酵母菌细胞数量和大小的测定

提出问题： 培养液中酵母菌种群数量与时间的变化关系？
在理想条件下，种群呈“J”型增长，在有 作出假设：
限的环境下，种群呈“S”型增长。
设计实验：
1.利用活化的酵母菌和葡萄糖溶液配制成酵母菌培养液， 均分为7瓶 适宜的温度、pH、溶O2等。 2.将试管至于相同且适宜的条件下进行培养 3.每天定时取样计数酵母菌数量(每天取1瓶) 4.观察、记录数据并构建数学模型
进行实验:
如何取样？如何加样？如何计数？ 如何计算种群数量？
三、血球计数板

血球计数板是一种专门用于计算较大单细 胞微生物的一种仪器。 计数时，常采用样方法。

1mm×1mm 2mm×2mm
(二)酵母细胞数的测定操作注意事项：
(1)取样方法： 取样前应将试管震荡摇匀。 (2)加样方法： 先在计数室上加盖专用的盖玻片。然后一侧滴样品，另 一侧用吸水纸吸引使菌液缓缓渗入，待酵母菌全部沉降 后计数。
探究培养液中酵母菌种群 数量变化

学会探究酵母菌种群数量变化的过程和方法 学会血球计数板的使用
一、酵母菌

单细胞真核生物 环境适宜时出芽生殖，增殖速 度快，生长周期短 还可以用酵母菌研究： 探究酵母菌的呼吸方式 细胞呼吸方式:（兼性厌氧型） 有氧时进行有氧呼吸；无氧时 进行无氧呼吸 果酒制作 酵母细胞的固定化
第1天
第4天
第6天
死亡
第7天
活菌数
解释各区段出现的原因？
思考：

本实验培养液要固定容积，且培养过程要求无 菌，你知道其中的原因吗？
模拟有限的生活资源，排除种间竞争对实验的干扰。

该实验是否需要对照实验？是否需要重复实验？

实验五、酵母的活菌观察及活细胞计数一、实验目的1、认识酿酒酵母的形态特征。

2、了解微生物细胞活体染色的原理，能辨别酿酒酵母的死活。

3、学校血细胞计数法的原理和方法。

二、实验原理1、血细胞计数板计数的原理：将经过适当稀释的微生物细胞或孢子悬液，加至血细胞计数板的技数室中，在显微镜下逐格计数。

由于计数室的容积是固定的（0.1mm3），故可将在显微镜下计得的菌体细胞数（或孢子数）换算成单位体积试样中的含菌量。

此法计得的数值为样品中的死菌数和活菌数的总和，故称其为总菌计数法。

2、血细胞计数板：是一块特制的精密载玻片，在载玻片上有四条长槽，将玻片中央区域分隔成3个平台，中间平台比两边的平台低0.1mm，此平台中间又有一条短槽将其分隔成2个短平台，在2个平台上各有一个相同的方格网。

它被划分为9个大格，其中央大格即为计数室。

该计数室又被精密地划分为400个小格，但计数室还有25个中格（为16小格/每中格）或16个中格（为25小格/每中格）两种，每中格的四周均有双线界限标志，以便在显微镜下区分。

因此两种中格类型计数室的总体积是一样的。

即计数室大方格的边长为1mm，故面积为1mm2,j计数室与盖玻片间的深度为0.1mm，所以计数室的体积为0.1mm3。

计数时，先计得若干中格（一般为5个）中格内的含菌数，再求得每中格菌数的平均值，然后乘上中格数（16或25），就可得出1大方格（0.1mm3）计数室中的总菌数，若再乘上104（换算成每mL的含菌量）及菌液的稀释倍数，即可算出每mL原菌液中的总菌数值。

算术计算法：菌数（个/mL）=(x1+x2+x3+x4+x5)/5 ×25(或16)×104×稀释倍数3、活体染色法：活体染色法就是用对微生物无毒性的染料（如美兰、刚果红、中性红等染料）配成一定的浓度，，再与一定量的菌液混合，经一段时间后死菌和活菌会呈现不同的颜色，这样便可以在显微镜下区分活菌数和死菌数。

显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸 等。
细菌三型、金黄色葡萄球菌、链球菌、变形 杆菌、大肠杆菌、枯草杆菌、破伤风梭菌、 炭疽杆菌、园褐固氮菌、霍乱弧菌等固定装 片
实验程序Ⅰ（显微镜的使用）
主要是油镜的使用
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。
2.调节光亮度
3.低倍镜观察：粗调、细调
4.
依次再进行中倍、高倍观察
5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光
镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏
油中，细调至看清物象为止。
6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。
7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去
镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残
留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体
二、基本原理
微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段， 个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作 为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或 细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、 平板计数法、光电比浊法等。
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种 特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接 计数的一种简便、快速、直观的方法。
实验六、七
培养基的制备和灭菌
一、目的要求
学习和掌握各种培养基的制备方法，其中包 括培养基的配制，包扎及灭菌技术。
熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及 操作方法。
二、基本原理
➢培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法 配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、生长因子以及 水分等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适酸碱度范围内才能 表现它们最大生命力，因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH 值范围。培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其组成 可分合成培养基和天然培养基。按其物理状态可分固体培养基，液体 培养基和半固体培养基。按其特殊用途可分加富培养基，选择培养基、 鉴别培养基。

为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学
进行了如下操作。其中操作不正确的是： C
A.吸出培养液进行计数之前将试管轻轻震荡几次 B.用滤纸吸去血球计数板边缘多余的培养液 C.在血细胞计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 D.待酵母菌沉降到计数室底部，将计数板放在载物台 中央，在显微镜下观察
1. 了解血球计数板的构造和使用方法 2. 学会酵母菌的计数方法
一、酵母的应用和危害
偏酸性含 糖环境
利用最早 兼性厌氧
用途广
酵母的应用
酵母菌是人类应用比较早的微生物。 在食品方面——酿酒、制作面包、生产调味品等。 在医药方面——生产酵母片、核糖核酸、核黄素、细胞 色素C、B族维生素、乳糖酶、脂肪酶、氨基酸等。 在化工方面——使石油脱腊、以石油为原料生产柠檬酸 等。 在农业方面——生产饲料（例如单细胞蛋白SCP）。 在生物工程方面——作为基因工程的受体菌。
酵母菌的危害
腐生性酵母菌能使食物、纺织品和其他原料腐败变质； 少数耐高渗的酵母菌和鲁氏酵母、蜂蜜酵母可使蜂蜜和 果酱等败坏； 有的酵母菌是发酵工业的污染菌，影响发酵的产量和质 量； 某些酵母菌会引起人和植物的病害，例如白假丝酵母可 引起皮肤、粘膜、呼吸道、消化道等多种疾病.
二 检测原理
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的 特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽， 构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又 被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一 个方格网。方格网上刻有9个大方格,其中 只有中间的一个大方格为计数室，供微生 物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm， 深度为0.1mm，其体积为0.1mm。
三 操作步骤
4. 计数时，规格为25格×16格的计数板，除 了取其4个对角方位外，还需再数一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数。