常用标本制备技术

病理学实验技术病理学实验技术是一门关注疾病诊断的学科，是疾病诊断的基础。

它涉及到多种实验技术，如组织学、免疫组织化学、分子生物学等。

这些技术都是通过研究组织和细胞的形态学、生物化学及分子遗传学特征，来揭示疾病的发生和发展。

一、组织学技术1. 组织标本的制备组织标本制备是病理学诊断的基础。

在组织标本制备的过程中，病理学家需要对组织进行取材、固定、脱水、包埋、切片、染色等多个步骤。

其中，固定至关重要，因为只有对组织进行固定，才能保持组织在形态、结构和染色上的稳定性。

2. 组织切片的制备组织切片制备是组织学技术中的另一个关键步骤。

在这个过程中，病理学家会将固定的组织样本切成薄片，使其可以在显微镜下进行观察。

需要注意的是，切片必须足够薄，通常在3-4 μm之间，以确保显微镜下的观察到位。

3. 组织染色技术组织染色技术是通过对组织进行染色来增加组织样本的对比度，以便观察细胞和组织之间的区别。

在组织染色技术中，常用的染色剂包括血液学染色剂，如H&E染色剂及Immunohistochemistry染色技术等。

其中，Immunohistochemistry染色技术可根据抗原-抗体之间的特异性来判断组织和细胞是否存在特定的蛋白质。

二、免疫组织化学技术免疫组织化学技术是利用单克隆或多克隆抗体专门识别和检测组织中存在的化学物质的技术。

这些物质包括细胞表面受体、cytokines、细胞分子、肿瘤抗原等。

该技术可对某种特定的抗原进行定量和定位，从而为诊断和治疗疾病提供帮助。

三、分子生物学技术分子生物学技术是一种应用分子生物学方法和技术来研究疾病发生和发展的学科。

该技术通过研究DNA、RNA和蛋白质的结构、功能和相互作用，来了解疾病的致病机制，并为疾病的诊断和治疗提供更好的方法。

在分子生物学技术中，PCR技术是一种常用的方法。

PCR技术能够通过对DNA进行放大，从而扩增少量DNA，使得对DNA的分析得以进行。

结论综上所述，病理学实验技术涉及到多种技术，包括组织学技术、免疫组织化学技术和分子生物学技术。

病理细胞蜡块制备过程
蜡块制备是一种十分常见的医学技术，用于研究病理细胞。

通过蜡块制备，能够更好地检测病理细胞，以及诊断疾病。

蜡块制备过程中，通常需要经历脱水、脱油、灭菌和摄影等步骤。

首先，需要将取得的病理细胞标本置于高压脱水机中，施以压力，使其中的水分溶解。

然后，将脱水后的标本置于脱油机中，施以较高的温度和压力，使其中的油脂溶解，并渗透到标本中。

随后，将脱油后的标本灭菌。

一般情况下，会使用一种叫做10%的碱性溶液，温度约为90-95摄氏度，灭菌时间大约为10分钟。

最后，将灭菌后的标本放入蜡块机中，使用热水蒸气加热，让其中的蜡液融化，然后将其注入标本中，并使其冷却，完成蜡块的制作。

蜡块制备完成后，可以通过仪器观察蜡块，检测病理细胞。

例如，通过病理显微镜，可以观察细胞的形态、大小、结构等，以及分布情况。

另外，还可以通过免疫组化法，检测定性指标，以及检测细胞的病理状态，如炎症、肿瘤等。

此外，蜡块制备的样品也可以用于其它的检测，如基因测序、蛋白质电泳等。

通过蜡块制备，可以较好地检测病理细胞，以了解疾病的发病机制，以及发展有效的治疗方法。

因此，蜡块制备作为一种重要的技术，在临床诊断、科学研究中都发挥了重要作用。

总之，蜡块制备是一种常用的技术，用于研究病理细胞，能够更好地检测、诊断病理疾病。

整个制备过程一般包括脱水、脱油、灭菌和摄影等步骤，具体操作要求可参考相关技术指南。

蜡块制备
可以为临床诊断、科学研究提供有效信息，从而在疾病的预防和治疗中发挥重要作用。

玻片标本的制备叶蟠体型微小，为了正确识别种类，需要制成整体装片标本，在高倍显微镜下观察其分类特征。

因此，制作清晰透明和形态完好的玻片标本是十分重要的。

制备叶瞒封片标本常用水溶性的封固液，兹介绍二种常用配方:1)霍氏封固液(Hoyer's medium)：阿拉伯胶30g水合三氯乙醛200g甘油20g蒸馏水50ml。

