T淋巴亚群及T-SPOT.TB检测对活动性结核病的鉴别诊断

中国热带医学２０１５年第１５卷第ｏ４期ＣｈｉｎａＴｒｏｐｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｐｒｉｌ　２０１５，Ｖｏ１．１５，Ｎｏ．０４　・３９３・　

・论著・　

Ｔ淋巴亚群及Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ检测对活动性结核病的鉴别诊断　

罗丹，潘建华　

长沙市中心医院，湖南长沙４１０００４　

摘要：目的探讨Ｔ淋巴细胞亚群及结核感染Ｔ细胞斑点试验（Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ）检测对活动性结核病的鉴别诊断价　

值。方法检测２０例健康对照者、２６例隐性结核病感染者及３５例活动性结核杆菌感染者外周血的Ｔ淋巴细胞亚群及　

Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ。结果　隐性感染组、活动性结核组的ＣＤ４　细胞、ＣＤ８　细胞的表达与健康对照组比较有显著性差异（Ｐ均＜　

０．０１），而隐性感染组与活动性结核组组间比较无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。外周血的ＣＤ４　ＣＤ２５　ＣＤ１２７　细胞、ＣＤ３９　ＣＤ４　

ＣＤ２５　ＣＤ１２７　细胞在健康对照组、隐性感染组及活动性结核组中表达有显著性差异（Ｐ均＜０．０１）；Ｔ－ＳＰＯＴ．ＴＢ诊断隐性　

感染组的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性似然比分别是５３．８％（１４／２６）、９０．０％（１８／２０）、　

８７．５％（１４／１６）、６０．０％（１８／２８）、５．４、０．５；而活动性结核组分别是５７．１％（２０／３５）、９０．Ｏ％（１８／２０）、９０．９％（２０／２２）、５４．５％（１８／　

３３）、５．７、０．５，二组在诊断效率指标上无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。结论ＣＤ４　ＣＤ２５　ＣＤ１２７　细胞与ＣＤ３９　ＣＤ４　ＣＤ２５　

ＣＤ１２７　细胞在活动性结核与隐匿性结核的表达差异或与免疫抑制和免疫耐受的强度有关，是区分二者的优选指标。　

关键词：活动性结核；隐性结核感染；Ｔ细胞亚群；Ｔ细胞斑点试验　

中图分类号：Ｒ５２１．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００９—９７２７（２０１５）０４—３９３—０４　

Ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ａｎｄ　Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ　ａｓｓａｙ　ｉｎ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　

ｏｆ　ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌＯｓｉｓ　

ＬＵＯ　Ｄａｎ，ＰＡＮ　Ｊｉａｎ－ｈｕａ　

Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ　Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　Ｃｅｎｔｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈａｎｇｓｈａ　４１０００４，Ｈｕｎａｎ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ａｎｄ　Ｔ－ＳＰＯＴ．ＴＢ　ａｓｓａｙ　ｉｎ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　

ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　Ｔ　

ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ　ａｎｄ　Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｐｅｏｐｌｅ（ｈｅａｈｈｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｎ＝２０），ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ（１ａｔｅｎｔ　

ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ，ｎ＝２６）ａｎｄ　ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ（ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ，ｎ＝３５）．Ｒｕｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　

ＣＤ４　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ＣＤ８　Ｔ　ｃｅｉｌｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｔ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　

ｗｅｒｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１），Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ＣＤ４　ａｎｄ　ＣＤ８　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　

ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｔ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＞０．０１）．Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ＣＤ３９＋ＣＤ４＋　

ＣＤ２５　ＣＤ１２７　ａｎｄ　ＣＤ４　ＣＤ２５　ＣＤ１２７　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ．ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｔ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｅａｌｔｈｙ　

ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ（Ｐ＜Ｏ．Ｏ１）．Ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ　ｖａｌｕｅ，　

ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅ　ｖａｌｔｉｅ，ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ　ｒａｔｉｏ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　Ｔ－ＳＰＯＴ．ＴＢ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｔ　

ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　５３．８％（１４／２６），９０．０％（１８／２０），８７．５％（１４／１６），６０．０％（１８／２８），５．４，０．５　ａｎｄ　ｔｈａｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　

ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　５７．１％（２０／３５），９０．０％（１８／２０），９０．９％（２ｏ／２２），５４．５％（１８／３３），５．７，０．５　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　

ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ　ｏｆ　ｂｌｏｏｄ　Ｔ～ＳＰＯＴ．ＴＢ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　

ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｔ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＣＤ４　

ＣＤ２５　ＣＤ１２７　ｃｅ１１ｓ　ａｎｄ　ＣＤ３９　ＣＤ４　ＣＤ２５　ＣＤ１２７１ｏｗ　ｃｅｌｌｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｌａｔｅｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　

ｇｒｏｕｐｓ　ｍｉｇｈｔ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎ０ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ，ａｎｄ　ｔｈａｔ　ｍａｙ　ｂｅ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　

ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｑｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｔｗｏ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ；Ｌａｔｅｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ；Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｓｕｂｓｅｔｓ；Ｔ－ＳＰＯＴ．ＴＢ　

