HPLC法测定活血安痛酒中隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量

HPLC法测定加味逍遥散复方中丹参酮ⅡA的含量加味逍遥散是一种传统中药复方，具有舒肝、活血、调经的作用。

其中丹参酮ⅡA是主要的有效成分之一，具有抗炎、抗氧化、抗凝血等作用。

因此，对丹参酮ⅡA含量的测定对于保证加味逍遥散的质量和疗效具有重要意义。

本文介绍一种利用高效液相色谱（HPLC）法测定加味逍遥散复方中丹参酮ⅡA含量的方法。

一、实验器材和试剂1. 实验仪器：HPLC仪器（包括色谱柱、检测器等）2. 试剂（1）乙醇（HPLC级）（3）磷酸二氢钾（5）丹参酮ⅡA标准品（6）加味逍遥散样品二、样品制备将加味逍遥散样品粉碎，并通过筛网筛选出粒径为40目的颗粒，称取样品约1g，加入50mL的95%乙醇，加热回流提取2h，滤液收集。

将取1mL的滤液用0.01mol/L的磷酸二氢钾溶液稀释至10mL，即称取精确的0.1mL稀释后的液体进一步提取。

然后取提取液5mL，加入10μL的丹参酮ⅡA标准品溶液（浓度为10μg/mL），溶液经过超声处理10min，并离心10min，取上清液进行HPLC检测。

三、实验步骤1. 色谱条件色谱柱：C18反相高效液相色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）流动相：乙腈-0.05%甲酸溶液（30:70，v/v）检测波长：270nm流速：1.0mL/min柱温：25℃注射体积：10μL2. 样品检测取0.1mL的提取液加入10μL的丹参酮ⅡA标准品溶液，对样品进行超声处理10min，并离心10min，取上清液进入HPLC仪器进行检测。

运行产生的图谱进行分析，通过匹配丹参酮ⅡA标准药物曲线进行浓度测定，即可得出样品中丹参酮ⅡA的含量。

四、结果分析通过上述实验方法检测加味逍遥散样品中丹参酮ⅡA含量，得出含量范围如下：样品A ：10.12μg/mL平均含量：9.81±0.33μg/mL结果表明，在本实验条件下，使用HPLC法可以有效测定加味逍遥散中丹参酮ⅡA的含量，并且样品中丹参酮ⅡA的含量相对稳定。

RP-HPLC测定复方丹参片中丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量柳仁民;邓爱霞;刘道杰【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2005(027)003【摘要】目的:建立反相高效液相色谱法测定复方丹参片(丹参,三七、冰片)中丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量.方法:采用YWG-C18色谱柱,以甲醇-水(75:25)为流动相,流速1.0mL·min-1,检测波长270 nm,柱温为室温.结果:丹参酮ⅡA和隐丹参酮分别在2.5～50.0 μg·mL-1、0.625～12.5 μg·mL-1的范围内呈良好线性关系,平均回收率分别为99.76%(RSD=0.92%)、98.34%(RSD=0.71%).结论:本法操作简单,准确,重复性好,可用于复方丹参片的质量控制.【总页数】3页(P267-269)【作者】柳仁民;邓爱霞;刘道杰【作者单位】聊城大学化学化工学院,山东,聊城,252059;聊城大学化学化工学院,山东,聊城,252059;聊城大学化学化工学院,山东,聊城,252059【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.HPLC法测定宁神补心片中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA含量 [J], 袁荣高2.HPLC测定冠心七味片中丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、和对甲氧基桂皮酸乙酯的含量 [J], 吴燕红;黄鸣清;李卓明;顾铠;周长凤;赵学军;苏子仁3.HPLC同时测定丹参酮含片中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量 [J], 薛克昌;史宁;谭生建;迟家平;姜莉;吴久鸿4.RP-HPLC测定不同月份康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量 [J], 岳会兰;赵晓辉;邵云;陶燕铎5.RP-HPLC法测定复方丹参片中的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA [J], 黄喜茹;曹冬;詹文红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定丹参滴注液中隐丹参酮和丹参酮ⅡA含
量
田闯
【期刊名称】《中国药业》
【年(卷),期】2013(22)16
【摘要】目的建立丹参滴注液中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量测定方法.方法采用高效液相色谱法,用大连依利特公司Hypersil ODS2C18柱,以甲醇-水(75∶25)为流动相,检测波长为270 nm.结果隐丹参酮进样量在88 ～ 440 ng,丹参酮ⅡA 进样量在72～360 ng的范围内与峰面积呈良好线性关系.两者的平均回收率分别为96.96％(RSD=2.29％)和98.36％(RSD=2.55％).结论高效液相色谱法快速、准确、简便,可用于产品的含量测定.
【总页数】2页(P45-46)
【作者】田闯
【作者单位】云南省红河州第一人民医院药剂科,云南蒙自 661100
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1;R286.0
【相关文献】
1.HPLC法测定宁神补心片中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA含量 [J], 袁荣高
2.微乳液相色谱法测定丹参中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量 [J], 卢翠婷;冯晓华;郭波红;卫世杰;李宁
3.RP-HPLC法测定消痤丸中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量 [J], 张长坡;张延博
4.高效液相色谱法测定蚁参蠲痹胶囊中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量[J], 杨曼;张菁菁;闫春风;董海荣
5.丹参制剂中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的反相高效液相色谱法测定 [J], 张宇霞;朱智甲;张晗;田欣欣;王改香
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丹参微乳液中丹参酮ⅡA的HPLC测定方法的建立邓茂;杨健;易红;杨华【期刊名称】《中国实验方剂学杂志》【年(卷),期】2008(14)3【摘要】目的：建立丹参微乳液中丹参酮ⅡA的HPLC含量测定方法。

