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迟缓爱德华氏菌的粘附特性X

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南京农业大学学报　1997,20(3):87～91

JournalofNanjingAgriculturalUniversity

迟缓爱德华氏菌的粘附特性Ξ欧阳志明　陈怀青　陆承平(南京农业大学动物医学院,南京210095)

摘要　用绵羊红细胞对不同来源的15株迟缓爱德华氏菌(ET)作血凝试验。结果表明,15株ET均具有血凝性,且不能为甘露糖、蔗糖、葡萄糖所抑制。分别用甲醛、戊二醛、胰蛋白酶处理ET的模式菌株ET99菌体,能抑制细菌血凝。提纯的ET99菌株的鞭毛蛋白、外膜蛋白均无血凝性。同时用HEp22细胞分析了15

株ET的细胞粘附特性。结果表明,有10株ET能粘附HEp22细胞,粘附菌数大于10CFU/细胞。分别用甲醛、戊二醛、胰蛋白酶、盐酸处理ET99菌体,细菌粘附力有所下降;用甘露糖、蔗糖、葡萄糖处理ET99菌体,细菌粘附力变化不大;用甲醛、戊二醛、胰蛋白酶处理HEp22细胞,ET99的粘附菌数有不同程度的下降。提纯的ET99菌株外膜蛋白不能抑制细菌粘附,而提纯的ET99菌株鞭毛蛋白对细菌的粘附有一定的抑制。提示ET的粘附素是包括血凝素及鞭毛在内的一类蛋白样物质。关键词　迟缓爱德华氏菌;血凝性;细胞粘附中图分类号　S85511∶S85213

ADHESIONPROPERTYOFEDWARDSIELLATARDA

OuyangZhiming,ChenHuaiqingandLuChengping(CollegeofVeterinaryMedicine,NanjingAgricUniv,Nanjing210095)

ABSTRACT　LittleinformationwasavailableonthevirulencemechanismofEdwardsiellatarda

(ET).Itwas

undeterminedwhetherthebacteriuminitiallyadheredtoitshostandthenestablishedinfection.TheabilityofETadhesionwasinvestigatedinthispaper.Allofthetested15ETstrainsexpressedmannoseresistanthemaggluti2nation(MRHA)againstsheeperythrocytes.ET99agglutinatederythrocyteswhichcouldnotbeinhibitedbyD2mannose,sucroseorglucose.Thehemagglutinationofthisbacteriumwerepartiallyinhibitedbytrypsin,formaldehydeorglutaraldehyde.TheadhesionofET99toHEp22cellswerepartiallyinhibitedbypretreatmentofET99orHEp22cellmonolayerswithtrypsin,formaldehydeorglutaraldehyde.WhenET99wastreatedbyhy2drochloricacid,theamountofadhesivebacteriadecreased.D2mannose,sucroseorglucosecouldnotinhibitET99adhesion,butpurifiedflagellinofET99coulddo.ItwassuggestedthattheadhesinofETwasproteinaceousflag2ellum.Keywords　Edwardsiellatarda;celladhesion;hemagglutination

迟缓爱德华氏菌(Edwardsiellatarda,ET)能引起人和多种动物的肠道感染[1]。随着鳗、鳖等名特水产品种在中国的广泛养殖,爱德华氏菌败血症的危害愈显突出。然而关于其致病机理的研究,尚处于起步阶段。虽然近来有人提出溶血素是其致病因子,但未涉及粘附特性。本试验通过细胞模型,初步研究了ET的粘附特性,旨在为揭示其粘附本质和致病机

Ξ江苏省九五重点攻关项目(BE96427)收稿日期:1996211207

© 1994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net理积累资料。1　材料和方法111　细菌菌株15株迟缓爱德华氏菌菌株中,除99号模式菌株(ET99)系从德国菌种收藏中心引进

