌细胞形态基本完整,少量脂质沉积㊂详见图3㊂2.4免疫组织化学法检测心肌中HIF-1α㊁VEGF的蛋白表达与Sham组比较,I/R组心肌组织中HIF-1α表达增加,提示在缺血㊁缺氧状态下HIF-1α蛋白反应性增加㊂与I/R组比较,SXTX组心肌组织HIF-1α表达下降,VEGF蛋白表达增加,提示麝香通心滴丸可促进VEGF蛋白的生成,进而促进缺血区血管形成,改善心肌组织乏氧环境㊂详见图4㊁图5㊂图3各组大鼠心肌细胞及血管超微结构变化比较图4麝香通心滴丸对HIF-1α蛋白表达的影响(ˑ100)图5麝香通心滴丸对VEGF蛋白表达的影响(ˑ100)3讨论时间就是心肌 ,由于心肌组织细胞对缺氧㊁缺血的敏感性高,尤其是其具有不可再生的特性,因此,在AMI的救治过程中,及时再灌注治疗是挽救濒死心肌细胞的关键㊂然而缺血再灌注治疗必然会造成再灌注损伤,是AMI不可避免的风险事件㊂保护心肌I/R损伤可防止心肌梗死后不良重塑和更差的临床结果㊂研究发现持续的心肌I/R可诱导各种形式的心肌细胞死亡和冠状动脉微血管损伤[4]㊂麝香通心滴丸由人工麝香㊁蟾酥㊁人工牛黄㊁冰片㊁人参茎叶㊁丹参㊁熊胆粉组成,具有芳香益气通脉㊁活血化瘀止痛之功效㊂多项研究表明麝香通心滴丸可减轻心肌缺血损伤,可能通过升高内源性一氧化氮水平,抑制炎症反应,改善冠状动脉微循环等[5-7]㊂本研究亦发现麝香通心滴丸可保护心肌I/R引起的心肌细胞和血管损伤㊂王伟等[8]对麝香通心滴丸组方入血成分进行网络药理学研究,发现VEGF/血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路可能为麝香通心滴丸治疗冠心病的信号通路㊂本研究结果同样发现麝香通心滴丸可促进缺血区心肌组织VEGF蛋白的生成,并提示可能与HIF-1α介导的信号通路有关㊂HIF-1α是一种关键的氧敏感转录因子,心肌组织细胞缺血缺氧时,诱导HIF-1α表达增加,进而调控多种基因表达,发挥机体对低氧或缺血的保护性适应[9]㊂VEGF与血管生成密切相关㊂在心肌I/R损伤中,增加血管生成可有效改善病灶缺氧状态,从而保护心脏[10]㊂本研究发现心肌I/R损伤时HIF-1α的表达增加以适应乏氧环境,麝香通心滴丸可能通过促进VEGF蛋白的生成,促进缺血心肌血管新生,改善乏氧环境,参与大鼠心肌I/R心肌保护的过程㊂综上所述,麝香通心滴丸可有效保护大鼠心肌I/R 的细胞和血管损伤,减轻心肌组织病理损伤,其作用机制可能与上调心肌组织VEGF蛋白的表达及促进缺血区微血管新生有关,从而达到保护心脏㊁抗心肌I/R损伤的作用㊂参考文献:[1]ZHU S S,XU T D,LUO Y Y,et al.Luteolin enhances sarcoplasmicreticulum Ca2+-ATPase activity through p38MAPK signalingthus improving rat cardiac function after ischemia/reperfusion[J].Cellular Physiology and Biochemistry,2017,41(3):999-1010.[2]LAHNWONG S,PALEE S,APAIJAI N,et al.Acute dapagliflozinadministration exerts cardioprotective effects in rats with cardiacischemia/reperfusion injury[J].Cardiovascular Diabetology,2020,19(1):91.[3]韩松洁,张晓雨,张立晶,等.麝香通心滴丸对PCI术后患者慢血流的临床证据评价[J].世界科学技术-中医药现代化,2018,20(10):1772-1777.[4]HEUSCH G.Myocardial ischaemia-reperfusion injury and cardioprotectionin perspective[J].Nature Reviews Cardiology,2020,17(12):773-789.[5]张艳达,施珊岚,厉娜,等.麝香通心滴丸改善心肌梗死小鼠微循环障碍的作用机制[J].中西医结合心脑血管病杂志,2017,15(23):2969-2972.[6]LIU H H,ZHAO J J,PAN S L,et al.Shexiang Tongxin Dropping Pill(麝香通心滴丸)protects against sodium laurate-inducedcoronary microcirculatory dysfunction in rats[J].J Tradit ChinMed,2021,41(1):89-97.[7]王华伟,金丹丹,潘海华.麝香通心滴丸通过p-Akt/p-GSK3β/GSK3β通路对心肌梗死小鼠的心肌保护作用研究[J].中国中医药科技,2020,27(3):352-355.[8]王伟,刘星雨,尚云龙,等.基于血清药物化学与网络药理学探究麝香通心滴丸治疗冠心病的机制[J].中成药,2020,42(10):2768-2777.[9]ZHENG J,CHEN P E,ZHONG J F,et al.HIF-1αin myocardialischemia-reperfusion injury(review)[J].Molecular MedicineReports,2021,23(5):352.[10]LI J,ZHOU W J,CHEN W,et al.Mechanism of the hypoxiainducible factor1/hypoxic response element pathway in ratmyocardial ischemia/diazoxide post conditioning[J].MolecularMedicine Reports,2020,21(3):1527-1536.(收稿日期:2022-03-31)(本文编辑王丽)。