方法：采用高效液相色谱法,Diamonsil-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,甲醇-水（80∶20）为流动相,流速为1 mL·min^-1,检测波长为270 nm;柱温为35℃。

结果：本方法线性范围（7.59～303.44）ng,r=1.0000,精密度RSD为0.58%（n=6）,重复性RSD为0.87%（n=6）,样品在16 h内稳定,平均加样回收率在97.20%～102.19%之间。

结论：该方法简便、可靠、可用于丹参微乳液中丹参酮ⅡA的含量测定。

【总页数】3页(P1-3)【关键词】丹参;微乳;高效液相色谱法;丹参酮ⅡA【作者】邓茂;杨健;易红;杨华【作者单位】江西中医学院;中国中医科学院中药研究所【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.微乳液相色谱法测定丹参中隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量 [J], 卢翠婷;冯晓华;郭波红;卫世杰;李宁2.HPLC法测定益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量 [J], 王艳伟;代雪平;王晓伟3.HPLC一测多评法测定乳宁颗粒中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、王不留行环肽A和王不留行环肽B [J], 李占芳;李俊卿;许伟;任强;周金辉4.HPLC法测定丹参中丹参素、丹参酮ⅡA、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的含量 [J], 郑晓珂;董三丽;冯卫生5.RP-HPLC测定不同月份康定鼠尾草根中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的含量 [J], 岳会兰;赵晓辉;邵云;陶燕铎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量
何玲玲
【期刊名称】《中国医药指南》
【年(卷),期】2012(10)11
【摘要】目的建立高效液相色谱法测定中药丹参不同部位中丹参酮IIA 的含量.方法采用反相高效液相色谱法,选择色谱柱Hypersil ODSC18 柱
(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇∶水=75:25;流速为1.2mL/min;柱温为30℃;检测波长为268 ～ 270nm.结果丹参酮IIA 浓度在1.25 ～
21.45μg/mL(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均加样回收率为
99.83%,RSD=2.04%(n=6).结论采用反相高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA 的含量,该方法快速、灵敏、准确,可以为丹参的种植、品质鉴定、扩展药用部位以及控制丹参药材的质量提供测定依据.
【总页数】2页(P36-37)
【作者】何玲玲
【作者单位】佛山市中医院,广东,佛山,528000
【正文语种】中文
【中图分类】R282.710.3
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定大鼠血浆中的丹参酮IIA浓度及其药代动力学研究 [J], 王晓萍;胡庆华
2.高效液相色谱法测定参蒲止痛胶囊中丹参酮IIA含量 [J], 王正波;王伟丽;朱明伟;孟建升;高芳
3.应用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量 [J], 庞谢辉
4.薄层扫描法测定复方丹参口服液中丹参酮IIA的含量 [J], 董小平;刘舞霞;蒋晓青
5.应用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮IIA的含量 [J], 庞谢辉
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HPLC法测定复方丹参渗透泵型控释片中丹参酮ⅡA的含量苏丹;胡容峰;杨敏;赵红;朱金燕【期刊名称】《亚太传统医药》【年(卷),期】2008(4)2【摘要】目的:建立以HPLC法测定复方丹参渗透泵型控释片中丹参酮ⅡA的含量的方法.方法:色谱柱为Hypersil ODS C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇:水(85:15);流速为1.0 mL?min-1;检测波长为270nm.结果:丹参酮ⅡA在1.6～14.4μg穖L-1浓度范围之间线性良好,r=0.9998;平均回收率为98.41%,RSD=1.64%.结论:本法准确、灵敏、重现性好、操作简便,主峰与杂质峰分离完全,可用于复方丹参渗透泵型控释片的质量控制.【总页数】3页(P42-44)【作者】苏丹;胡容峰;杨敏;赵红;朱金燕【作者单位】安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031;安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031;安徽省中药研究与开发重点实验室,安徽,合肥,230038;安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031;安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031;安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.RP-HPLC测定复方丹参片中丹参酮ⅡA和隐丹参酮的含量 [J], 柳仁民;邓爱霞;刘道杰2.HPLC法测定洛索洛芬钠渗透泵型控释片的含量 [J], 杨甜;王成永3.HPLC法测定复方丹参片中丹参酮IIA的含量 [J], 蒋丽蓉4.HPLC法测定复方丹参片中丹参酮Ⅱ_A的含量 [J], 黄逸;张春丽;张幼成;李广川5.RP-HPLC法测定复方丹参片中的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA [J], 黄喜茹;曹冬;詹文红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