外,其余均为国内临床分离菌株,其中人源菌株1株(115),鳖源菌株5株(121,122,123,

753,756),其他8株为鳗源菌株(表1)。

112　ET99菌株鞭毛及外膜蛋白的提纯按Ibrahim等方法[2]提纯ET99菌株的鞭毛,按Filip等方法[3]提纯ET99菌株的外膜蛋白,并进行SDS2PAGE分析。113　血凝特性分析11311　血凝试验　参照Janda等方法[3]进行。将试验菌株接种于营养肉汤,37℃摇床培

养24h;用PBS充分洗涤菌体,悬浮,稀释成10

9

CFU/ml菌液;绵羊红细胞经PBS洗涤后,

配成终浓度为3%的悬液;将菌体悬液与等体积红细胞混匀,置载玻片上,轻轻晃动2～10

min,观察结果。设PBS为阴性对照。另取上述纯化的ET99菌株的鞭毛及外膜蛋白,质量浓度均为1mg/ml,按上法作血凝试验。11312　血凝抑制试验　参照Wong等方法[4]进行。

1131211　糖抑制试验　用PBS分别配制50mmol/L甘露糖、50mmol/L蔗糖、50mmol/L葡萄糖溶液。ET99株经细菌培养、离心、洗涤后,分别用糖溶液悬浮菌体制成悬液,再进行血凝试验。用PBS作阴性对照。1131212　化学试剂或酶处理ET99株对血凝的影响　分别用100μg/ml胰蛋白酶、φ=1%甲醛、φ=215%戊二醛于37℃处理ET99菌体,时间分别是10,30,30min。离心,收集菌体,经PBS充分洗涤后,悬浮、稀释成10

9

CFU/ml菌液,再进行血凝试验。

114　HEp22细胞粘附分析参照Geme等的方法[3]进行。11411　细菌培养　所有菌株均在营养肉汤中37℃培养12h。离心,收集菌体,PBS洗涤、悬浮并稀释成10

7

CFU/ml菌液。

11412　细胞培养　HEp22细胞培养在24孔板中,长成单层,用前24h换上不含抗生素的营养液。11413　粘附试验　用PBS洗涤细胞单层3次,每孔加100μl菌液,接种量达到106CFU/孔,37℃、φ=5%CO2培养90min;弃培养液,PBS洗涤5次;用细胞消化液(500mg/L胰蛋白酶,015mmol/LEDTA)消化,直至细胞脱下;混匀,取溶液经系列稀释,接种细菌培养基平板,37℃培养48h,记录生长的菌落数,再折算成每孔所粘附的细菌数。115　化学试剂或酶处理ET99菌体对细菌粘附的影响分别用100μg/ml胰蛋白酶、φ=1%甲醛、φ=215%戊二醛及0.05mol/L盐酸处理ET99菌体,37℃,处理时间除胰蛋白酶10min外,其余均为30min。菌体经PBS充分洗涤,悬浮并稀释成所需菌液,进行粘附分析。用PBS配制50mmol/L甘露糖、50mmol/L蔗糖、50mmol/L葡萄糖溶液。ET99菌株经培养、离心、PBS洗涤后,用糖溶液悬浮并稀释菌

88南京农业大学学报20卷

© 1994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net体,制成菌液,进行粘附分析。116　化学试剂或酶处理细胞对细菌粘附的影响分别用100μg/ml胰蛋白酶、φ=1%甲醛、φ=215%戊二醛处理HEp22细胞单层,37

℃,处理时间分别为10,15,15min。用PBS充分洗涤单层,进行粘附分析。117　鞭毛及外膜蛋白对细菌粘附的抑制作用分别用1mg/mlET99菌株的鞭毛或外膜蛋白处理HEp22细胞单层,37℃,30min。PBS洗涤3次,进行粘附分析。118　电镜观察取提纯的ET99菌株鞭毛溶液(1mg/ml),滴于铜网上,经负染、干燥,用JEM2100XC透射电镜观察。ET99菌株的粘附试验完成后,用φ=215%戊二醛固定细胞,制片,金属镀膜,

