补体结合试验实验结果分析

第五章补体参与的反应内容一、溶血试验二、补体结合试验一、溶血试验当红细胞与相应抗体相结合，在电解质存在时，可使红细胞产生凝集现象；若同时加入新鲜动物血清，则血清中的补体可与红细胞及其抗体（溶血素）形成的免疫复合物结合，从而激活补体导致红细胞溶解，产生溶血现象。

【材料】1、抗原：2%绵羊红细胞（简称SRBC）。

2、抗体：溶血素即（SRBC抗体）。

3、补体，新鲜豚鼠血清。

4、生理盐水。

5、小试管、刻度吸管、试管架、37℃水溶箱等。

【方法】1、取小试管3支，编号后按下表加入各物（容量单位均为ml）溶血试验加样表（表2—1）单位ml管号2％红血球溶血素（2单位）补体（2单位）生理盐水结果1 0.5 0.5 0.5 0.52 0.5 0.5 - 1.03 0.5 - 0.51.02、将试管摇匀后置37℃水箱内：15—30分钟，取出观察有无溶血现象；3、结果观察：管底无血球沉淀，液体红色透明管为溶血。

注意分析结果及其意义，了解补体的性质与作用。

二、补体结合试验凝集反应和沉淀反应分别是颗粒性抗原、可溶性抗原与特异抗体结合的结果。

补体结合试验，则是基于抗原抗体复合物可以结合补体的原理，在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统来检测抗原或抗体是否发生特异性结合的一种抗原抗体反应。

补体结合试验有两个系统共五个成分参加：检测系统的已知抗原（或抗体）与持检抗体（或抗原）、补体、指示系统的绵羊红细胞和溶血素。

依次加入检测系统成分与补体作用后再加指示系统，若不出现溶血，即为补体试验阳性，表示检测系统中抗原抗体相对应（待检标本中有相应抗体或抗原），形成抗原体复合物并结合了补体，指示系统因缺乏补体而不发生溶血；反之若出现溶血，则为补体试验阴性，表示检测系统的抗原抗体不对应（持检标本中无相应抗体或抗原），不能结合补体，游离的补体与后加入的指示系统结合，导致绵羊红细胞溶解。

补体结合试验敏感性和特异性均较高，可用于检测梅毒，立克次体病和病毒感染等患者体液中的抗体或抗原以辅助诊断，还可用于某些病毒的分型。

第11页/共38页
（二）CH50测定方法
1.红细胞浓度的调整
绵羊红细胞（SRBC）采自绵羊颈静脉，制备脱纤维羊血或 用阿氏（Alsever）血液保存液制成抗凝血，4℃保存备用。使 用前，调制成2%～5% SRBC悬液。为使红细胞浓度标准化， 可吸取少量红细胞悬液，加入20～30倍的稀释液，在542nm波 长处测定吸光值以调整红细胞浓度。
➢现 状
影响的因素多、各种制剂需要烦琐的稀释和滴定等， 现代化、自动化抗原抗体检测方法的不断涌现，补体结合试验逐渐被遗弃 补体结合试验作为一种经典的免疫方法类型，其设计和原理仍对新型免疫 方法的建立有着启迪和指导作用
第29页/共38页
第五节 补体受体的测定
补体受体： 存在于多种细胞
清除免疫复合物、净化机体内环境 检测补体受体，有助于判断机体抗感染能力和计 数相应的细胞数量
中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、 NK细胞
CR4
gp150/9 5
CD11C/ CD18
iC3b、C3d、C3dg
C5aR/ C3aR
CD88 C5a/C3a(活化G蛋白)
中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、血小板 内皮细胞、肥大细胞、吞噬细胞
第32页/共38页
第六节 补体测定的应用
补体相关试验： 诊断梅毒螺旋体感染的华氏反应（已淘汰） HLA分型的补体依赖性细胞毒试验 抗原抗体检测的脂质体免疫试验、免疫粘连血凝试验 抗体形成细胞定量检测的溶血空白斑技术 免疫复合物测定的胶固素结合试验和C1q结合试验
第17页/共38页
➢ 参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分之意。已能筛选 到的血清有人C2缺乏、豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清