全球约有１／３人口感染结核，最终约５％～１０％的　

发展成为活动性结核（Ａｃｔｉｖｅ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ），而大部分　

人成为隐性结核感染者（Ｌａｔｅｎｔ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，　

ＬＴＢＩ）　］。研究表明，预防性治疗后ＬＴＢＩ后续发病风　

险降低９０％左右口］，因此，筛查和诊断ＬＴＢＩ对结核病　

防控有着关键作用ｐ　。本研究通过观察活动．１生结核和　隐性结核感染者的外周血Ｔ淋巴细胞亚群表达水平　

变化及Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ试验，以期能有效地识别隐性结核　

感染者，为临床的免疫干预提供充足的理论依据。　

１材料与方法　

１．１材料　

１．１．１　对象资料将病例资料依据结核患者是否具　

基金项目：国家“十二五”重大专项（Ｎｏ．２０１３ＺＸ１０００５００４）　

作者简介：罗丹（１９７９～），男，硕士，主管技师，研究方向：临床免疫学。

　・３９４・　中国热带医学２０１５年第１５卷第０４期ＣｈｉｎａＴｒｏｐｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｐｒｉｌ　２０１５，Ｖｏ１．１５，Ｎｏ．０４　

有活动性分为二组即活动性结核组和隐性感染组，并　

设立健康对照组，共三个组别。活动性结核组选择　

２０１３年９月至２０１４年６月间在长沙市中心医院肺科　

医院住院的３５例肺结核患者，全部确诊为活动性肺　

结核，且痰涂片阳性，确诊标准为《结核病诊断标准及　

分类（ＷＳ２８８—２００８）》　，排除ＨＩＶ感染、自身免疫反应　

性疾病、肿瘤、病毒感染、血液病等影响结果判定者，　

患者年龄１１～５２岁，平均（３０．０±９．３）岁。隐性感染组　

入选２６例病例，人组标准以美国ＣＤＣ发布ＬＴＢＩ诊断　

指南　为蓝本，如近期与涂片阳性者有密切接触；新　

近感染，结核菌素皮肤试验（ＴＳＴ）由阴性转为强阳性；　

胸部影相学显示异常。健康对照组人选医院体检科　

各项指标正常的健康人群２０人，男女各１０人，年龄　

１７—４ｌ岁，平均（２５．３＋７．１）岁。三组研究对象在性别、　

年龄等差异均无统计学意义，人选前三个月内未使用　

免疫制剂。　

１．１．２仪器和试剂　采用ＢＥＣＫＭＡＮ　ＣＯＵＬＴＥＲ　Ｅｐ—　

ｉｃｓＸ流式细胞仪；荧光抗体ＣＤ３９　ＰｅｒＣＰ、ＣＤ４　一　

ＦＩＴＣ、ＣＤ２５　一ＰＥ—Ｃｙ７、ＣＤ１２７　一ＰＥ试剂盒购自　

Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司；Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ检测试剂盒购自Ｏｘｆｏｒｄ　

Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃ　Ｌｔｄ；ＲＰＭＩ一１６４０及人外周血淋巴细胞分离　

液购白天津市灏洋生物制品科技有限责任公司。　

１．２方法　

１．２．１　Ｔ细胞亚群检测先在流式细胞检测管加人　

１０ｔｘＬ　ＣＤ３９　一ＰｅｒＣＰ、ＣＤ４　一ＦＩＴＣ、ＣＤ２５　一ＰＥ—Ｃｙ７、　

ＣＤ１２Ｔ￣ｗ－ｐＥ荧光抗体，再加入１００１ｘＬ抗凝全血，充分　

混匀，常温避光染色２０ｍｉｎ，裂解红细胞，离心弃上清　

液，用磷酸盐缓冲液洗涤后，重悬细胞，上机检测，获　

取细胞数不少于１５　０００个，操作步照参考试剂盒提供　

的方法。应用ＢＥＣＫＭＡＮ　ＣＯＵＬＴＥＲ公司配套软件分　

析目的Ｔ淋巴细胞亚群。　

１．２．２　Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ检测将５ｍＬ肝素抗凝血分成二　

份，分别按１：１和１：２的比例加人ＲＰＭＩ一１６４０和Ｆｉｃｏｌｌ　

淋巴细胞分离液，将ＲＰＭＩ一１６４０稀释后的血样缓慢　

轻倒人Ｆｉｃｏｌｌ细胞液上。将混合物分别以１　０００ｇ、　６００ｇ、３５０ｇ离心力离心三次，每次７　ｍｉｎ，倒掉上清液　

后加入５００１ｘＬＡＩＭ－Ｖ培养液配制成细胞液。分别在　

Ｔ—ＳＰＯＴ．ＴＢ板的阴性对照、抗原Ａ、抗原Ｂ及阳性对照　

孔中加入１００１￣Ｌ细胞液，５％ＣＯ：培养箱中３７ｃＩ二培养　

１６～２０ｈ。次日，用２００１ｘＬ　ＰＢＳ洗板４次后，每孔加　

５０１ｘＬ酶结合物，４～８￣Ｃ孵育ｌｈ。ＰＢＳ洗涤４次每孔加