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高效液相色谱仪的四种检测方法及计算高效液相色谱仪（HPLC）在化学、生物学、制药、食品等领域都有广泛应用，其检测方法多种多样，以下将详细介绍四种常用的检测方法及其计算方式。
一、紫外-可见光检测法 (UV-Vis)紫外-可见光检测法是最常用的HPLC检测方法。
在此方法中，样品组分在紫外或可见光区域有吸收，因此可以被检测。
计算方法一般采用峰面积或峰高法定量。
峰面积法比峰高法更为准确，因为它同时考虑了峰的高度和宽度。
在计算时，首先需要获得标准品的校正曲线，然后根据未知样品的峰面积或峰高在校正曲线上找到对应的浓度。
二、荧光检测法 (Fluorescence)荧光检测法的灵敏度通常比紫外-可见光检测法更高，但并非所有化合物都能产生荧光。
在这种方法中，样品组分被激发光照射后发出荧光，荧光强度与组分浓度成正比。
计算方式与紫外-可见光检测法类似，也是通过校正曲线进行定量。
三、电化学检测法 (Electrochemical Detection)电化学检测法通常用于检测具有电化学活性的化合物，如许多药物和神经递质。
它可以在没有光学性质的情况下对物质进行检测，提高了HPLC的应用范围。
常见的电化学检测方法包括安培检测法和电导检测法。
定量计算通常基于法拉第定律，即电流与通过电解池的电荷量成正比。
四、质谱检测法 (Mass Spectrometry)质谱检测法是与HPLC连用的一种高级检测方法，可以提供待测物质的分子量信息，从而确定其化学结构。
在此方法中，HPLC分离后的组分直接进入质谱仪进行检测。
定量计算通常使用内标法或外标法，需要对待测物质进行同位素标记或使用已知量的内标物质。
此外，还可以使用多反应监测模式（MRM）进行更准确的定量。
以上四种方法各有优缺点，应根据具体的应用需求和样品性质选择合适的方法进行检测和计算。
同时，为了获得准确可靠的结果，还需要对HPLC系统进行适当的维护和校准。
测定洛芬待因缓释片含量的高效液相色谱条件的优化
成霄;顾小燕;陈柯
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2015(000)004
【摘要】目的：对洛芬待因缓释片含量测定方法的色谱条件进行优化。
方法在其他液相色谱条件相同的情况下，采用不同pH的流动相进行实验比较。
结果经与《国家药品标准》提供的方法比较，在pH为6.4条件下，磷酸可待因、布洛芬可以与相邻峰得到较好的分离。
结论优化的色谱系统适合用于洛芬待因缓释片的含量测定。
【总页数】2页(P527-528)
【作者】成霄;顾小燕;陈柯
【作者单位】浙江省湖州市食品药品检验研究院化学室，湖州 313000;浙江省湖州市食品药品检验研究院化学室，湖州 313000;浙江省湖州市食品药品检验研究院化学室，湖州 313000
【正文语种】中文
【中图分类】R971.1;R927.2
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定酒石酸美托洛尔缓释片中有关物质含量 [J], 马凯;杨景生;黄顺旺;曹明成
2.高效液相色谱法测定枸橼酸他莫昔芬片中枸橼酸他莫昔芬的含量 [J], 秦后权
3.高效液相色谱法测定普拉洛芬滴眼液中普拉洛芬含量 [J], 赵大伟;王佩华
4.高效液相色谱法测定奥培米芬片中奥培米芬的含量 [J], 钟浩;陶庭先;吴俊;丁正霞;崔海鞠;章靖芳
5.HPLC法测定酮洛芬缓释片含量的优化条件研究 [J], 潘正斐;李艳
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高效液相色谱法对布洛芬片中布洛芬的含量测定分析
曲建国
【期刊名称】《中国现代药物应用》
【年(卷),期】2016(010)010
【摘要】目的研究高效液相色谱法对布洛芬片中布洛芬的含量测定分析.方法采用高效液相色谱法,利用安捷伦1200色谱系统进行处理,色谱柱为Ve-nusil MP18柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相则为甲醇-已腈-磷酸二氢钠溶液(0.02 mol/L),检测波长设定为263 nm,流速为1.0 ml/min.结果样品主峰的保留时间与标准对照品基本一致,布洛芬样品的平均回收率为99.61％.结论高效液相色谱法对布洛芬片含量进行测定,准确度较高、专属性强,能够满足对于布洛芬片品质控制的检测要求.