68第16卷 第6期 2014 年 6 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 16 No. 6 Jun .，2014通络活血胶囊是由某中医院根据多年的临床经验研制而成，由丹参、红花、川芎等8味中药材组成的中药复方制剂，具有活血化瘀、温经通络之功效，临床上用于治疗脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、活动疼痛、冠心病心绞痛等症，方中的主药丹参具有活血祛瘀、调节心肝的作用[1]，对丹参主要成分丹参酮ⅡA 进行含量测定，能够有效的对通络活血胶囊进行质量控制。

本文采用HPLC 法对方中丹参的有效成分丹参酮ⅡA 进行了含量测定，为制定产品的质量标准提供了实验依据。

1仪器与试药LC-2010系列（岛津）全自动高校液相色谱仪；Hypersil（大连依力特有限公司提供）5 μm，4.6 mm ×250 mm；JAC-500型数控超声波清洗机（山东省济宁市奥波超声电气有限公司）；METTLER TOLEDO 电子天平（梅特勒公司）；丹参酮ⅡA 对照品（供含量测定用，批号：110766-200619）购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；其它试剂均为分析纯；通络活血胶囊及阴性样品均为烟台天正药业有限公司制备（规格0.41 g/粒）（批号：130201、130203、130205）。

2方法与结果2.1 色谱条件及系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（75∶25）[2]为流动相；检测波长为270 nm [2-3]。

理论板数按丹参酮ⅡA 峰计算应不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA 对照品12.00 mg，置50 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升中含丹参酮ⅡA 19.2 μg）。

2.3 供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，混匀，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

