酵母菌大小的测定和细胞计数培训课件

四、操作方法
(一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片， 其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50格， 实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用的接目 镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微 尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的载 玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长 1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm，如 图。
(二)酵母细胞计数原理 微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法
和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直 接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。 后者是在乎板上长成菌落后再计数，反应较真实， 但费时太长。本实验是利用血球计数板进行直接计 数。计数前需对样品做适当稀释，按照规定方法及 计算公式运算后，即可得出实际数值。
纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数 室内。
(5)计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要 按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格 （即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需 再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
(6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大 方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方 和左方线上的酵母细胞)。 (7)对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公 式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
3.计算方式 (1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微 尺格数×10／两个重叠刻度间目镜测微尺格数
(2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微 尺上每格的实际长度。 目镜测微尺( )格=物镜测微尺( )格 目镜测微尺每格=( )

m长格数宽格数二细胞数量测定1统计3个大格中的细胞数量2酵母菌悬液浓度计算过程个ml科学计数法计数大格123细胞数量盖玻片计数区高度01mm1个计数室边长1x1mm包含5x5个大格1个大格4x4个小格放大
实验四 酵母细胞的大小及数量测定 一、实验内容：
测定酵母细胞的大小，单位体积内的细胞数量
二、实验材料：1、菌种：酿酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae ）
2、器材：显微镜、血球计数板、镜台测微尺、目镜测微尺 三、实验步骤：
（一）细胞大小测定 1、对目镜测微尺的校正 镜台测微尺有刻度的一面朝上，置显微镜载物台上（目镜测微尺已 在镜筒中），先用10x找到镜台尺刻度，然后在40x进行目镜测微尺校正。 2、细胞大小的测量 酵母菌悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜载物台上。显 微镜光圈调暗， 用目镜测微尺测量细胞宽和长。
（二）细胞数量测定 在血球计数板计数区滴加菌悬液后再盖上盖玻片。显微镜光圈调暗，
于10 X 找到计数区，再在10 X 或 40 X 下计数。（数3个大格）。
四、作 业
（一）微生物细胞大小测定
1、目镜测微尺校正：在40x下，目镜测微尺 格与镜台测微尺 格
相当，因为镜台测微尺1小格＝10 μm，故目镜测微尺1小格＝
μm
2、酵母菌大小测定：
平均格数
平均长度
1 2 3 4 5 (精确到 0.1格) （单位:μm )
长（格数）
宽（格数）
（二）细胞数量测定 1、统计3个大格中的细胞数量 计数大格 1 2 3
细胞数量
2、 酵母菌悬液浓度 =
(计算过程) ＝
个 / mL (科学计数法)
盖玻片
计数区， 高度0.1mm
放大

镜，载玻片，盖玻片等
2022/9/12
1
三．实验原理
➢ 利用血球计数板进行微生物计数的原理？ 总菌数（个/ml）＝5×104 A·B A：5个中方格中的总菌数，B：稀释倍数（＝1） ；
➢ 利用接目测微尺测定微生物大小的原理？
接目测微尺每格长度（mm）=10n/m n：两重合线间镜台测微尺格数 m：两重合线间接目测微尺格数
2022/9/12
2
四．实验内容
1. 利用血球计数板对所给酵母培养液进行计数：上下两 个计数室各计数一次
2. 微生物大小测定 ➢ 40 ×10放大系统下对接目测微尺进行标定； ➢ 在同样放大系统下测定所给酵母细胞大小：要求测定
10个细胞长和宽
2022/9/12
3
五. 实验结果报告与思考题
1. 计数：将2个计数室结果分别填入P14的表中，并按公式 计算菌体细胞浓度：
2. 大小测定
➢ 接目测微尺标定结果：高倍镜下两重合线间镜台测微
尺 格、目镜测微尺
格；
目镜测微尺每小格实际长度为
μm。
➢ 10个细胞测定结果填入 P17的表中，计算酵母细胞大小 的范围及平均值（宽×长）
3. 思考题：讲义P14 2，3； P17 3
2022/9/12
4
实验五 酵母菌细胞总数和大小的数板进行微生物计数的方法。 2. 学习并掌握接目测微尺的标定方法及微生物大小的测
定方法，增强微生物细胞大小的感性认识。
二．实验材料
1. 菌种：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液 2. 其他：血球计数板，接目测微尺，镜台测微尺，显微

微生物的大小测定及显微镜直接计数一、实验目的1、学习并掌握用测微尺测定微生物细胞大小的方法。

2、了解血细胞计数板的构造及计数原理。

3、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。

二、实验原理1、微生物大小测定原理微生物细胞的大小是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。

其测量工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

镜台测微尺是中央部分刻标准刻尺的载玻片，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100小格，每一小格长度为0.01mm，即10μm。

如图1。

图1 镜台测微尺中央部分及镜台测微尺校正目镜测微尺目镜测微尺，如图2，是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微放大后的细胞物象。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。

图2 目镜测微尺格数两重合线间目镜测微尺格数两重合线间镜台测微尺目镜测微尺每格长度10*2、测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。

本次试验采用显微直接计数法。

显微直接计数法：将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有确定容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。

显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。

菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser ）细菌计数板或Hawksley 计数板。

三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。

而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。

显微计数法的优点是直观、快速、操作简单，缺点则是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对运动性强的活菌进行计数。

血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。