配制时，按上述比例使阿拉伯胶溶于蒸馏水中，至完全溶解后，置于40-50℃的水浴中加热，加入水合三氯乙醛，搅拌至溶解，加人甘油，最后用抽气漏斗过滤。

该种封片剂为目前螨类和微小昆虫所常使用的配方，优点是螨体透明迅速、简便易行，烘烤后，胶液即干硬而标本不变形;不足之处是放置数年后易出现龟裂，空气湿度大时，胶液极易还软。

2)埃蔡氏封固液(Heize medium)：聚乙烯醇10g蒸馏水40-60ml乳酸(85%-92%)35ml甘油10ml酚水溶液(1.5%)25ml水合三氯乙醛20g配制时，注水至聚乙烯醇粉末中，置于100’C的水浴上加热，搅拌至完全溶解，再加人乳酸和甘油，搅拌均匀，冷却至微温后，加人酚水溶液和水合三氮乙醛，最后过滤。

该种封片剂可免除龟裂等弊病，缺点是透明较慢或不完全。

制备封片标本时，先取一滴胶液置于洁净的载玻片中央，用吸管吸取保存液中的标本至滤纸上，用蘸有胶液的解剖针，从滤纸上迅速粘取标本至胶滴中，也可直接取活螨于胶滴中，盖上盖玻片。

然后放于酒精灯火焰上加热至沸腾，螨体即伸展透明。

玻片注明编号，置于40-50℃温箱烘烤。

待胶液干燥后，于盖玻片左侧粘贴记录标签，注明编号、寄主植物、采集时间、地点、采集人;右侧粘贴定名标签，注明该种的学名、中名及定名人。

为使鉴定标本所用的各分类特征明显可见，制作玻片标本时，宜使虫体有背、腹或侧面等各种姿势。

爪及爪间突是分属的重要特征，倘若标本不洁净则影响观察。

为此，可在滴有胶液的载玻片上清理后，再用另一玻片封装。

雄螨的外生殖器—阳具，是某些属重要的分类特征。

第一部分人类染色体研究的实验室建设一、实验室要求1、准备室（约30平方米）：供清洗玻璃仪器、配制试剂仪器包装消毒及制片场所，还必需配置耐酸碱水池、实验操作台、药橱等设施。

并能合理放置冰箱、电热干燥箱、离心机、纯水器、消毒锅、天平等仪器，以方便使用。

2、无菌室（约25平方米）：用作细胞的接种培养、配备培养基。

分为更衣室（约4平方米）、缓冲室（约6平方米）、接种室（约15平方米）。

配备空调机、传递窗、离心机、倒置显微镜、超净工作台、臭氧发生器或紫外灯、培养箱等设备仪器。

3、分析室（约15平方米）：为观察分析核型、整理资料场所。

配备高清晰度带照相装置的显微镜，电脑、打印机、办公桌等。

二、设备仪器（一）仪器1、超净工作台一台2、光学显微镜二台（可以安装染色体软件分析系统）倒置显微镜与带照相装置的正立显微镜各一台。

倒置显微镜用作细胞培养；正立显微镜用作核型分析，有条件的单位可配备染色体分析软件、电脑、打印机等。

3、隔水式恒温培养箱一台开展产前检查的单位，最好购买二氧化碳培养箱。

4、电热干燥箱一台5、冰箱二台：普通冰箱和低温冰箱各一台6、酸度计一台（可略）7、纯水器（电阻率18兆欧姆）一台；（可略）8、高压灭菌锅一台（可略）9、电热磁力搅拌器一台（可略）10、真空泵（无油）一台（可略）11、电子天平二台（万分之一天平与普通天平各一台）12、水平式离心机二台转速0-4000转/分，10毫升/管，大容量与小容量各一台。

大容量的供制片用，小容量的放置无菌室供细胞培养用。

13、可调移液器若干支：规格从5-5000微升若干支14、超声波清洗器一台（可略）15、水浴箱（0-100℃可调）（二）玻璃器皿与耗材1、培养瓶：15毫升链霉素瓶，25毫升小方瓶（建议采用一次性培养瓶）。