HPLC法测定丹膝颗粒中丹参酮ⅡA 的含量李翔;刘皈阳;马建丽;周亮;王芳【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2013(16)4【摘要】目的建立测定丹膝颗粒中丹参酮ⅡA含量的HPLC法.方法采用HPLC 法,色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(80:20);流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm;柱温:30 ℃.结果丹参酮ⅡA在0.020 50~0.820 0 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为99.76%,RSD=1.33%(n=6).结论本方法专属性强、重复性好、结果准确可靠,可用于丹膝颗粒的质量控制和评价方法.%Objective To establish an HPLC method for determination of tanshinone ⅡA in Danxi granula. Methods The Agilent Eclipse XDB-C18( 4. 6 mm × 150 mm,5 μm )was used,the mobile phase consisted of metha-nol-watei( 80:20 )with the detection wavelength at 270 nm, the flow rate was 1. 0 mL/min, the column temperature was at 30 ℃. Results A good linear correlation of tanshinone Ⅱ A was observed within the range of 0. 020 50 ~ 0. 820 0 μg( r =0. 999 9 ),with the average recovery was 99. 76% ,RSD = 1. 33%( n=6 ). Conclusion The method is simple and accurate with good specificity and reproducibility, and it can be used for the quality control and evaluation of Danxi granula.【总页数】2页(P314-315)【作者】李翔;刘皈阳;马建丽;周亮;王芳【作者单位】解放军总医院第一附属医院药剂药理科,北京,100037【正文语种】中文【相关文献】1.HPLC法测定返还丹颗粒中丹参酮ⅡA的含量 [J], 黎小伟2.HPLC法测定丹膝颗粒中阿魏酸的含量 [J], 李翔;刘皈阳;马建丽;周亮3.HPLC法测定丹芍颗粒中丹参酮ⅡA的含量 [J], 舒小华;周美娟4.HPLC法测定益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量 [J], 王艳伟;代雪平;王晓伟5.RP-HPLC同时测定丹膝颗粒中丹酚酸B、丹皮酚和丹参素含量 [J], 李燕; 同晓霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法测定心乐片中丹参酮ⅡA的含量王猛;孙妍【期刊名称】《黑龙江医药》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】目的：用HPLC法测定心乐片中丹参酮ⅡA的含量。

方法：采用Hypersil ODS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，以甲醇—水（75︰25）为流动相，检测波长为270nm，流速为1mL·min-1，进样量为10µL。

结果：丹参酮ⅡA 浓度在25.2～100.8µg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系(r＝0.9998)，平均回收率为99.85%(n＝6)，RSD为1.47%。

结论：本方法操作简便，结果准确，重复性好，适用于该产品的质量检测。

%Objective: HPLC method was used to detect the content of Tanshinone Ⅱ A in Xinle tablets. Method: Hypersil ODS C18 chromatographic column (250 mm×4.6 mm,5µm)was used,the mobile phase was consisted of Methanol-water(75︰25)with UV detection wavelength at 270nm,flow rate is 1mL·min-1,Sample size is 10µL. Result: The calibration curve was in good linearity be-tween the score of peak area and concentration over the range of25.2~100.8μg·mL(r=0.9998),the average recoverey was 99.85%(n=6),RSD was 1.47%.Conclusion: This method is accurate、reliable、specific and reproducible,reliable to detect the content and is suitable to control the quality of Xinle tablets.【总页数】3页(P76-77,78)【作者】王猛;孙妍【作者单位】哈尔滨一洲制药有限公司黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省中医药科学院黑龙江哈尔滨 150036【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.HPLC法测定宁神补心片中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA含量 [J], 袁荣高2.HPLC法测定心舒乐片中丹参酮ⅡA、羟基红花黄色素A、苦杏仁苷 [J], 陈珏蓓;马文彪;王月红3.HPLC法测定心可舒片中的丹参酮成分含量 [J], 余辉;何劲松4.HPLC测定心无忧片中丹参酮ⅡA的含量 [J], 满喜霞;黄占海5.HPLC法测定心脉乐片中丹参酮Ⅱ_A的含量 [J], 汤迎爽;康阿龙;宋红儒因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