扫描电镜观察。

2　结　果

图1　ET99鞭毛的电镜观察 Fig.1　Electronmicrographofpurified

flagellinofET99

211　鞭毛及外膜蛋白的提纯SDS2PAGE分析表明,ET99菌株经提纯的鞭毛蛋白在凝胶上显示一条电泳带,相对分子质量为44000。外膜蛋白显示出5条带,主带相对分子质量为35000。鞭毛经负染,显示出均一的管状结构(图1)。212　细菌的血凝特性分析血凝试验分析表明,15株ET都凝集绵羊红细胞,且不能被甘露糖抑制。ET99的血凝特性亦不能被蔗糖、葡萄糖抑制。用甲醛、戊二醛或胰蛋白酶处理ET99时,其血凝特性丧失。提纯的ET99鞭毛及外膜蛋白均不能凝集绵羊红细胞。213　细菌的细胞粘附在15株ET中,有10株细菌粘附HEp22细胞(表1)。表1　ET菌株的HEp22细胞粘附Table1　AdhesionofETstrainstoHEp22cells

菌株Strain粘附菌数AdhesivebacteriaCFU/cell结　果Result菌株Strain粘附菌数AdhesivebacteriaCFU/cell结　果Result

9923.67±3.51+20319.00±5.29+11520.00±2.65+20518.67±3.06+2220.67±4.16+7510-12119.00±5.00+M82.33±1.53-12215.33±3.06+M100.33±0.58-12319.67±4.04+M111.33±2.31-75315.67±3.21+D62.00±2.65-75622.33±3.79+