2、刻度离心管（10毫升）50支3、量筒（10-1000毫升）：各种规格各一个。

4、不锈钢滤器（各种规格各一个）及滤膜（孔径中0.25微米）一盒5、注射器（1-20毫升）若干6、盐水瓶（100-500毫升）若干7、试剂瓶（磨口）10个8、蒸馏水瓶（3万或5万毫升）2个9、染色缸1个10、研钵1个11、酒精灯2盏12、滴管（带吸头）50支13、载玻片若干14、试管架和离心管架各2个15、各种镊子与剪刀若干16、铝饭盒（供盛培养瓶滴管等器械消毒时使用）17、烧杯（容量50-2000毫升）各一个18、抽滤瓶（1000-2000毫升）一个19、各种规格的可调移液器吸头若干20、载波片盒（50-100片）若干* 玻璃器材的材质应采用中性硬质玻璃或硼硅玻璃三、常用药品及试剂1、培养基（RPMI 1640、HamF10）2、植物凝集素（phytohemagglutinin简称PHA）3、肝素钠（抗凝剂，医用级）4、血清（小牛血清、胎牛血清）5、抗菌素（青霉素、链霉素）医用级6、秋水仙素（秋水仙碱）7、氧化钾（分析纯）8、碳酸氢钠（分析纯）9、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠（分析纯）10、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，分析纯）11、三羧甲基氨基甲烷（Tris，分析纯）12、胰蛋白酶13、酚红14、姬姆沙染料（Giemsa）15、甲醇（分析纯）16、冰醋酸（冰乙酸）（分析纯）17、重酪酸钾（化学纯）18、浓硫酸（工业级）19、香柏油20、甘油（分析纯）21、乙醇（无水和纯度95%，化学纯）22、乙醚（无水，化学纯）23、生长因子（碱性成纤维细胞因子bFGF、表皮细胞生长因子EGF）24、氢氧化钠（分析纯）25、柠檬酸钠（分析纯）（注：达晖生物全套提供上述仪器和试剂产品，并提供完善的技术支持和服务）第二部各类器械清洗与常用试剂配置一、各类器械清洗处理1、清洗液配置清洗液配方方法：先将重酪酸钾溶于水中，再慢慢加入工业浓硫酸。

技能训练2 细菌标本片的制备和染色法一、目的要求：正确掌握细菌培养物涂片的制作和常用染色法二、设备材料病料、细菌培养物、接种环、玻片、酒精灯、染色缸、染色架、染色液等。

三、操作方法细菌标本片制作的基本步骤为：涂片或触片→干燥→固定→染色→镜检。

(一)细菌涂片的制备1．液体培养物及液体病料(1)涂片用接种环取一滴培养液或液体病料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层。

(2)干燥一般采用自然干燥，天气较冷时也可于酒精灯火焰上方30～40cm处适当加热干燥。

(3)固定分为火焰固定和化学固定两种。

火焰固定时，将干燥好的玻片涂面朝上，以其背面在酒精灯火焰上来回通过数次，略作加热，以不烫手背为度；化学固定时，可将干燥好的玻片浸入甲醇中2～3min后取出晾干，或在涂片上滴加数滴甲醇使其作用2～3min后自然挥发干燥。

此外，丙酮和酒精也可用作化学固定剂；作瑞特氏染色的涂片不需固定，因染色液中含有甲醇，有固定作用。

(4)染色根据不同的材料和菌种选择不同的染色法。

2．固体培养物用接种环取一滴生理盐水于玻片的中央→用接种环挑取一个菌落于生理盐水中混合→均匀地涂布成适当大小的薄层→干燥→固定→染色。

(二)细菌触片的制备将固体病料(病变组织)作无菌切开→用切面在玻片的中央接触一下或稍用力印压成一薄层→干燥→固定→染色。

(三)细菌的染色法1．单染色法又称简单染色法，即只应用一种染料进行染色的方法。

(1)美蓝染色法在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加适量的美蓝染色液1—2min后，水洗，干燥(吸水纸吸干或自然干燥)，镜检。

(2)瑞特氏染色法在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加瑞特氏染色液，为避免干燥，可适当多加一些，或视情况补充滴加，1—3min后再加与染液等量的中性蒸馏水或缓冲液，轻轻晃动玻片，使之与染色液混合均匀，再经3—5min后，直接用水冲洗，吸干或烘干后镜检。

也可在玻片上的涂抹处盖一适当大小的滤纸，然后再在滤纸上轻轻滴加瑞特氏染色液，至略浸过滤纸，视情况补充滴加，维持不干，3—5min后直接用水冲洗，吸干或烘干后镜检。