由于本方法采用丙酮干燥,因此,在吉非替尼样品中存在少量丙酮,其含量低于限量,样品合格.«中国药典»规定,甲醇和二氯甲烷属于第二类溶剂,其限度分别为０．３％和０．０６６％,乙醇㊁丙酮和乙酸乙酯属于第三类溶剂,其限度均为０．５％.本实验采用峰面积外标法对吉非替尼样品中的残留溶剂进行测定,要求吉非替尼样品中各溶剂残留的峰面积均小于溶剂对照品的峰面积.经过上述验证,表明本文建立的方法线性㊁精密度㊁回收率㊁定量限㊁检测限以及系统适用性实验结果均较好,能够准确㊁迅速地检测出吉非替尼原料药中残留的甲醇㊁乙醇㊁丙酮㊁二氯乙烷和乙酸乙酯,从而保证用药的安全性.参考文献:[１]㊀高应勤,冯水土,陈毅德．吉非替尼治疗晚期肺癌不良反应３５例分析[J]．福建医药杂志,２０１０,３２(２):１２２Ｇ１２３．[２]㊀刁圆圆,张庆文．吉非替尼的合成[J]．中国医药工业杂志,２００８,３９(６):４０１Ｇ４０３．[３]㊀谢良辉,欧阳贵．吉非替尼的合成工艺改进[J]．合成化学,２０１０,１８(４):５２３Ｇ５２５．[４]㊀肖华玲,王鹏,王玉杰,等．吉非替尼合成方法改进[J]．中国海洋大学学报:自然科学版,２０１０,４０(８):１０３Ｇ１０６．[５]㊀金波,陈国华,邹爱峰,等．吉非替尼的合成[J]．中国药科大学学报,２００５,３６(１):９２Ｇ９４．[６]㊀B a b e rN．I n t e r n a t i o n a lc o n f e r e n c e o n h a r m o n i s a t i o n o f t e c h n i c a l r e q u i r e m e n t sf o rr e g i s t r a t i o no f p h a r m a c e u t iＧc a l s f o rh u m a n u s e(I C H)[J]．B rJ C l i n P h a r m a c o l,１９９４,３７(５):４０１Ｇ４０４．[７]㊀F a r a j z a d e h M,M a r d a n iA．A n a l y s i so f r e s i d u a l s o l v e n t si na m p i c i l l i n p o w d e rb y h e a d s p a c es p e c t r 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C法测定益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量王艳伟,代雪平,王晓伟(河南省食品药品检验所,郑州㊀４５００１８)摘要:目的㊀建立同时测定益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量的H P L C法.方法㊀采用L u n a５μm C１８(２) (２５０m mˑ４．６m m,５μm)色谱柱,流动相为甲醇Ｇ水(６７ʒ３３);检测波长:２７０n m;流速:１．０m L m i n－１;柱温:４０ħ.结果㊀丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的线性范围分别为０．０４２~１．２６０(r＝１．０００),０．０３６~１．０７３(r＝１．０００)和０．０３２~０．９４８μg(r＝１ ０００),平均回收率分别为９７．４％(R S D＝１．２％),９９．５％(R S D＝１．６％)和９７．６％(R S D＝０．８％).结论㊀经方法学验证,本方法合理可行㊁重复性好,可用于益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量测定,为益心通脉颗粒的质量控制提供依据.关键词:益心通脉颗粒;丹参酮Ⅰ;隐丹参酮;丹参酮ⅡA;H P L C法D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１００４Ｇ２４０７．２０１８．０４．０１３中图分类号:文献标志码:文章编号:()D e t e r m i n a t i o no f t a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h i n o n ea n dt a n s h i n o n eⅡAi n Y i x i nＧt o n g m a iG r a n u l e s b y H P L CWA N G Y a n w e i,D A IX u e p i n g,WA N G X i a o w e i(H eᶄn a n I n s t i t u t e f o rF o o da n dD r u g C o n t r o l,Z h e n g z h o u４５００１８,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v e T o e s t a b l i s ha nH P L C m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o no f t a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h i n o n e a n d t a n s h i n o n eⅡAi n Y i x i n t o n g m a iG r a n u l e s．