硫氧还蛋白氧化还原酶(thioredoxin reductase, TrxR)活性测定试剂盒使用说明

小鼠硫氧还蛋白还原酶（TrxR）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中硫氧还蛋白还原酶（TrxR）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中TrxR水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入TrxR、生物素化的抗小鼠TrxR抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的TrxR呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释成50 ng/ml，25ng/ml，12.5ng/ml，6.25ng/ml，3.12ng/ml，1.56ng/ml，0.78ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。

如配制50ng/ml标准品：取0.5ml100ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。

硫氧还蛋白互作蛋白硫氧还蛋白（thioredoxin，Trx）是一种小分子量的蛋白质，广泛存在于细胞内，具有还原功能。

它主要通过还原酰氧化酶、脱氧核糖核酸和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等酶活性，调节细胞内还原还原机制的平衡。

硫氧还蛋白的活性主要与其在蛋白质折叠中的作用相关。

其中，硫氧还蛋白互作蛋白也是在这一过程中发挥重要作用的蛋白质。

硫氧还蛋白互作蛋白（thioredoxin interacting protein，TXNIP）是一种特异的硫氧还蛋白结合的蛋白，其主要作用是在细胞中调节葡萄糖代谢。

TXNIP不仅能够影响胰岛素的信号转导通路，还可以抑制胰岛素分泌，从而调节血糖水平。

此外，TXNIP与细胞凋亡和炎症反应等多种生物学过程也有关。

在细胞内，硫氧还蛋白可以与多种生物活性分子结合，包括下游的酶和上游调控因子。

因此，硫氧还蛋白在细胞内起到非常重要的调节作用。

TXNIP就是硫氧还蛋白的一个重要的结合分子。

TXNIP与硫氧还蛋白之间的相互作用主要是通过胱氨酸残基（Cys247）上的配体结合的。

该配体与硫氧还蛋白的活性中心形成紧密的配合，从而影响硫氧还蛋白在细胞内的功能。

TXNIP的表达受多种生物学和环境因素的调控。

例如，它的表达在糖尿病，癌症和心血管疾病等疾病中显著上调。

此外，脂肪酸，氧化应激和低氧等环境因素也能够对TXNIP的表达产生影响。

细胞内的硫氧还蛋白和其它蛋白之间的相互作用是非常复杂的。

它不仅与TXNIP上述关键作用相关，还涉及到蛋白质折叠，应激反应，细胞增殖等多个生物学过程。

随着相关研究的不断深入，我们对硫氧还蛋白互作蛋白以及其它相关分子的相互作用越来越深入了解。

硫氧还蛋白还原酶活性在肺癌患者化疗前后的变化彭传真;宋兆录;赵永利;李贵新;冷宁;李方超;李碧蓉【摘要】目的：探讨肺癌病人的血浆硫氧还蛋白还原酶( TR)活性及化疗前后的变化。

方法收集2012年10月至2013年1月本院49例肺癌病人化疗前后的血浆和同期49例健康查体人员的血浆,进行硫氧还蛋白还原酶活性检测。

结果49例肺癌病人化疗前血浆TR活性值为4.34±6.52 U/mL,化疗后为3.93±6.30 U/mL,健康查体人员为－5.61±7.39 U/mL,数据均采用LOG(X＋4IQR)转换,并经t检验,结果显示,化疗前、后TR活性与健康查体组(对照组)相比较,P均<0.05。

化疗前、后TR活性的变化,有统计学差异。

结论肺癌病人的TR活性高；肺癌病人化疗前后血浆TR活性随疾病好转有降低。

%Objective To investigate the activity of thioredoxin reductase ( TR ) in lung cancer patients and the change before and after chemotherapy. Methods 49 patients with lung cancer were enrolled in the study,49 healthy sub￣jects served as control.The activity of TR in plasma was assayed. Results TR activity in the plasma of 49 patients with lung cancer before and aftrer chemotherapy is 4. 34 ± 6. 52U/mL, and 3. 93 ± 6. 30U/mL, respectively. While the healthy subjects is -5.61±7.39U/e LOG(X+4IQR) transform and by group t test,result showed the activity of TR between before chemotherapy and healthy group ( control group) ,and between after chemotherapy and healthy group were significant difference,( P<0. 05 ) . By paired t test, the change of the TR activity before and after chemotherapy was significant difference( P<0.05) . Conclusion Lung cancer patients have high TR activity,the plasma TRactivity decreased with the improvement of the disease in the lung cancer patients before and after chemotherapy.【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2016(044)004【总页数】3页(P425-427)【关键词】肺癌;硫氧还蛋白还原酶;化疗;活性【作者】彭传真;宋兆录;赵永利;李贵新;冷宁;李方超;李碧蓉【作者单位】青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;青岛市胶州中心医院，山东青岛，266300;邵阳医学高等专科学校生理教研室【正文语种】中文【中图分类】R734.2在恶性肿瘤中，肺癌的发病率及死亡率居首位[1]。

硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现及抗肿瘤机制探讨硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现及抗肿瘤机制探讨概述：肿瘤是全球范围内的主要致死疾病之一，因此，研究肿瘤的发生机制及开发新的治疗方法一直是科学家们的重要任务。

近年来，对肿瘤细胞内还原酶的研究表明，硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase, TrxR）在肿瘤细胞中起着重要的作用。

本文将介绍硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现以及其在抗肿瘤机制方面的探讨。

硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现：硫氧还蛋白还原酶是一种钴卟啉依赖的酶，可以将还原型硫氧还蛋白还原酶（Trx）重新还原为活性的二硫键形式。

研究表明，TrxR在许多肿瘤细胞中高度表达，并且与肿瘤细胞的增殖、转移和抗药性密切相关。

因此，开发高选择性的TrxR抑制剂成为治疗肿瘤的潜在策略。

研究人员通过化学合成和药物筛选等方法发现了许多TrxR抑制剂。

其中，一些小分子化合物显示出很高的抑制活性，并且被证实对多种肿瘤细胞有显著的抗肿瘤作用。

通过结构活性关系研究，研究人员发现这些抑制剂能够与TrxR活性中心的蛋白质残基形成稳定的非共价连接，从而抑制其催化活性。

在抗肿瘤机制方面：通过研究，发现TrxR抑制剂能够通过多种途径发挥抗肿瘤作用。

首先，抑制TrxR可以干扰细胞内的氧化还原平衡，导致细胞内氧化应激增加，从而减少肿瘤细胞的生存能力。

其次，TrxR抑制剂还可以通过抑制肿瘤细胞的增殖和诱导细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。

最后，一些研究表明TrxR抑制剂还具有抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的能力。

此外，一些研究还发现TrxR抑制剂可以增强化疗药物对肿瘤细胞的敏感性，并减少肿瘤细胞对药物的耐药性。

这一发现为联合应用TrxR抑制剂和化疗药物提供了新的治疗策略。

结论：硫氧还蛋白还原酶小分子抑制剂的发现为肿瘤治疗提供了新的方向，其抗肿瘤机制主要通过干扰细胞内的氧化还原平衡、抑制肿瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡等方式实现。

大鼠硫氧还蛋白还原酶（TrxR）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中硫氧还蛋白还原酶（TrxR）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中TrxR水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入TrxR、生物素化的抗大鼠TrxR抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的TrxR呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释成50 ng/ml，25ng/ml，12.5ng/ml，6.25ng/ml，3.12ng/ml，1.56ng/ml，0.78ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。

如配制50ng/ml标准品：取0.5ml100ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。

货号：MS1110 规格：100管/96样硫氧还蛋白氧化还原酶（thioredoxin reductase,TrxR）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。

TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。

测定原理：TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB的增加速率，即可计算TrxR活性。

自备仪器和用品：低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配制：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。

临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。

试剂三：粉剂×1 管，4℃保存。

临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。

粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3. 血清等液体：直接测定。

TrxR 测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。

2. 试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。

3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，160μL试剂一，迅速混匀后于412nm 测定10s和310s吸光度，记为A1和A2。

硫氧还蛋白还原酶大于10硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TrxR）是一种关键酶，参与了细胞内的氧化还原反应，维持了细胞内的氧化还原平衡。