悬浮细胞扫描电镜的标本的制备
悬浮细胞扫描电镜的标本制备是一个关键的步骤，它需要精确
的操作和耐心。

首先，我们需要准备一个含有悬浮细胞的样品。

这
些悬浮细胞可以来自培养物中的细胞，或者从组织中分离出来。

接
下来，我们需要将这些悬浮细胞固定在一个适当的载玻片上。

固定
的方法通常包括用乙醛或氧化铂等化学物质进行固定，或者使用冷
冻固定技术。

固定后，样品需要进行脱水处理，通常使用乙醇浓度
逐渐升高的方法。

然后，样品需要被干燥，可以通过自然干燥或者
使用临界点干燥法。

接下来是金属涂覆，通常使用金属如金或铂进
行喷涂，以增加样品的导电性。

最后，样品可以被放入扫描电镜中
进行观察和成像。

在整个制备过程中，需要严格控制各个步骤的时
间和条件，以确保最终的标本能够展现出清晰的细胞结构和形态特征。

此外，在操作过程中需要注意安全，避免对人体和环境造成伤害。

总的来说，悬浮细胞扫描电镜的标本制备需要细致的操作和严
格的控制，以确保最终观察到的细胞结构和形态信息是准确可靠的。

昆虫标本的制备和保存技巧昆虫标本制备是保留昆虫种类、研究和展示的重要手段之一。

正确的制备和保存方法可以确保标本的完整性和长期保存。

以下是昆虫标本制备和保存的一些技巧。

一、昆虫标本制备技巧1. 选择合适的材料：标本制备中常用的材料包括酒精、甘油、草酸和硫酸等。

根据不同的昆虫种类和需要，选择合适的材料。

2. 杀灭昆虫：首先，将昆虫进行杀灭，常用的方法有用酒精浸泡或用草酸加水淹没法。

需要注意的是，在杀灭昆虫时要避免使用过强的草酸溶液，以免对昆虫造成损伤。

3. 软化和脱水：在杀灭昆虫后，利用酒精脱水和甘油软化，可以使昆虫的外部特征更加清晰。

将昆虫放置在逐渐浓度递增的酒精中，同时将酒精中的水分逐渐替代为甘油，使昆虫逐渐软化。

4. 固定和展翅：软化后的昆虫需要进行固定和展翅，以保持标本的形态。

固定可以使用昆虫专用的针封固定在昆虫专用的标本纸上，展翅则需要小心地用细针将昆虫的翅膀展开，并用细线固定。

5. 标注信息：在制备标本时，应在标本纸上标注必要的信息，例如昆虫的名称、生物学分类、采集地点、采集日期等。

这些信息对于后期研究和展示都非常重要。

二、昆虫标本保存技巧1. 干燥保存：制备完成后，标本需要进行干燥保存。

可以将标本放置在通风良好的干燥地方，或者利用干燥剂加速干燥过程。

在干燥保存时，应避免阳光直射和湿度过高的环境。

2. 定期检查：为了确保标本长时间保存，建议定期检查标本的状态。

检查是否有虫蛀、霉变和湿度过高等问题，及时处理和调整保存环境。

3. 进行鉴定和记录：标本保存期间，可以根据需要对标本进行鉴定，并记录相关信息。

这些信息可以用于后续的研究和资料整理。

4. 避免触碰：保存标本时应避免频繁触碰标本，以免对标本造成损害。

需要触碰时，应使用干燥的手套或工具。

总结：昆虫标本制备和保存技巧对于昆虫研究和展示具有重要意义。

正确的制备和保存方法可以保持标本的完整性和长期保存，为昆虫研究提供可靠的资源。

通过遵循上述技巧，我们可以制备出高质量的昆虫标本，并确保它们的保存和使用价值。

免疫荧光染色(多标)步骤免疫荧光染色(多标)是一种常用的实验技术，用于检测和定位细胞或组织中的特定抗原。

该技术利用抗体的高度特异性与宿主细胞或组织中的抗原相结合，并通过荧光标记的二抗进行可视化。

本文将详细介绍免疫荧光染色(多标)的步骤。

一、制备标本需要从细胞培养物或动物组织中制备标本。

对于细胞培养物，可以使用离心将细胞沉淀，然后用PBS洗涤细胞沉淀。

对于动物组织，需要将组织切片并固定。

二、抗原解剖将标本进行抗原解剖，即使得细胞或组织中的抗原能够与抗体结合。

抗原解剖的方法包括共价交联、乙醛固定和冷冻解剖等。

三、非特异性结合抑制为了减少非特异性结合，需要对标本进行非特异性结合抑制。

可以使用一些蛋白质，如牛血清白蛋白(BSA)或胎牛血清(TBS)，将标本进行封闭。

四、第一次抗体孵育将具有特异性的原抗体（第一抗体）加入到标本中，使其与抗原结合。