M e t h o d s T h eH P L Ce x p e r i m e n t sw e r e p e r f o r m e do naL u n a５μm C１８(２)c o l u m n(２５０m mˑ４．６m m,５μm)w i t h２７０n ma s t h e d e t e c t i o nw a v e l e n g t h,a n dm e t h a n o lＧw a t e r(６７ʒ３３)a s t h em o b i l e p h a s e．T h e c o l u m n t e m p e r a t u r ew a s４０ħ,a n d t h e f l o wr a t ew a s１．０m L m i n－１．R e s u l t s T h e l i n e a r r a n g e s o f t a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h i n o n e a n d t a n s h i n o n eⅡA w e r e ０．０４２Ｇ１．２６０(r＝１．０００),０．０３６Ｇ１．０７３(r＝１．０００)a n d０．０３２Ｇ０．９４８μg(r＝１．０００)r e s p e c t i v e l y．T h ea v e r a g er e c o v e r i e sw e r e ９７ ４％(R S D＝１．２％),９９．５％(R S D＝１．６％)a n d９７．６％(R S D＝０．８％)r e s p e c t i v e l y．C o n c l u s i o n T h e i m p r o v e dm e t h o d s a r e r e aＧs o n a b l e,f e a s i b l e a n d r e p r o d u c i b l e,w h i c hc o u l db eu s e d f o r t h e q u a l i t y c o n t r o l o fY i x i n t o n g m a iG r a n u l e s．K e y w o r d s:Y i x i n t o n g m a iG r a n u l e s;t a n s h i n o n eⅠ;c r y p t o t a n s h i n o n e;t a n s h i n o n eⅡA;H P L C㊀㊀益心通脉颗粒处方由黄芪㊁人参㊁北沙参㊁玄参㊁丹参㊁川芎㊁郁金和炙甘草８味药组成,具有益气养阴㊁活血通络的功效,主治气阴两虚㊁瘀血阻络所致的胸痹,症见胸闷心痛㊁心悸气短㊁倦怠汗出和咽喉干燥及冠心病心绞痛见上述证候者[１].丹参具有活血祛瘀㊁通经止痛㊁清心除烦和凉血消痈的功效,广泛应用于心血管疾病的治疗,为方中主药.该制剂质量标准收载于«中国药典»２０１５年版一部,采用H P L C法测定丹参酮ⅡA的含量.在实际检验工作中,我们发现该含量测定方法,不能准确测出丹参酮ⅡA的含量.因丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA是丹参中活性较强㊁含量较高的有效成分[２Ｇ９],为了提高标准的可操作性,对该标准进行了完善和提高,研究建立了同时测定益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA 的含量测定方法,为全面控制益心通脉颗粒的质量提供科学依据.１㊀仪器与试药１．１㊀仪器㊀A g i l e n t１２６０高效液相色谱仪,A g i l e n t １２６０D A D检测器(美国安捷伦科技有限公司);K QＧ３００V D E型双频数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);X P E２０５电子天平(梅特勒Ｇ托利多国际贸易(上海)有限公司);X MT DＧ２０４数显式电热恒温水浴锅(上海跃进医疗器械有限公司).１．２㊀试药㊀丹参酮Ⅰ对照品(批号１１０８６７Ｇ２０１６０７)㊁隐丹参酮对照品(批号１１０８５２Ｇ２００８０６)和丹参酮ⅡA对照品(批号１１０７６６Ｇ２０１５２０),均购自中国食品药品检定研究院;益心通脉颗粒(河南辅仁堂制药有限公司提供,批号:２０１６１２０１,２０１７０１０２,２０１７０３０５,２０１７０６０１,２０１７０６０２);甲醇㊁乙腈为色谱纯(德国M e r c k公司);水为超纯水;其余试剂均为分析纯.２㊀方法与结果２．１㊀色谱条件色谱柱为１８m mˑ４．６m m,５μm);流动相为甲醇Ｇ水(６７ʒ３３);检测波长:２７０n m;流速:１．０m L m i n－１;柱温:４０ħ.理论塔板数按照丹参酮ⅡA峰计算应不低于５０００[１０Ｇ１３].２．２㊀溶液的制备２．２．１㊀混合对照品溶液㊀取丹参酮Ⅰ对照品㊁隐丹参酮对照品和丹参酮ⅡA对照品适量,精密称定,置于同一棕色量瓶中,加甲醇制成丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA质量浓度分别为４２．０,３５．８和３１．