983期欧阳志明等:迟缓爱德华氏菌的粘附特性

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大肠埃希氏菌菌落特征

大肠埃希氏菌菌落特征

大肠埃希氏菌菌落特征大肠埃希氏菌是一种常见的细菌，存在于人体肠道、土壤、水体等多种环境中。

虽然大肠埃希氏菌在人类的肠道中是正常的共生菌群之一，但某些菌株会引起人类疾病。

因此，了解大肠埃希氏菌的特征对于预防和控制相关疾病具有重要意义。

一、形态特征大肠埃希氏菌是革兰氏阴性杆菌，细胞大小为0.5-1.5μm×1.0-6.0μm，呈杆状或梭形。

大肠埃希氏菌细胞表面有许多鞭毛和荚膜，具有运动能力。

二、营养需求大肠埃希氏菌属于厭氧性生物，但在寡营养条件下也能进行无氧呼吸。

它可以利用葡萄糖、果糖等单糖类物质作为碳源，并需要含有硫酸盐和铵盐等无机盐的培养基。

此外，它还需要一定量的水分和适当的温度来生长。

三、菌落特征1. 形态特征大肠埃希氏菌在普通琼脂培养基上形成的菌落呈灰白色，边缘光滑，表面平整。

在MacConkey琼脂培养基上形成的菌落呈粉红色，边缘光滑，表面平整。

2. 大小特征大肠埃希氏菌在琼脂平板上的菌落大小一般为1-2mm左右。

3. 生长速度大肠埃希氏菌在适宜环境下生长迅速，通常在24-48小时内就能形成可见的单个或多个菌落。

四、生物学特性1. 运动性大肠埃希氏菌具有鞭毛和荚膜，在液体培养基中可以活动。

通过运动能力，它可以快速定位到适宜生长环境中，并从不适宜环境中逃离。

2. 毒力因子某些大肠杆菌株可以产生毒素，并引起人类疾病。

这些毒素包括Shiga毒素、血凝素等。

其中，Shiga毒素是导致出血性大肠杆菌感染的主要毒力因子之一。

3. 抗生素耐药性近年来，由于滥用抗生素等原因，某些大肠杆菌株已经出现了多重耐药现象。

这些耐药菌株对于治疗相关疾病造成了较大的困难。

五、总结大肠埃希氏菌是一种常见的细菌，在人类肠道中是正常的共生菌群之一。

但某些菌株会引起人类疾病。

了解大肠埃希氏菌的形态特征、营养需求、菌落特征、生物学特性等方面的信息，对于预防和控制相关疾病具有重要意义。

不同消毒方法对变形链球菌在牙本质片上黏附的影响

不同消毒方法对变形链球菌在牙本质片上黏附的影响

不同消毒方法对变形链球菌在牙本质片上黏附的影响苗燕;王宏峰;郝玉庆【摘要】目的比较3种消毒方法对变形链球菌(S.mutans)在人牙本质片上黏附的影响,为牙体标本消毒提供参考.方法制备人牙本质片60个,随机均分为3组,每组20个,采用不同的方法消毒.第1组:高压蒸汽灭菌30 min;第2组:10％福尔马林溶液浸泡1周;第3组:3％过氧乙酸溶液浸泡1周.将不同消毒方法的牙本质片与S.mutans 进行体外黏附实验,采用扫描电子显微镜(SEM)观察牙本质片表面形态变化及S.mutans黏附量多少,并采用菌落形成单位计数法(CFU)计数S.mutans在不同消毒方法的牙本质表面的黏附量,用SPSS 13.0软件对实验结果进行统计学分析.结果不同消毒方法的牙本质片在电子显微镜下表面形态无明显变化,SEM显示S.mutans在三组牙本质片上黏附变化比较,差异无统计学意义(F=3.21,P＞0.05),CFU显示S.mutans培养后3组黏附差异无统计学意义(F=3.29,P＞ 0.05).结论 3种消毒方法对体外研究细菌黏附于牙本质片影响甚微,目前高压蒸汽灭菌法简单、可靠、易于操作,应作为消毒方法的首选.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2015(012)009【总页数】4页(P114-117)【关键词】变形链球茵;黏附;消毒;牙本质片【作者】苗燕;王宏峰;郝玉庆【作者单位】郑州市口腔医院牙体牙髓科,河南郑州450052;郑州市口腔医院牙体牙髓科,河南郑州450052;四川大学口腔疾病研究国家重点实验室,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】R187龋病是发生于牙体硬组织，多因素影响下以细菌感染为主的慢性感染性疾病，龋病的始动因子是细菌在牙面黏附、定植，分泌酸性物质导致无机物脱矿及有机物崩解[1]。

变形链球菌（Streptococci mutans，S.mutans）是致龋菌中的优势菌，与龋病的关系最为密切[2]。

大学微生物学最全知识点总结

大学微生物学最全知识点总结

第一章1、G+、G-菌结构特点、细胞壁区别G+细胞壁：肽聚糖（含量高）、磷壁酸（含量较高）、一般无类脂质磷壁酸功能：①加固细胞壁②带负电荷③储藏磷元素④调节细胞壁增长⑤形成表面抗原⑥形成噬菌体吸附的位点G-细胞壁：肽聚糖（含量低）、无磷壁酸、类脂质（含量较高）、蛋白质G-细胞壁结构：外膜（脂多糖、磷脂、脂蛋白）、肽聚糖、周质空间脂多糖功能：①是G-细菌内毒素的物质基础②吸附Mg2+、Ca2+等阳离子提高细胞壁稳定性③决定G-细菌表面抗原决定簇的多样性④对细胞起保护作用G+肽聚糖合成2、缺壁细菌是什么？自发缺壁突变：L型细菌人工方法去壁：原生质体、球状体自然界长期进化形成：支原体3、内含物是什么（PHB、异染粒等）内含物指细胞质内一些颗粒状构造，主要是核糖体、储藏性颗粒、质粒等储藏性颗粒：PHB颗粒：储藏碳源、能源，降低细胞内渗透压异染粒：储藏磷元素和能量，降低渗透压羧酶体：CO2固定中起关键作用气泡：吸收空气，空气中的氧气可供代谢需要4、细菌各特殊结构的功能？糖被：保护作用（抵御干燥、吞噬细胞、有毒化合物）、黏附作用、贮藏养料鞭毛（基体、鞭毛钩、鞭毛丝）：通过旋转推动细菌运动趋性：生物对环境中不同因子的应答运动，如趋化性、趋光性菌毛：G-致病菌较多，借助菌毛把它们牢固地黏附于宿主上，进一步定植和致病性菌毛：将遗传物质从一个细菌转移到另一个细菌芽孢：在细菌地生长发育后期，形成的壁厚、抗逆性休眠体特性：抗热、抗辐射、抗化学药物、抗静压、抗紫外线、休眠芽孢抗热机制：渗透调节皮层膨胀学说芽孢衣对于多价阳离子和水分的渗透性差，皮层的离子强度高，使皮层有极高的渗透压去夺取核心部分的水分。