第一抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。

五、洗涤将标本进行洗涤，去除没有结合的第一抗体。

洗涤液可以使用PBS 或TBS缓冲液。

洗涤的次数取决于实验的要求，一般需要洗涤3-5次。

六、第二次抗体孵育加入与第一抗体来源不同物种的荧光标记的二抗（第二抗体），使其与第一抗体结合。

第二抗体可以选择不同的荧光染料，如荧光素或罗丹明。

七、洗涤将标本进行再次洗涤，去除没有结合的二抗。

同样使用PBS或TBS 缓冲液进行洗涤。

八、核染色为了观察细胞核的位置，可以使用荧光标记的DNA染料，如4',6-二硫化羟喜树碱(DAPI)进行核染色。

九、封片将标本封装在载玻片上，使用适当的封片剂固定标本。

同时，可以加入抗褪色剂以保持荧光的稳定性。

十、观察与分析使用荧光显微镜观察标本，并进行图像采集和分析。

可以使用图像处理软件对采集到的图像进行进一步的定量分析。

免疫荧光染色(多标)是一种重要的实验技术，在生物医学研究中有着广泛的应用。

通过该技术，可以对细胞或组织中的特定抗原进行定位和表达分析，为研究细胞功能和疾病机制提供关键信息。

人类染色体标本的制备与G显带核型分析报告概述核型分析是指通过对细胞的染色体观察，了解它们的数量、形态，从而判断个体的性别以及是否存在染色体异常。

本文将介绍人类染色体标本的制备方法以及采用G显带染色技术进行核型分析的过程和结果。

材料与方法标本制备：1.通过体内生长的细胞系培养得到细胞，并将它们发送至染色体形态捕获系统实验室。

2.将收到的细胞进行样品准备。

先加入均浆剂净水，并初次混合。

待与细胞量相等的5％高马尔谷酸(Na2HPO4)特性缓冲液和1％偏硫酸，最后混合。

3.轻轻转动管子，并且离开它说较长时间，使得细胞得以与溶液完全变淡。

4.通过四氯化碳进行固定，直至样品中的细胞结构都没有被损坏。

5.利用各种化学剂处理样本，以预处理出更好的结构。

G显带染色：1.将钟室内的标本压片，使细胞的核形成按制定的标准排序，并在有机玻璃片底部粘贴。

2.加入如下染料：a. Giemsa液：Giemsa指的是罗马帝国时期的波尔多区Giemsa教授。

G显带染色技术将溶液中的Giemsa染色质直到他们的总量到达6倍于DNA总量。

Giemsa染料在滴定时间内还要使染色质呈现某些将染色质透过玻片清楚可见的颜色。

b. Sorenson’s Buffer：Sørensen’s缓冲液是一种被设计为模仿人类体液的缓冲液。

在G显带染色过程中，它发挥的作用是将不同颜色的细胞内组成分离出来，使得它们不会在一幅核型图像中混杂在一起。

3. 在加入染料后将玻璃片封起来，等待颜料与核相结合。

4. 将镜头放置在显微镜底座中，并通过显微镜观察标本。

分析：我们使用的显微镜是能见度很好的显微镜，能够让细胞结构非常清晰可见。

我们可以在屏幕上观察到标本图像。

我们首先计算出图像中每个单独的染色体的数目以及它们的大小和形状。

在一张图像上，我们可以很容易地区分每个单独的染色体，并根据它们的大小、形状和位置来确定它们在细胞核中的位置。

结果我们的细胞核型分析结果显示，这个体细胞核内的染色体数目为46个。

液基细胞学超薄片技术液基细胞学超薄片技术是一种新兴的细胞学检测技术，它是最近几年来在临床上被广泛应用的标本制备方法之一。

相比于传统细胞学检测方法，液基细胞学超薄片技术具有样本制备简便、高质量、高灵敏度等优点，成为了常见的细胞学检测方法之一。

本文将对液基细胞学超薄片技术的原理、操作流程、优缺点以及应用前景等进行全面的介绍。

液基细胞学超薄片技术是通过将患者的细胞样本置于细胞培养基中，使细胞自然沉淀在液面上，然后将液面上的细胞簇均匀地涂布于载玻片上，制成超薄的细胞片。

这种方法可以消除细胞离解的影响，从而获得细胞的更为真实和可靠的信息。

1、提取细胞样本：液基细胞学超薄片技术适用于多种细胞样本，包括子宫颈和直肠样本等。

需要用细胞采集刷子或取样器从病变部位采集样本。

2、制备液基样本：将采集到的细胞样本浸入到液基培养液中，用旋转离心器离心沉积。