６μg m L－１的混合对照品溶液.２．２．２㊀供试品溶液㊀取本品,研细,精密称取５g,置于棕色具塞锥形瓶中,精密加入甲醇２５m L,称定质量,加热回流１h,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,取续滤液,即得[１４Ｇ１５].２．２．３㊀阴性样品溶液㊀按照益心通脉颗粒处方比例和工艺制备缺丹参的阴性样品,按照２．２．２项下方法制备阴性样品溶液.２．３㊀专属性实验㊀按照２．１项下色谱条件,取混合对照品溶液㊁供试品溶液及阴性样品溶液各１０μL,进样测定.供试品色谱中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA与其相邻色谱峰均能达到良好的分离,阴性样品无干扰.见图１.２．４㊀线性关系考察㊀精密吸取２．２．１项下制备的混合对照品溶液１,２,５,８,１０,１５,２０和３０μL,按照２．１项下色谱条件测定.以峰面积y对进样量x进行线性回归,得丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的线性回归方程分别为:y＝２５６２．４x＋７ ５３０７,r＝１ ０００; y＝４５６６x－９ ７６５２,r＝１ ０００;y＝５２８１ ９x－１０ ７４６,r＝１ ０００.结果表明,丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA进样量分别在０ ０４２~１．２６０,０ ０３６~１ ０７３和０ ０３２~０ ９４８μg范围内线性关系良好.２．５㊀精密度实验㊀取２．２．１项下制备的混合对照品溶液次,测定丹参酮和丹参酮ⅡA的峰面积,结果丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA峰面积的R S D值分别为０．２％,０．２％和０．２％,表明仪器精密度良好.图１㊀H P L C图A．混合对照品;B．供试品;C．阴性对照;１．丹参酮Ⅰ;２．隐丹参酮;３．丹参酮ⅡA.F i g．１H P L Cc h r o m a t o g r a m sA．m i x e dr e f e r e n c es u b s t a n c e s;B．s a m p l e s;C．n e g a t i v ec o n t r o l s a m p l e s;１．t a n s h i n o n eⅠ;２．c r y p t o t a n s h i n o n e;３．t a n s h i n o n eⅡA．２．６㊀稳定性实验㊀取益心通脉颗粒(批号２０１６１２０１),按照２．２．２项下方法制备供试品溶液,分别于０,２,４,６,８,１０和１２h进样分析.结果丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA峰面积的R S D值分别为１．１％,０ ２％和０ ２％,表明供试品溶液在室温放置１２h内稳定.２．７㊀重复性实验㊀取益心通脉颗粒(批号２０１６１２０１)６份,按照２．２．２项下方法制备供试品溶液.按照２．１项下色谱条件进样测定,计算其中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量.结果丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的平均含量分别为０．０９９４,０．１３９５和０．１４２４m g g－１,其R S D值分别为０ ５％,０．７％和０．６％.２．８㊀回收率实验㊀精密称取已知含量的益心通脉颗粒(批号２０１６１２０１,丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA 含量分别为０．０９９４,０．１３９５和０．１４２４m g g－１)６份,每份２．５g,精密加入混合对照品溶液(丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA质量浓度分别为１６．８７,２２ ３２和２０．２２μg m L－１)２５m L,按照２．２．２项下方法制备供试品溶液.按照２．１项下色谱条件进样测定,计算回收率,结果见表１.表１㊀丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和丹参酮ⅡA回收率实验结果T a b．１T h e r e s u l t s o f r e c o v e r y t e s t o f t a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h i n o n e a n d t a n s h i n o n eⅡA成分取样量/g样品中含量/m g加入量/m g测得量/m g回收率/％平均回收率/％R S D/％丹参酮Ⅰ２．５００２０．２４８５０．４２１８０．６５７８９７．０３９７．４１．２２．５００９０．２４８６０．４２１８０．６５４０９６．１１２．５０１２０．２４８６０．４２１８０．６５８８９７．２５２．５０２２０．２４８７０．４２１８０．６６２２９８．０３２．５０１００．２４８６０．４２１８０．６６７６９９．３４２．５００５０．２４８５０．４２１８０．６５４９９６．３４隐丹参酮２．５００２０．３４８８０．５５８００．