实验三 酵母菌大小和数量测定

微生物的显微计数和大小测量生05 边晔2010030026周四班5-1 同组成员：徐竞实验时间2012年10月25日一、实验目的1)了解血球计数板的构造和使用方法，并掌握使用血球计数板进行微生物计数的方法。

2)学习用显微测微尺测量酵母细胞的大小，对微生物大小有一种直观的认识。

3)学习灭菌技术及注意事项.二、实验原理血球计数板是一块比普通载玻片厚得多的玻璃片，其上由四条平行槽构成的三个平台，中间的平台较宽，其中间又被一短槽隔成两半，每边平台上面各刻有一个方格网，即为此计数板的计数室。

计数室的长宽各为1 mm，中间平台下陷0.1mm，故盖上盖玻片后计数室的容积为0.1mm3。

计数室有两种规格。

一种是16X25型，共有16个大格，每个大格又分为25个小格。

另一种是25X16型，共有25个大格，每个大格又分成16个小格。

应用血球计数板在显微镜下直接计数微生物细胞的数量，就是先测定若干个方格中的微生物细胞的数量。

再换算成每ml菌液中微生物细胞数量。

微生物大小的测定，需要在显微镜下借助测微尺（包括目镜测微尺和镜台测微尺）完成。

目镜测微尺是一块放入目镜中的圆形玻片，用于测量经显微镜放大后的细胞图像。

目镜测微尺需要先用镜台测微尺进行校正，然后根据微生物细胞相对于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。

三、实验器材实验用具：载玻片、盖片、吸管、擦镜纸、装有蒸馏水的洗瓶。

实验仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、手动计数器;菌种：酿酒酵母四、实验步骤1显微计数1） 200rpm,28 ℃, 36h,培养细菌，稀释20倍分装EP管。

(助教统一完成)2）在加样前，先对计数板的计数室进行镜检若有污物，则需清洗后才能进行计数。

3）震荡摇匀样品后滴加样品4）显微镜计数5） 重复10次实验过程，取其平均值，按公式计算每ml 菌液中所含的酵母菌细胞数。

6） 清洗血球计数板2微生物细胞大小的测定 1) 目镜测微尺校准。

微生物大小和数量的测定一、目的要求1．学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。

2．增强微生物细胞大小的感性认识。

3．了解血球计数板的构造、明确其计数原理。

4．学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。

二、基本原理l.显微测微尺显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。

目镜测微尺（图1）是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有等分为50小格和100小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。

因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。

镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。

用于校正目镜测微尺每小格的长度.目镜测微尺每格长度（μm）=两重合线间镜台测微尺格数×10两重合线间目镜测微尺格数2.表示方法球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。

如金黄色葡萄球菌直径约为0.8µm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3µm。

图1：目镜测微尺和镜台测微尺3．显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。

三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。

酵母菌大小的测定及计数实验流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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实验一：酵母菌大小测定一、实验器材1、菌种：酵母菌液体培养物2、仪器和其他物品目镜测微尺，镜台测微尺，普通光学显微镜，擦镜纸，载玻片，滴管等。

二、实验目的及要求1、学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。

2、掌握对不同形态细菌大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。

三、基本原理微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。

微生物大小测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺，两者配合使用。

镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每个小格10μm。

镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格地相对长度。

目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。

因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞实际大小。

四、操作步骤1、装目镜测微尺(换目镜)把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝上放在目镜镜筒内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。

※双目显微镜的左目镜通常配有屈光度调节环，不能被取下，因此使用双目显微镜时目镜测微尺一般都安装在右目镜中。

2、校正目镜测微尺（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。

（2）校正先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。

微生物大小与数量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握使用显微镜测量微生物大小的方法，以及学会运用血球计数板对微生物数量进行测定。

通过实验操作和数据处理，深入了解微生物的形态特征和种群密度，为后续的微生物学研究打下基础。

二、实验原理（一）微生物大小的测定微生物细胞的大小是微生物的基本特征之一。

使用显微镜测微尺可以较为准确地测量微生物细胞的长度、宽度和直径等参数。

显微镜测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片，上面刻有刻度；镜台测微尺是一块特制的载玻片，中央有精确的刻度，用于校正目镜测微尺。

（二）微生物数量的测定血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的工具。

它由一块特制的厚玻璃片制成，玻片上有四个槽构成三个平台。

中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面各刻有一个方格网。

方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。

计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。

但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是一定的。

因此，在一定体积的菌液中，通过计算微生物在计数室中的数量，就可以换算出菌液中微生物的数量。

三、实验材料与仪器（一）材料枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的菌悬液。

（二）仪器显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、盖玻片、滴管、擦镜纸、吸水纸等。

四、实验步骤（一）微生物大小的测定1、安装目镜测微尺将目镜测微尺装入目镜的隔板上，注意有刻度的一面朝下。

2、校正目镜测微尺（1）将镜台测微尺置于载物台上，先用低倍镜观察，找到镜台测微尺的刻度线。

（2）移动镜台测微尺，使镜台测微尺与目镜测微尺的刻度线平行，并使两者的“0”刻度线重合。

（3）换用高倍镜观察，找出两尺再次重合的刻度线。

分别记录目镜测微尺和镜台测微尺在重合线段内各自的格数。