一、实验背景补体系统是人体免疫系统的重要组成部分，主要由一系列蛋白质组成，具有调节免疫反应、清除病原体、维持内环境稳定等功能。

其中，补体溶血反应是补体系统发挥重要作用的经典实验模型。

本实验旨在通过补体溶血反应，了解补体系统在免疫反应中的作用，以及补体溶血反应的原理和实验方法。

二、实验目的1. 掌握补体溶血反应的原理和实验方法。

2. 了解补体系统在免疫反应中的作用。

3. 分析实验结果，探讨补体溶血反应的相关影响因素。

三、实验原理补体溶血反应是指补体系统与抗体结合后，激活一系列酶促反应，最终导致红细胞溶解的现象。

实验中，以绵羊红细胞（SRBC）作为底物，抗SRBC抗体作为抗原，补体作为效应物，通过观察红细胞溶解程度，评估补体系统的活性。

四、实验方法1. 制备SRBC悬液：将绵羊红细胞用生理盐水洗涤，制成2%的悬液。

2. 制备抗SRBC抗体：将家兔抗SRBC抗体用生理盐水稀释，得到不同浓度的抗体溶液。

3. 设置实验组：将抗体溶液、补体和SRBC按一定比例混合，分别设置不同稀释度的抗体和补体溶液。

4. 对照组：设置只加抗体或只加补体的溶液。

5. 观察红细胞溶解情况：观察不同实验组中红细胞的溶解程度，记录最大稀释度。

五、实验结果1. 实验组中，随着抗体和补体浓度的增加，红细胞溶解程度逐渐增强。

2. 对照组中，仅加抗体或仅加补体的溶液，红细胞溶解程度不明显。

3. 实验结果与理论预测相符，表明补体溶血反应的原理和实验方法正确。

六、结论1. 补体系统在免疫反应中发挥着重要作用，能够通过激活一系列酶促反应，导致红细胞溶解，从而清除病原体。

2. 本实验结果表明，补体溶血反应的原理和实验方法可行，可用于评估补体系统的活性。

3. 实验过程中，影响补体溶血反应的因素包括抗体和补体的浓度、温度、pH值等。

在实际操作中，应严格控制实验条件，以确保实验结果的准确性。

4. 补体溶血反应在临床医学、生物学研究等领域具有广泛的应用价值。

第十一章血清学试验第四节补体结合试验补体结合试验（complement fixation test）是应用可溶性抗原，如蛋白质、多糖、类脂、病毒等，与相应抗体结合后，其抗原-抗体复合物可以结合补体，但这一反应肉眼不能察觉，如再加入致敏红细胞（溶血系统或称指示系统），既可根据是否出现溶血反应，判定反应系统中是否存在相应的抗原和抗体。

参与补体结合反应的抗体称为补体结合抗体。

补体结合抗体主要为IgG和IgM，IgE和IgA 通常不能结合补体。

通常是利用已知抗原检测未知抗体。

一、基本原理本试验包括两个系统共五种成分：一为检测系统（溶菌系统），即已知的抗原（或抗体）、被检的抗体(或抗原)和补体；另一为指示系统（溶血系统），包括绵羊红细胞、溶血素和补体。

抗原与血清混合后，如果两者是对应的，则发生特异性结合，成为抗原-抗体复合物，这时如果加入补体，由于补体能与各种抗原-抗体复合物结合（但不能单独和抗原或抗体结合）而被固定，不再游离存在。

如果抗原-抗体不对应或没有抗体存在，则不能形成抗原-抗体复合物，加入补体后，补体不被固定，依然游离存在。

由于许多抗原是非细胞性的，而且抗原、抗体和补体都是用缓冲液稀释的比较透明的液体，补体是否与抗原-抗体复合物结合，肉眼看不到，所以还要加入溶血系统。

如果不发生溶血现象，就说明补体不游离存在，表示溶菌系统中的抗原和抗体是对应的，它们所组成的复合物把补体结合了。

如果发生了溶血现象，则表明补体依然游离存在，也就表示溶菌系统中的抗原和抗体不相对应，或者两者缺一，不能结合补体（图11-7）。

二、补体结合试验的基本过程及应用试验分两步进行。

第一步为反应系统作用阶段，由倍比稀释的待检血清加最适浓度的抗原和补体。

混合后37℃水浴作用30～90min或4℃冰箱过夜。

第二步是溶血系统作用阶段，在上述管中加入致敏红细胞，置37℃水浴作用30～60min，观察是否有溶血现象。

若最终表现是不溶血，说明待检的抗体与相应的抗原结合了，反应结果是阳性；若最终表现是溶血，则说明待检的抗体不存在或与抗原不相对应，反应结果是阴性。