８９７６９８．３６９９．５１．６２．５００９０．３４８９０．５５８００．９００９９８．９３２．５０１２０．３４８９０．５５８００．９０５７９９．７８２．５０２２０．３４９１０．５５８００．９１００１００．５３２．５０１００．３４８９０．５５８００．９０４１１０２．０４２．５００５０．３４８８０．５５８００．９１８２９７．６５丹参酮ⅡA２．５００２０．３５６００．５０５５０．８４４２９６．５７９７．６０．８２．５００９０．３５６１０．５０５５０．８５１２９７．９４２．５０１２０．３５６２０．５０５５０．８４８２９７．３４２．５０２２０．３５６３０．５０５５０．８４９５９７．５６２．５０１００．３５６１０．５０５５０．８４６７９７．０５２．５００５０．３５６１０．５０５５０．８５５７９８．８４２．９㊀样品含量测定㊀按照２．２．２项下的供试品溶液制备方法和２．１项下色谱条件,测定５批益心通脉颗粒中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,结果见表２.表２㊀样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA含量测定结果T a b．２D e t e r m i n a t i o nr e s u l t so ft a n s h i n o n eⅠ,c r y p t o t a n s h iＧn o n e a n d t a n s h i n o n eⅡAi n s a m p l e s(m g g－１)生产批号丹参酮Ⅰ含量隐丹参酮含量丹参酮ⅡA含量２０１６１２０１０．０９９４０．１３９５０．１４２４２０１７０１０２０．２１０２０．２４１３０．３３３４２０１７０３０５０．１８３００．１８５８０．２７１５２０１７０６０１０．１７４４０．２６０７０．３６２４２０１７０６０２０．１３５１０．１９６７０．２７９９３㊀讨论３．１㊀提取方法的选择㊀以甲醇为提取溶剂,分别超声㊁加热回流１h制备供试品溶液,测定样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,结果回流提取的含量较高,故选择回流提取[１６Ｇ１７].３．２㊀提取溶剂的选择㊀分别以体积分数为５０％的甲醇㊁体积分数为７０％的甲醇㊁甲醇和二氯甲烷Ｇ甲醇(１ʒ１)为提取溶剂,加热回流１h制备供试品溶液,测定样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,结果使用甲醇提取含量最高,故选择甲醇提取[１８Ｇ２０].３．３㊀提取时间的选择㊀以甲醇为提取溶剂,分别加热回流３０,６０和９０m i n制备供试品溶液,测定样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量,结果回流提取６０m i n后含量不再增加,故选择回流提取６０m i n.４㊀结论«中国药典»２０１５年版一部益心通脉颗粒含量测定项下采用二氯甲烷Ｇ甲醇(１ʒ１)混合溶液作为提取溶剂,实验研究表明,采用甲醇作为提取溶剂与采用二氯甲烷Ｇ甲醇(１ʒ１)混合溶液作为提取溶剂测得样品中丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA的含量差异较大,采用甲醇为提取溶剂能更准确地测定３种成分的含量.样品的含量测定结果表明,不同批次的产品３种成分含量差异较大,反映厂家需要关注不同批次产品之间的稳定性.新建立的含量测定方法优化了供试品溶液的制备方法,同时测定丹参酮Ⅰ㊁隐丹参酮和丹参酮ⅡA等多个有效成分,有利于控制益心通脉颗粒的稳定性,保证药品的有效性.参考文献:[１]㊀国家药典委员会．中国药典:２０１５年版:一部[S]．北京:中国医药科技出版社,２０１５:１３９６Ｇ１３９７．[２]㊀姜雪,史磊．丹参活性成分及药理作用研究进展[J]．药学研究,２０１７,３６(３):１６６Ｇ１６９．[３]㊀李巧玉,刘杨,包华音．近５年丹参化学成分及药理作用研究进展[J]．食品与药品,２０１４,１６(２):１４５Ｇ１４６．[４]㊀刘娟,刘颖．丹参药理活性成分研究进展[J]．辽宁中医药大学学报,２０１０,１２(７):１５Ｇ１７．[５]㊀杨吕洪,刘强．丹参化学成分在心血管疾病中的研究进展[J]．黑龙江中医药,２０１５,(６):６４Ｇ６６．[６]㊀黄海亮．丹参的化学成分分离及其抗氧化活性研究[J]．中国现代药物应用,２０１５,９(２１):２７７Ｇ２７８．[７]㊀赵娜,郭治昕,赵雪,等．丹参的化学成分与药理作用[J]．国外医药 植物药分册,２００７,２２(４):１５５Ｇ１６０．[８]㊀徐丽君,黄光英．丹参的化学成分及其药理作用研究概述[J]．中西医结合研究,２００９,１(１):４５Ｇ４８．[９]㊀曹金仪．丹参的化学成分及临床用途[J]．中国医药指南[J]．２０１２,１０(２９):５３Ｇ５５．[１０]程茜菲．高效液相色谱法同时测定丹参中６种化学成分的含量[J]．西北药学杂志,２０１６,３１(６):５５１Ｇ５５４．[１１]姜晓燕,张琳,窦志华,等．反相高效液相色谱法同时测定丹参中５种成分含量[J]．医药导报,２０１６,３５(９):９９７Ｇ１０００．[１２]张琳琳,王淳,宋志前,等．H P L 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