然后倒掉上清液，留下沉淀物，加入液基培养液对其进行混合，形成适宜的液基样本。

3、制备载玻片：用专用液基载物架将样本移至载玻片上，使其均匀涂布于玻片上。

然后将载玻片放置在室温下干燥，形成固定的细胞片。

4、染色：超薄片样本可以进行各种染色技术，如Papanicolaou染色法和HE染色法等。

5、显微镜观察：向染色后的细胞片添加透明液体，缓慢旋转载玻片使液体均匀涂布于载玻片上，并在显微镜下观察细胞形态结构和病变特点。

优点：1、操作简便：液基细胞学超薄片技术相较于传统细胞学制备方法，操作更为简单，易于掌握，且制备过程稳定、重复性好。

2、样本质量优良：液基细胞学超薄片技术通过将细胞沉淀于液面上，消除了细胞离解对细胞形态识别和准确性的影响，从而获得更加可靠的样本。

3、提高检测准确性：该技术可以有效地预防细胞溢出和血液污染等因素对样本的污染和扰动，从而提高检测准确性。

1、设备和药剂成本高昂：液基细胞学超薄片技术所需的设备和药剂成本较高，限制了该技术的普及。

2、诊断难度较大：液基细胞学超薄片技术所获得的样本比传统细胞学制备方法更为干净，从而难度也更大，需要更多的专业技能和实践经验。

标本制作的简单描述
标本制作，也称为标本制备，是生物学、解剖学、植物学和其他自然科学领域的一种技术，旨在保存生物样本（如动物、植物或微生物）的形态和结构，以便于研究、教学或展示。

以下是一些基本的步骤和考虑因素：
1. 收集和选择标本：选择适当的个体或材料作为标本。

这可能包括考虑个体的健康状态、年龄、性别等因素。

2. 杀死和固定：为了长期保存，需要通过化学方法或冷冻来杀死样本并停止腐败过程。

固定通常涉及将组织浸泡在防腐剂中（例如福尔马林或酒精）。

3. 清洁和解剖：对于动物标本，可能需要去除内脏、肌肉等，只留下骨骼或特定的解剖结构。

植物标本通常需要压平以保持其形态。

4. 脱水和干燥：为了防止细菌生长和腐败，标本通常需要通过脱水处理来移除水分。

这可以通过自然干燥、热风干燥或化学溶剂来实现。

5. 防腐处理：应用防腐剂或其他化学物质以防止真菌和细菌的
生长。

6. 填充和支撑：对于动物标本，可能需要使用填料（如棉花、稻草或塑料泡沫）来恢复其原始形状。

植物标本可能需要粘贴在硬纸板上以保持平整。

7. 标签和记录：为标本附上标签，记录采集信息、物种名称、日期和其他相关的科学数据。

8. 展示和储存：将标本放置在适当的容器中（如玻璃瓶、展示盒或专用的存储设施），以便于观察和保护。

9. 维护和保养：定期检查标本的状态，进行必要的清洁和维护工作，确保长期保存。

(四)活细胞标本的制备 活细胞标本一般用于单克隆抗体的筛选、细胞骨架蛋白的定位研究。标本来源主要是建株细胞、培养细胞、外周血等。细胞可直接培养在盖玻片上、培养瓶内或培养板上，也可将一定量的细胞收集离心进行涂片。不管任何形式，在进行免疫组化标记前均需反复洗涤，乙醇、丙酮或4％多聚甲醛固定。乙醇、丙酮固定5～15min，4％多聚甲醛固定3～5min。活细胞标本固定后应立即进行免疫组化定位。

一种免疫荧光组化方法 本发明涉及一种在活细胞上进行免疫荧光染色的方法。特征在于使用一种连接肽帮助抗体分子进入活细胞内，进行针对活细胞、组织的免疫组织化学、基因组学、转录组学、糖组学以及蛋白质组学等研究。与传统免疫组化方法相比，本发明方法操作简单，不需要破坏细胞结构。 1. 一种在活细胞上进行免疫荧光染色的方法，其特征在于，使用一种连接肽帮助外源性抗体分子进入活细胞内。 2. 根据权利要求1所述的，该连接肽的一级结构如下：NH 2 -MYGRKKRRQRRRGHM(C) n -COOH 3. 根据权利要求2所述的，连接肽一级结构也包括以下变化，N端的前3个氨基酸可以被G，H，A，K，R，M替换，C端的半胱氨酸可以被胱氨酸替换，n是小于28的正整数。 4. 根据权利要求1所述的，该方法可以用于针对活细胞、组织的免疫组织化学、基因组学、转录组学、糖组学以及蛋白质组学等研究，以及另一个潜在的用途是还可能被用于肿瘤、一些传染性疾病的治疗，以替代胞内抗体的作用。

