不同剂量白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预比较
- 格式：pdf
- 大小：296.72 KB
- 文档页数：3
临床肺科杂志２０１２年１月 第１７卷第１期 ３
・论 著・
不同剂量白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预比较
何平平 王在岩 张平 李婉霜 肖新洲
【摘要】 目的比较不同剂量的白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用。方法９Ｏ只ｓＤ大鼠随机分成正常对
照组、模型组、Ｒｅｓ低剂量干预组、Ｒｅｓ中剂量干预组、Ｒｅｓ高剂量干预组、ＤＸＭ干预组。博莱霉素（５ ｍｇ／ｋｇ）气管内灌注建立大 鼠肺纤维化模型。各组均采用ＨＥ染色、Ｍａｓｓｏｎ染色、ＨＹＰ含量测定。观察不同剂量的白藜芦醇对大鼠肺纤维化的干预作用。 结果Ｒｅｓ中、高剂量干预组及ＤＸＭ干预组大鼠一般情况均较模型组好。ＨＥ染色、Ｍａｓｓｏｎ染色显示Ｒｅｓ低剂量干预组大鼠肺
组织肺泡炎和肺纤维化程度较模型组没有显著差异（Ｐ均＞０．０５）。Ｒｅｓ中、高剂量干预组及ＤＸＭ干预组病理组织染色可见肺 泡炎和肺纤维化程度在各时间点均明显轻于模型组（Ｐ＜０．０５）。ＨＹＰ含量测定中Ｒｅｓ低剂量干预组与模型组无显著性差异（Ｐ ＞０．０５），而Ｒｅｓ中、高剂量干预组及ＤＸＭ干预组各时间点ＨＹＰ含量均低于模型组（Ｐ＜０．０５）。结论不同剂量的白藜芦醇对 博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用不尽相同。中、高剂量白藜芦醇的干预作用基本同地塞米松的干预作用。 【关键词】 白藜芦醇；博莱霉素；肺纤维化；地塞米松
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅｓ ｏｆ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｏｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｂｌｅｏ－
ｍｙｃｉｎ ＨＥ Ｐｉｎｇ－ｐｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｚａｉ—ｙａｎ，ＺＨＡＮＧ ， 耽ｎ—ｓｈｕａｎｇ，ＸＩＡＯ Ｘｉｎ－ｚｈｏｕ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＮｕｒｓｉｎｇ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆＲｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ， ｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＳｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ，Ｈｅｎｇｙａｎｇ，Ｈｕｎａｎ ４２１００１，Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅｓ ｏｆ ｒｅｓｖｅｒａｔｍｌ ｏｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｂｌｅｏ— ｍｙｃｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ９０ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｌｏｗ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ，ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｍｉｄｄｌｅ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ，ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ，ａｎｄ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ＤＸＭ．Ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｗｉｔｈ ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ，Ｍａｓｓｏｎ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ Ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｅｌｉｎｅ（ＨＹＰ）ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｗｅｒｅ ｍａｄｅ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒ－ ｖｅｎｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅｓ ｏｆ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｏｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｇｅｎｅｒａｌ ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｓｅ ｏｆ ｒａｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｌｏｗ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｂａｓｉｃａｌｌｙ．Ｇｅｎｅｒａｌ ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｃｅｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ
ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｍｉｄｄｌｅ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ，ｈｉｇｈ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ ａｎｄ ＤＸＭ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ．ＨＥ ｓｔａｉｎｉｎｇ ａｎｄ Ｍａｓｓｏｎ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ａｌｖｅｏｌｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｌｏｗ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ ｈａｄ ｎｏ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５），ｂｕｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｌｕｎｇ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ａｎｄ ａｌｖｅｏｌｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｍｉｄｄｌｅ－ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ。ｈｉｇｈ－ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ ａｎｄ ＤＸＭ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．ＨＹＰ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＨＹＰ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｌｏｗ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ ｈａｄ ｎｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞Ｏ．０５），ｗｈｉｌｅ ＨＹＰ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｍｉｄｄｌｅ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ，ｈｉｇｈ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ ａｎｄ ＤＸＭ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｔ ｅｖ－ ｃｒｙ ｔｉｍｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓａｇｅｓ ｏｆ ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ ｏｎ ｒａｔｓ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｂｌｅｏｍｙ— ｃｉｎ ａｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｍｉｄｄｌｅ—ｄｏｓａｇｅ ｏｒ ｈｉｇｈ—ｄｏｓａｇｅ Ｒｅｓ ａｒｅ ｔｈｅ ｓａｍｅ ａｓ ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ＤＸＭ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ；ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ；ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｆｉｂｒｏｓｉｓ；ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ
肺纤维化是一种起病隐匿、进展迅速、病死率高且治疗效
果欠佳的慢性肺部疾患…，发病率呈逐年上升趋势。糖皮质
激素仍是目前治疗肺纤维化的主要药物，但长期应用激素副
作用大，而且并不能降低肺纤维化患者的死亡率 Ｊ。因此，
寻找有效治疗药物成为国内外学者研究的新方向。白藜芦醇
（ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ，Ｒｅｓ），属于非黄酮类多酚化合物，有研究表明它
具有抗氧化、抗菌消炎、生长抑制活性、抗血小板聚集、诱导细 胞凋亡、抗肿瘤及雌激素调节等生物药理活性 Ｊ。近年来，
白藜芦醇在纤维增生性疾病中的作用受到人们关注。本实验 主要比较不同剂量的白藜芦醇与地塞米松对大鼠肺纤维化的
基金项目：１．湖南省自然科学基金项目（０８ＪＪ５００３）；２．湖南省财政厅／
教育厅重点项目（１０Ａ１０７）；３．湖南省教育厅基金项目（编 号１０ＣＩ １６０）；４．衡阳市科技发展基金项目（编号２０１０ｋｓ３３）
作者单位：４２１００１湖南衡阳，南华大学护理学院，南华大学附一医 院呼吸内科 通讯作者：张平，Ｅ—ｍａｉｌ：ＺＰ９７０７＠ｓｏｈｕ．ｅｏｍ 干预作用，印证白藜芦醇的用药效果，并为肺纤维化的动物实 验和临床研究提供一定的理论依据。
材料与方法
一、主要材料健康雌性ｓＤ大鼠９０只（南华大学动物
部提供，许可证号ＳＣＸＫ（湘２０１０－０００４）），体重２００±２０ ｇ，３
—４月龄，分笼饲养于南华大学实验动物部ＳＰＦ级环境中。 博来霉素Ａ （ＢＬＭＡ ，每支８ ｍｇ，批号０９０７０１）购白天津太河
制药有限公司；中药单体白藜芦醇（Ｒｅｓ，１００ ｇ／袋），购自西
安天一生物技术有限公司；地塞米松磷酸钠注射液（ＤＸＭ，５ ｍｒ，／支，批号０９１２１１）购自上海通用药业股份有限公司；羟脯
氨酸（ＨＹＰ）检测试剂盒购自南京建成生物技术有限公司。
二、实验方法 实验大鼠随机分成正常对照组、模型组、Ｒｅｓ低剂量干预
组、Ｒｅｓ中剂量干预组、Ｒｅｓ高剂量干预组、ＤＸＭ干预组。按
经典方法造模 。用１０％水合氯醛０．３ ｍｌ／ｌＯ０ ｇ体重腹腔
注射麻醉大鼠，无菌操作下行颈正中切口，暴露气管，
气管注 ４ 临床肺科杂志２０１２年１月 第１７卷第ｌ期
入５ ｍｇ／ｋｇ ＢＬＭＡ ０．２～０．３ ｍｌ（生理盐水溶解），并立即将其
直立旋转，使药物在肺内均匀分布，制成肺问质纤维化模型。
正常对照组同法气管内注入等量生理盐水。动物清醒后正常 对照组以１０ ｍｌ／ 生理盐水经胃管灌服，１次／ｄ。模型组以
１０ ｍｌ／ｋｇ生理盐水经胃管灌服，１次／ｄ。干预组将Ｒｅｓ用生
理盐水稀释，分别以按２５ ｍｇ／ｋｇ、５０ ｍｇ／ｋｇ、１００ ｒａｇ／ｋｇ给大鼠
灌胃，１次／ｄ。ＤＸＭ干预组以地塞米松（３ ｒａｇ／ｋｇ）腹腔注射， １次／ｄ。各组动物分别于造模后第７ ｄ、１４ ｄ、２８ ｄ经颈动脉放
血随机处死５只，取左肺置于４％多聚甲醛中固定，常规石蜡
包埋，切片行ＨＥ染色、Ｍａｓｓｏｎ三联染色；取右肺组织，迅速放
入一１９６℃液氮中保存，用于检测肺组织ＨＹＰ含量。
三、观察指标 １．大鼠一般情况：大鼠体重、食欲、精神、活动、呼吸、死亡
等情况。
２．大鼠肺组织病理学观察：（１）ＨＥ染色，按Ｓｚａｐｉｅｌ方
法 评价肺组织病理变化严重程度：无肺泡炎或无纤维化 （一）；轻度肺泡炎或纤维化（＋），受累面积小于全肺２０％；
中度肺泡炎或纤维化（２＋），受累面积占２０％～５０％；重度肺
泡炎或纤维化（３＋），受累面积＞５０％。（２）Ｍａｓｓｏｎ三联染 色，观察胶原沉积和纤维化情况。
３．大鼠肺组织ＨＹＰ含量：按试剂盒说明书用样本碱水解
法行肺组织ＨＹＰ测定。
结 果
一、大鼠一般情况 正常对照组大鼠一般情况良好，大鼠被毛紧密贴身，色白
光泽，两眼有神，活动敏捷，食量较多，体重增加明显，唇及爪
色淡红，无死亡。模型组大鼠一般情况差，其被毛松散蓬乱， 毛色偏黄无光泽，两眼无神，萎靡不振，进食水少，体重减轻， 活动迟钝，拱背喜扎堆，多数大鼠出现拉尾现象。有不同程度
的呼吸加快，伴唇及爪轻度紫绀，尚无死亡。Ｒｅｓ低剂量干预
组大鼠一般情况基本同模型组，无死亡。Ｒｅｓ中、高剂量干预 组及ＤＸＭ干预组大鼠体重稍下降，但较模型组轻，大鼠精神、
饮食、毛色、反应、呼吸均较模型组好，无死亡。
二、大鼠肺组织大体观察 正常对照组大鼠肺脏外观色泽红润，表面光滑，质地柔