缬沙坦减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的研究朱银川;康丹丹;汤建民;王琼【摘要】目的:探讨缬沙坦对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护的可能机制.方法:将30只大鼠分为假手术组,缺血再灌注组,缬沙坦预处理组,每组10只.缬沙坦预处理组给予缬沙坦(30mg/kg),1次/天,灌胃治疗4周,其余二组给予等体积的生理盐水.建立心肌缺血再灌注损伤模型成功后,取血样检测血清超氧化物歧化物(SOD)活性和丙二醛含量;取相应的左心室区域,应用蛋白印迹法、逆转录聚合酶链反应法测定各组心肌组织中一氧化氮合酶(iNOS)、解偶联蛋白2信使核糖核酸(UCP2 mRNA)和蛋白的表达.结果:SOD活性:缺血再灌注组、缬沙坦预处理组比假手术组均减少(P＜0.01),缬沙坦预处理组高于缺血再灌注组(P＜0.01).丙二醛含量:缺血再灌注组、缬沙坦预处理组比假手术组均升高(P＜0.01),缬沙坦预处理组低于缺血再灌注组(P＜0.01).iNOS和UCP2 mRNA的相对表达量:缺血再灌注组、缬沙坦预处理组比假手术组均升高(P＜0.01),缬沙坦预处理组高于缺血再灌注组(P＜0.01).iNOS和UCP2蛋白的表达量:缺血再灌注组、缬沙坦预处理组比假手术组均升高(P＜0.01),缬沙坦预处理组高于缺血再灌注组(P＜0.01).结论:缬沙坦可通过提高iNOS、UCP2的表达,减少和清除氧自由基起到保护心肌缺血再灌注损伤的作用.【期刊名称】《中国循环杂志》【年(卷),期】2014(029)005【总页数】4页(P382-385)【关键词】心肌缺血再灌注损伤;诱导型一氧化氮合酶;解偶联蛋白2;缬沙坦【作者】朱银川;康丹丹;汤建民;王琼【作者单位】450014河南省郑州市,郑州大学第二附属医院心血管内科;450014河南省郑州市,郑州大学第二附属医院心血管内科;450014河南省郑州市,郑州大学第二附属医院心血管内科;450014河南省郑州市,郑州大学第二附属医院干部病房【正文语种】中文【中图分类】R542.2目的：探讨缬沙坦对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护的可能机制。

模型的背景，心肌缺血模型分全心缺血和左心室缺血两种，全心缺血主要靠注射药物（如异丙肾上腺素等），左心室缺血主要靠手术对动物的冠状动脉左降支进行紧扎实现。

由于左心室缺血对临床的意义更大，所以研究心肌缺血药物时这个模型是必须的。

（1）术前12小时给动物禁食（2）将动物注射10%水合氯醛（0.4mL/100g）麻醉后固定在手术台上（3）用笔型静脉置留针进行气管插管，插好后可用手术刀柄靠近气管，如果见气雾，就证明成功，连接动物呼吸机，参数为：呼吸频率85；呼吸比1：1；潮气量为18ml（4）胸部被毛、酒精棉消毒，在胸部左侧3~4肋间剪开皮肤，如图1（5）分离肌肉露出肋骨，切口位置有两块肌肉，胸浅肌和胸深肌，注意按照肌肉的纹路分离可以避免将肌肉扯烂，如图2（6）在第三根肋骨下用止血钳将肌肉分离开，然后左手用止血钳挑住肋骨，右手持剪刀剪开第三根肋骨，如图3（7）用止血钳将剪断的肋骨夹住掰开，放入开睑器，用止血钳剥离心包膜，如图4（8）用止血钳将胸腺（心脏上面白的像脂肪一样的东西）夹住拉出，如图5（9）在左心耳与肺动脉圆锥间穿6~0号线，拉紧丝线，形成心肌缺血，观察线扎紧的部位上下大约2mm范围的心肌是发白色的，如图6（10）闭合胸腔，注意将胸腔内的空气挤出（这点非常关键，这个模型最容易失败导致大鼠死亡的就是这个地方），对肌肉和皮进行缝合，挤空气的手法如图7（11）结扎术后6小时可进行TTC染色：将大鼠脱颈处死，打开胸腔，将心脏剪下，用生理盐水将心脏清洗干净并排出心脏内的淤血，沿冠状沟将心房切除留下心室，用刀片将心脏切成1mm厚的切片，放入0.1%的TTC磷酸盐缓冲液（pH 7.4）37℃水浴7~10分钟，取出切片用生理盐水冲洗数次，观察结果。

非梗死区因脱氢酶还原TTC而呈红色，梗死区因脱氢酶流失而呈白色，将梗死区和非梗死区分离并分别称重，梗死范围以梗死心肌占缺血心肌重量的百分比表示。

下图是染色的结果，图8结扎位置，梗死的地方其实肉眼大致能看出，和其他地方相比发白，图9：下面再发正常大鼠和梗死大鼠的心电图区别，是用的PowerLab做的，正常的如下22小时后的心电。