原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应 (用来检测未知抗原)。 k直接免疫荧光法的操作步骤 ¨ 标本的处理： – 细胞涂片、细胞爬片浸入冷丙酮或4%的多聚甲醛固定10min，然后用0.0lM PBST (含0.l%TritonX-100 pH 7.4) 漂洗5min × 3/次； – 石蜡切片经脱蜡、梯度酒精脱水后，进行抗原修复，然后用0.01M PBST漂洗5min × 3/次； ¨ 2%BSA或10%BSA37℃湿盒内封闭30min ¨ 抗体染色： – 在标本片上滴加适当稀释的荧光标记抗体(1:8或1:16稀释)，放在湿盒中，37℃孵育30min； k直接免疫荧光法的操作步骤(续) ¨ 0.0lmol/L PBS(pH 7.4) 漂洗5min × 3/次，不时震荡(洗去多余游离的荧光素标记的抗体)。 ¨ 缓冲甘油封片 – 分析纯无荧光的甘油9份 pH 9.2，0.2M碳酸盐缓冲液1份配制。 ¨ 镜检：在荧光显微镜下观察。

实验六应用去壁低渗火焰干燥法制备植物染色体标本一、实验目的1. 学习利用去壁低渗火焰干燥法制备植物染色体标本的技术方法。

2．获得分散良好、形态清晰的中期染色体用于核型分析。

二、实验原理植物染色体标本的制备最常用的方法是压片法，将材料解离后进行染色和压片，但压片法的不足是由于细胞堆积致使染色体很难彻底分散开。

而去壁低渗法则是先用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，得到原生质体，再将细胞进行低渗处理，即把细胞置于低渗液（低浓度的KCl或蒸馏水）中，使细胞充分吸水膨胀，染色体分散，平展地铺展在载玻片上，再用火焰干燥让染色体紧贴在载玻片上。

此法有效地克服了压片法中存在的染色体分散不开、平展不良等不足，现已广泛应用于核型分析、染色体显带等研究。

三、实验材料大蒜根尖（染色体数2n=16）四、实验步骤1．取材：将大蒜瓣掰开，大头朝下置于白瓷盘中，加上少许水，3-4天后根长到1cm左右，将根剪下，用蒸馏水洗几次。

2．预处理：根尖用0.05%的秋水仙素溶液处理4h左右。

3．固定：用蒸馏水将根洗几次，在甲醇-冰醋酸（3:1）固定液中固定4h。

4．酶解：倒去固定液，用蒸馏水洗几次，取10个左右的根置于载玻片上切取根尖，加入酶液，25 ℃下酶解2.5h左右。

5．低渗：倒去酶液，用蒸馏水洗几次，然后在蒸馏水中浸泡20min。

6．再固定：吸去蒸馏水，加入固定液固定20min。

7．滴片：去掉大部分固定液，剩余0.5ml左右，用吸管充分吹打根尖，使细胞分散，吸取细胞悬液，滴一到两滴于预冷的载玻片上，迅速吹气，使悬液快速铺展，文火烤干。

8．染色：吸取Giemsa染液铺于载玻片上，染色10min。

9．观察：在自来水下小水冲去染液，晾干，在显微镜下观察。

五、注意事项1. 由于分裂细胞主要位于根尖的分生区，所以切取根尖时不宜太短（丢失分裂的细胞），也不宜太长（使分裂细胞在所有细胞中的比率减少），以刚好切下分生区最为适合。