【总页数】2页(P285-286)
【作者】曲建国
【作者单位】110036 辽宁省药品检验检测院检验一室
【正文语种】中文
【相关文献】
1.布洛芬缓释片中布洛芬含量测定方法的优化 [J], 王博;吴杰连;吴明明
2.高效液相色谱法测定布洛芬片中布洛芬含量 [J], 郑静;陈德俊
3.高效液相色谱法测定布洛芬片中布洛芬的含量 [J], 彭婷婷;王卫华
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5.RP-HPLC法测定布洛芬片中布洛芬含量 [J], 庄连彬
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于25mL 量瓶中,加水溶解,定容。
精密称取醋酸地塞米松4.16mg 、雌三醇3.89mg,置于同一25mL 量瓶中,用甲醇溶解,定容。
分别精密吸取上述2种溶液各0.1,0.25,1,2,3,4,5mL ,置于同一10mL 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,配制成系列浓度溶液,在上述色谱条件下进样测定。
以峰面积为纵坐标(Y ),浓度为横坐标(X )进行线性回归,得盐酸环丙沙星的回归方程为Y =9.8924X -16.0486,r =0.9999;醋酸地塞米松的回归方程为Y =36.8673X +5.4933,r =0.9999;雌三醇的回归方程为Y =6.9251X +1.9379,r =0.9999。
结果表明:盐酸环丙沙星在15.97~798.4mg L -1、醋酸地塞米松在1.66~83.2mg L -1、雌三醇在1.56~77.8mg L -1范围内峰面积与浓度均呈良好线性关系。
2.5 精密度试验 取同一浓度对照品溶液,在上述色谱条件下连续测定6次。
盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松、雌三醇的RSD 分别为0.34%,0.76%,0.38%,表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验 取同一浓度对照品溶液,分别在0,2,4,6,8h 进样测定。
盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松、雌三醇的RSD 分别为1.08%,0.98%,0.74%。
表明供试品溶液至少在8h 内稳定。
2.7 重复性试验 取供试品溶液6份,照 2.1!项下的色谱条件进样,记录色谱图并计算含量。
结果盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松、雌三醇的平均RSD 分别为0.68%,0.63%,0.41%。
表明该方法测定复方雌三醇阴道生物黏附膜中3组分重复性良好。
2.8 加样回收率试验 取已知含量的药膜适量,分别精密加入盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松和雌三醇对照品,按样品测定方法处理,依法测定3种主要成分的含量,计算回收率,结果见表1。
表1 加样回收率试验结果(n =3)T ab 1 Results of the r eco very deter minatio n(n =3)药品名称样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/%平均回收率/%RSD /%盐酸环丙沙星28.4214.9643.1599.4740.4720.2960.3199.2699.670.5450.0125.1975.41100.28醋酸地塞米松3.111.584.6398.734.122.076.0798.0798.540.425.052.557.5198.82雌三醇3.121.624.6297.534.202.076.1798.5598.440.875.172.597.7099.232.9 样品测定 取面积为2cm ∀2cm 的药膜一张,按 2.2!项下方法制备成每1mL 含盐酸环丙沙星0.5mg 、醋酸地塞米松0.05mg 、雌三醇0.05mg 的溶液,在上述色谱条件下进样,记录色谱图;另取盐酸环丙沙星、醋酸地塞米松、雌三醇对照品,照 2.2!项下方法制成混合溶液,同法测定,按外标法以峰面积计算供试品中3种主药的含量。
高效液相法测定酮洛芬凝胶中的有关物质引言酮洛芬凝胶是一种常用的治疗肌肉疼痛和关节炎的外用药物，其有效成分是酮洛芬，具有镇痛、消炎和抗痉挛的功效。
为了保证酮洛芬凝胶的质量和安全性，需要对其中的有关物质进行准确测定。
高效液相法是一种常用的分离和测定化合物的方法，具有灵敏度高、分离效果好、操作简便等优点，因此被广泛应用于药品分析领域。
本文将介绍高效液相法测定酮洛芬凝胶中的有关物质的方法和步骤。
一、实验仪器和试剂实验仪器主要包括高效液相色谱仪、分光光度计、天平等。
实验试剂主要包括乙腈、甲醇、异丙醇、磷酸溶液、酸和碱等。
二、实验步骤1. 样品的制备取适量的酮洛芬凝胶样品，精密称重，加入10倍体积的异丙醇，并用超声波处理30分钟。
然后采用0.45μm的微孔滤膜进行过滤，去除悬浮固体物质。
2. 色谱条件的选择色谱柱采用C18反相色谱柱，流动相为甲醇-0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲溶液(40:60)，流速1.0mL/min，检测波长为254nm。