最近的研究发现，硫氧还蛋白还原酶的活性超过10，对细胞的功能有重要的影响。

本文将从不同角度探讨硫氧还蛋白还原酶的功能，以及如何调节其活性，为我们进一步研究该酶提供指导意义。

首先，硫氧还蛋白还原酶在维持细胞内氧化还原平衡方面扮演着重要的角色。

细胞内存在着许多氧化剂和还原剂，这些分子之间的平衡关系对于细胞的正常功能至关重要，而硫氧还蛋白还原酶正是调节细胞内氧化还原状态的关键因子之一。

当硫氧还蛋白还原酶的活性大于10时，它可以更有效地减少细胞内的氧化剂，保护细胞不受损伤。

其次，在抗氧化防御方面，硫氧还蛋白还原酶发挥了重要作用。

氧化剂的积累对细胞造成损害，而硫氧还蛋白还原酶可以通过将氧化剂还原为较为稳定的形式，减少其对细胞的伤害。

同时，硫氧还蛋白还原酶还可以作为抗氧化剂的再生酶，将被氧化的抗氧化剂重新还原为活性形式，进一步增强抗氧化能力，保护细胞免受氧化应激的影响。

此外，硫氧还蛋白还原酶在维持代谢平衡和细胞增殖方面也具有重要作用。

细胞内的氧化还原平衡与代谢过程密切相关，维持平衡可以保障细胞的正常代谢功能进行。

硫氧还蛋白还原酶作为一个关键的氧化还原调节因子，可以通过控制许多代谢相关酶的活性，调节细胞内的代谢过程，从而维持细胞的正常功能。

此外，硫氧还蛋白还原酶还参与了细胞分裂和增殖过程，保证细胞能够顺利进行细胞周期，正常分裂和增殖。

最后，如何调节硫氧还蛋白还原酶的活性成为了研究的重要方向。

通过探索能够调节该酶活性的因素，可以为研发新的治疗方法提供新思路。

一些研究表明，调节硫氧还蛋白还原酶的合成或者降低其活性可能对某些疾病的治疗具有潜在益处。

然而，更多的研究还需要开展，以深入理解硫氧还蛋白还原酶的调控机制。

综上所述，硫氧还蛋白还原酶作为维持细胞内氧化还原平衡的关键酶，在细胞功能、抗氧化防御、代谢平衡和细胞增殖等方面发挥着重要作用。

硫氧还蛋白还原酶结构与肿瘤治疗的研究进展
堵忠颖;夏东方;高学云
【期刊名称】《北京工业大学学报》
【年(卷),期】2024(50)2
【摘要】硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TrxR)是硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)系统里主要的功能蛋白,在调节多种细胞氧化还原信号通路中起关键作用。

近年来,TrxR/Trx被越来越多地认为是肿瘤发展的重要调节剂,因此靶向TrxR/Trx是一种很有前景的肿瘤治疗策略。

该文对TrxR的结构特点、与肿瘤相关的生理功能、TrxR抑制剂进行综述,以对TrxR的研究提供参考。

【总页数】15页(P246-260)
【作者】堵忠颖;夏东方;高学云
【作者单位】北京工业大学环境与生命学部
【正文语种】中文
【中图分类】U461;TP308
【相关文献】
1.双特异性抗体在肿瘤治疗中的靶向位点及结构研究进展
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3.溴结构域蛋白4的抑制策略及其在肿瘤治疗中的研究进展
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5.新型免疫检查点抑制剂T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域在抗肿瘤免疫治疗中的研究进展
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硫氧还蛋白的名词解释硫氧还蛋白是一种重要的生物分子，它在细胞内发挥着关键的功能。

本文将对硫氧还蛋白的名词解释进行阐述，并探讨其在细胞活动中的作用及意义。

1. 硫氧还蛋白的定义硫氧还蛋白（Thioredoxin）是一类小分子质子转移酶，其主要功能是通过接受或释放电子来调节细胞内的氧化还原反应。

2. 硫氧还蛋白的结构硫氧还蛋白由两个约12千道尔顿（kDa）的亚单位组成，分别称为TRX1和TRX2。

每个亚单位结构中包含活性位点，其中存在着两个半胱氨酸残基（Cys），这两个半胱氨酸残基通过硫连键连接，并且能够进行氧化还原反应。

3. 硫氧还蛋白的生物活性硫氧还蛋白在细胞中具有多重生物活性，例如：- 维持细胞内的氧化还原平衡：硫氧还蛋白可以通过对氧化还原反应的调节，维持细胞内的氧化还原平衡。

它可以将被氧化的蛋白质还原，从而修复受损的细胞结构，保护细胞免受氧化应激的损害。

- 参与细胞信号传导：硫氧还蛋白可以与其他细胞信号分子相互作用，参与细胞内的信号传导途径。

它可以通过调节信号蛋白的氧化还原状态，影响细胞的生理功能和代谢调节。

- 参与免疫反应：硫氧还蛋白在免疫反应中发挥重要作用。

它可以通过调节细胞因子的氧化还原状态，影响免疫细胞的活化和功能，从而调节免疫反应的过程和强度。

4. 硫氧还蛋白与疾病的关系硫氧还蛋白与多种疾病的发生和发展密切相关，例如：- 癌症：硫氧还蛋白在癌症的发生和进展中发挥着双重作用。

一方面，它可以通过参与细胞的氧化还原调节，维持细胞的正常增殖和分化。

另一方面，当细胞遭受损伤或发生突变时，硫氧还蛋白的活性可能会减弱，导致异常增殖和转化为癌细胞。

- 炎症性疾病：硫氧还蛋白在炎症反应中发挥着重要的调节作用，它可以通过调节炎症介质的氧化还原平衡，影响炎症反应的强度和持续时间。

一些炎症性疾病，如风湿性关节炎和炎症性肠病，与硫氧还蛋白的功能异常有关。

- 老年痴呆症：硫氧还蛋白参与了神经细胞的氧化还原调节，对神经细胞的保护起着重要作用。

大鼠硫氧还蛋白还原酶（TrxR）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中硫氧还蛋白还原酶（TrxR）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中TrxR水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入TrxR、生物素化的抗大鼠TrxR抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的TrxR呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100ng/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释成50 ng/ml，25ng/ml，12.5ng/ml，6.25ng/ml，3.12ng/ml，1.56ng/ml，0.78ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml，临用前15分钟内配制。

如配制50ng/ml标准品：取0.5ml100ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3.样品稀释液：1×20ml/瓶。

4.检测稀释液A：1×10ml/瓶。

5.检测稀释液B：1×10ml/瓶。

6.检测溶液A：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液A1：100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如1ul 检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

7.检测溶液B：1×120ul/瓶（1：100）临用前以检测稀释液B1：100稀释。