2. 第7步用吸管吹打时要充分，尽量使组织块分散成单个细胞，观察细胞悬液看不到漂浮的组织块即可，如果组织块不分散会不利于染色体分散。

宠物解剖学体位和标本制备技能宠物解剖学是研究宠物内部器官结构和功能的科学，对于兽医学生和兽医师来说，掌握宠物解剖学体位和标本制备技能至关重要。

本文将介绍宠物解剖学体位和标本制备技能的基本要点。

一、宠物解剖学体位技能在进行宠物解剖学研究时，正确的体位对于获取准确的解剖结构信息至关重要。

以下是常用的宠物解剖学体位技能：1. 仰卧位：将宠物仰卧于手术台上，四肢自然伸展。

此体位适用于腹部和胸部解剖。

2. 侧卧位：将宠物侧卧于手术台上，将前肢和后肢自然伸直。

此体位适用于头部和颈部解剖。

3. 立位：让宠物保持自然的站立姿势。

此体位适用于四肢和背部解剖。

4. 俯卧位：将宠物俯卧于手术台上，四肢自然伸展。

此体位适用于头部和颈部解剖。

在进行宠物解剖学体位时，需要确保宠物的肌肉松弛，可以通过药物镇静来帮助宠物保持稳定体位。

二、宠物解剖学标本制备技能宠物解剖学标本制备是将宠物解剖学所学的知识应用到实践中，制作出供教学和研究使用的标本。

以下是宠物解剖学标本制备技能的要点：1. 器械准备：准备好解剖所需的器械，如手术刀、剪刀、镊子等。

保证器械的清洁和锋利度，以便顺利进行解剖操作。

2. 切口技巧：根据解剖的需要，在合适的位置进行切口。

切口的长度和深度应根据所需解剖的器官来调整，以便于完整地展示解剖结构。

3. 器官处理：解剖时应注意保持解剖场所的清洁，避免交叉感染。

将解剖得到的器官进行处理，如固定、保存和标记等。

4. 标本制备：将解剖得到的器官制作成标本。

在制作标本时，要注意保持标本的完整性和可观性，以便于后续的教学和研究。

5. 标本保存：制作好的标本需要进行适当的保存，以防止腐败和变形。

可以选择使用化学品进行标本的防腐处理，并储存在合适的容器中。

通过掌握宠物解剖学体位和标本制备技能，兽医学生和兽医师能够更准确地理解宠物内部结构和功能，并能应用于临床诊疗和教学研究中。

总结：本文介绍了宠物解剖学体位和标本制备技能的基本要点。

正确的体位能够帮助研究者获取准确的解剖结构信息，而标本制备则将理论知识转化为实践成果，为后续的教学和研究提供了有力的工具。

1、干制标本植物腊叶标本植物腊叶标本要保管在密封干燥的腊叶标本橱内新制标本因为常有害虫和虫卵寄生，入橱最好用药消毒。

就是用二硫化碳约0。

5KG 盛在容器内，放入杀虫箱（1。

7平方米）中，两日后开箱，使毒气散尽，拿出标本。

二硫化碳气体比空氧重。

药品应放在标本上面。

或者把未上台纸的标本放入0。

5%升汞酒精（工业用75%）溶液中浸一次，制好后入橱。

升汞）有毒，并不能与金属起化学作用，切忌使用金属器械。

用时要带橡皮手套，事后用肥皂北朝洗手，标本用什么药品杀虫，应在台纸上注明，以防中毒。

腊叶标本橱内要放樟脑精以防虫害。

分类入橱标本要进行分类才便于利用。

植物根、茎、叶花果实的干制标本，可按课本上的次序排列。

分类标本在按照分类系统，分科排列。

目前标本室常用的分类系统有恩格斯（AENGLER）、克朗奎（A。

CRONGUIST）等分类系统。

橱门上应有分科目录表，橱内要有分科标签，便于查找。

维修如果标本中的叶片脱落，可用毛笔刷胶水（植物胶）在叶背面，按照自然姿态贴好，阴干。

枝茎断裂的要用醋酸乙烯胶粘贴，再贴上胶水纸。

发霉和虫蛀的标本，用毛笔蘸95%酒精或10%福尔马林液洗刷，干后用毛笔刷除霉斑。

台纸和盖纸破损的要调换新的。

移动标本，手脚要轻，不要翻转颠倒。

入橱标本，不要太挤。

标本外借，要多用填纸包装，注意防潮。

植物种子标本要选择典型无病虫害的新种子，清除杂质后晒干，装入种子瓶中，并贴上标签，经常检查，以防发霉虫蛀。

昆虫标本和植物病虫害等盒装标本大型昆虫的腹部和柔软部分以及烘干的幼虫，都容易发霉。

盒装的昆虫生活史、病虫害等标本里的安瓿容易破碎和标签脱落，可将损坏部分掉换℃℃。

植物损坏部分可按照维修腊叶标本方法维修。

盒装标本内应放入樟脑、硅胶等防虫防潮药品。

其它化石标本要防止震动和碰撞，损坏时用石膏填补和聚醋酸乙烯胶（乳白胶水）粘接。

鸟卵标本卵壳损坏，可分块取下粘贴。

循环系统干制标本是用赛璐珞作填充物的，脆性大，要防震，如果损坏，可以用毛笔蘸丙酮液粘接。