造成皮层的充分膨胀，而核心部分却高度失水，产生极强的耐热性。

5、放线菌细胞形态？繁殖方式？生存环境？人类关系？细胞形态：有发育良好的分枝状菌丝体，有基内菌丝、气生菌丝、孢子丝繁殖方式：无性孢子：分生孢子（凝缩分裂、横隔分裂）、孢囊孢子菌丝断裂生存环境：含水量较低、有机物丰富、呈微碱性的土壤环境中人类关系：放线菌可生产绝大多数常用的抗生素（除青霉素、头孢）、酶类（蛋白酶等）、维生素（B12）6、蓝细菌特殊结构和功能？类囊体：含叶绿素a、藻红素等光合色素，光合作用场所异形胞：型大、壁厚，专一性固氮。

多粘类芽孢杆菌 (1)

多粘类芽孢杆菌 (1)

多粘类芽孢杆菌1.基本特性1.1中文通用名称：多粘类芽孢杆菌1.2英文通用名称（或拉丁名称）：Paenibacillus polymyxa1.3毒性：低毒1.4应用作物：棉花、玉米、水稻、花生、马铃薯、黄瓜、青椒1.5防治对象：棉花黄萎、黑根腐、炭疽病、赤霉病；玉米全蚀病；水稻白叶枯病；花生青枯病；马铃薯软腐病；黄瓜角斑；青椒疮痂1.6生防特点：多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)对植物黄萎病、鹰嘴豆枯萎病、油菜腐烂病、黑松根腐病等多种植物病害均具有一定的控制作用。

美国环境保护署(EPA)已将其列为可商业上应用的微生物种类之一。

无论是采用HY96-2（P. polymyxa）发酵液，还是由HY96-2制成的细粒剂(KDLD)，在温室内和田间都取得了稳定的防治效果，并且KDLD细粒剂在田间表现的效果更为突出。

2.定性鉴别试验2.1菌株的形态及培养特征类芽孢杆菌属。

菌株接种于 LB固体培养基上，28ºC培养 18～24 h，观察其菌落形态。

利用光学显微镜观察在LB培养基上生长菌体形状和革兰氏染色情况，利用电镜观察菌体大小、荚膜和鞭毛着生情况。

菌体大小为(0．6～ 0．8) μm ×(2．0～5．0) μm，革兰氏阳性、阴性或可变，兼性厌氧，杆状，产芽孢，芽孢椭圆形，端生，膨大，有荚膜，鞭毛侧生或周生。

在 PDA平板上，菌落较小、白色或淡黄色、圆形、菌面稍凸或不凸起，边缘整齐，表面有光泽、光滑、湿润、半透明到不透明；在肉汁琼脂培养基上生长菌落较薄，无菌膜，液体澄清；在斜面培养基上生长良好，菌苔线状、扁平，表面光滑、半透明。

最适合生长温度30-35 ºC表1 菌株在不同培养基中的培养特征（30ºC ，2天）培养特性LB琼脂营养琼脂酵母浸膏琼脂牛肉汁琼脂菌落颜色乳白色杏仁白色淡黄白色灰白色菌落形状湿润光滑粘稠状有小突起，粘性湿润光滑菌落直径mm 2.5 2.8 3 2.62.2生理生化特征由表2可知，菌株的接触酶、厌氧生长、酪朊水解、淀粉水解、V—P反应和硝酸盐还原均为阳性；氧化酶、酪氨酸水解、脲酶、卵黄卵磷脂水解、吲哚产生、柠檬酸盐利用均为阴性；可利用D葡萄糖、D一木糖、D一甘露醇、甘油，且均产酸、产气。