3. 样品的分析取适量的酮洛芬凝胶样品，精密称重，加入乙腈进行提取。
提取液用过滤膜过滤，取得样品溶液。
然后用高效液相色谱仪进行定量分析，得到含量结果。
4. 方法的验证对该分析方法进行验证，主要包括线性范围、精密度、重复性、稳定性等方面的验证。
验证结果符合要求即可进行正式分析。
5. 结果的分析和报告根据测定结果，计算出凝胶中有关物质的含量及其相对标准偏差等数据，并撰写分析报告。
三、结果分析利用高效液相法测定酮洛芬凝胶中有关物质的含量，可以得到准确的结果。
通过对一批样品进行测试，我们可以得到该批次产品中有关物质的平均含量及其变异系数等数据。
并且，通过方法的验证，可以确认该分析方法具有良好的准确性和重复性，可以满足对酮洛芬凝胶中有关物质的测定要求。
结论高效液相法是一种准确、灵敏的测定酮洛芬凝胶中有关物质的方法，通过该方法可以得到准确的含量结果，保证了酮洛芬凝胶的质量和安全性。
HPLC法测定布洛芬片含量设计方案一、设计背景布洛芬是一种比较常用的非甾体类的抗炎药，是20世纪50年代和60年代，是开发治疗类风湿关节炎“超级阿司匹林”的过程中长期研究的产物，具有缓解各种慢性关节炎的症状等，布洛芬具有优异的消炎镇痛作用，其作用比阿司匹林更强，比其他药物更具有安全性，现如今布洛芬的合成方法也有许多种，在工艺生产过程中形式也各不相同。
通过查阅各种相关的文献，对布洛芬进行含量测定，保证其药品质量的安全性、可靠性、准确性，提供更有效的依据，为工业化生产检测需要设计出简便、科学、易懂、适用性强的含量测定法案。
图1 布洛芬化学结构二、设计依据布洛芬片中的主要成分是布洛芬，其具有抗炎、镇痛和解热作用，《中国药典》（2020年版第二部）采用酸碱滴定法测定布洛芬含量，但由于消耗时间长、误差较大，难以反应实验的真实质量，为进一步完善布洛芬质量控制方法，故使用HPLC法测定本制剂中布洛芬的含量，满足对布洛芬片质量控制的检测要求，达到工业生产的质量标准。
三、设计方案(一) 仪器和试药1.仪器LC-10ATvp高效液相色谱仪、紫外检测仪、色谱柱、sartorius赛多利斯BSA224S电子分析天平。
2.试剂试药（1）标准对照品：购自中国药品生物制品检定院，含量为98．3％的布洛芬片。
（2）检测样品：送检布洛芬片由实习单位提供。
（3）试剂：甲醇、乙腈为色谱纯, 其它试药、试剂均为分析纯, 水为超纯水。
（二）色谱条件（1）色谱柱：Ve—nusil MP18柱 (4．6 mm ×250 mm ，5μm )。
（2）流动相：甲醇一已腈一磷酸二氢钠溶液(0．02 mol／L)(50 ：25 ：25)。
（3）检测波长：263 nm ，（4）流速：1.0 m l／m in。
（5）柱温：30℃。
（三）溶液的制备1.供试品溶液的制备取布洛芬样品20片，进行精密称重。
将所取样品研细，精密称取适量 (约相当于布洛芬 100 mg)，放置于容量为200 ml的容量瓶中，加入甲醇30 ml，超声15 min,再加甲醇稀释至容量瓶刻度线，摇匀滤过，即得供试品溶液。
附件食品中那非类物质的测定（BJS 201805）1 范围本标准规定了食品（含保健食品）基质中90种那非类物质的超高效液相色谱-串联质谱测定方法。
标准中方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的定性和定量测定。
标准中方法二超高效液相色谱-串联高分辨质谱法，适用于饮料、果冻、蛋白粉、牡蛎粉、饼干、糖果、酒类及咖啡等食品（含与上述基质相同的保健食品及片剂、胶囊、软胶囊等剂型）中90种那非类物质的筛查和定性确证。
方法一超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法2原理试样经甲醇超声提取，过滤后，滤液供超高效液相色谱—三重四极杆串联质谱仪测定，外标法定量。
3试剂和材料注：水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH）：质谱级。
3.1.2 甲酸（HCOOH）：质谱级。
3.1.3 乙酸乙酯（C4H8O2）：分析纯。
3.1.4 盐酸（HCl）：分析纯。
3.2 试剂配制3.2.1 0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（4.3）过滤后备用。
3.2.2 盐酸甲醇溶液（1+99）：取盐酸1mL用甲醇稀释至100mL。
3.2.3 甲醇水溶液（1+1）：将甲醇与水等体积混合。
3.3 标准品西地那非等90种物质标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.1，纯度≥98%。
3.4 标准溶液配制—1 —3.4.1标准储备液（200 μg/mL）：分别精密称取Lodenafil carbonate（46罗地那非碳酸酯）、Sildenafil dimer impurity（63西地那非二聚体杂质）、Vardenafil dimer（69伐地那非二聚体）标准品（3.3）各10mg，用盐酸甲醇溶液（1+99）溶解并稀释至50mL，摇匀；分别精密称取其余87种标准品（3.3）各10 mg，用甲醇溶解并稀释至50mL，摇匀，制成浓度为200 μg/mL标准储备液。
