油菜花粉多糖的分离、纯化、结构鉴定及抗氧化活性的研究

南昌大学硕士学位论文油菜花粉多糖的分离、纯化、结构鉴定及抗氧化活性的研究姓名：李敏申请学位级别：硕士专业：农产品加工及储藏工程指导教师：涂宗财20071226摘要摘要近年来，花粉作为优良的全营养食物被全世界广泛关注，掀起一股“花粉研究热”。多年来我国花粉的基础研究和应用研究己全面深入地开展，并取得多方面的可喜成果，有些方面己进入国际研究的前沿。油菜花粉是中国产量最大的花粉，充分利用我国油菜花粉资源，对油菜花粉进行深入系统研究，使这一丰富资源的开发和利用提高到一个新的水平，将会产生极大的经济和社会效益。油菜花粉多糖具有抗肿瘤、增强免疫等功能，然而目前报道的油菜花粉多糖的最高提取率仅达１．４５０％，为了更好地提高油菜花粉多糖的提取率，本论文采用温差一机械法、温差一超声波法和超微粉碎法三种方法对油菜花粉进行破壁，以期找到最佳的破壁方法。并在系统研究了油菜花粉多糖的提取、分离纯化、理化性质以及初级结构的基础上，对其抗氧化的活性功能进行了评价，为今后油菜花粉多糖的研究与开发奠定了基础。本论文主要研究内容与结论如下：１．测定了油菜花粉中蛋白质、脂肪、黄酮、以及几种金属元素如Ｃｕ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ｃａ、Ｚｎ的含量，为油菜花粉的开发利用提供了科学依据。测定结果显示油菜花粉中蛋白和脂肪含量较高，所测的几种金属元素也较丰富。２．采用温差一机械法、温差一超声波法和超微粉碎法分别对油菜花粉进行破壁，发现温差一机械法和温差一超声波法破壁效果远不如超微粉碎破壁，超微粉碎破壁率可高达９９％以上。３．以葡萄糖为对照，优选苯酚一硫酸法测定油菜花粉多糖含量的显色条件。最佳的显色条件为：取待测油菜花粉多糖２ｍＬ，加入浓度为５％苯酚１ｍＬ，迅速滴加浓硫酸５．０ｍＬ，摇匀后于室温放置２０ｍｉｎ，在４８２Ｂｉｌｌ处测定吸光度。４．对油菜花粉多糖的水提工艺进行了研究，探讨提取温度、提取时间、料液比和提取次数对多糖提取率的影响。在单因素试验的基础上，通过正交试验确定最佳提取工艺条件。结果表明提取温度对多糖提取率的影响最大，其次为提取时间、次数，料液比的影响最小。油菜花粉多糖提取的最优条件为：提取温度为７０。Ｃ，提取时间为４ｈ，提取次数２次，料液比为ｌ：８，此时多糖提

取率达４．４８％。

ＩＪ摘要５．比较Ｓｅｖａｇ法和ＴＣＡ法对油菜花粉多糖脱蛋白的效果。实验结果表明ＴＣＡ法对油菜花粉多糖中蛋白的脱除率远高于Ｓｅｖａｇ法，并且多糖的损失率也低于Ｓｅｖａｇ法。６．用ＤＥＡＥ－－纤维素对油菜花粉精制多糖进行初步分离，主要得到中性多糖ＤＩ

和酸性多糖Ｄ３两个组分。再用Ｓｅｐｈａｃｒｙｌｓ一２００柱层析分别对多糖Ｄｌ和Ｄ３进一步分离纯化得到中性多糖Ｄｌｌ和酸性多糖Ｄ３Ｉ，用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－－３００柱层析和ＨＰＬＣ法分别鉴定其纯度，结果显示只有Ｄ１１组分为纯度很高的均一多糖。采用凝胶过滤法测定多糖ＤｌＩ的分子量为８０２７１，通过ＧＣ分析多糖ＤＩＩ与Ｄ３ｌ的单糖组成，结果表明它们均至少由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖六种单糖组成。ＵＶ检测显示油菜花粉多糖Ｄｌｌ于２８０ａｍ处未见有核酸和蛋白特征吸收峰，经ＩＲ检测证实多糖Ｄｌｌ与Ｄ３Ｉ具有多糖类物质的特征吸收峰。７．油菜花粉粗多糖、精制多糖对自由基ＤＰＰＨ、０２－自由基和·ＯＨ自由基均有一定的清除作用，并且随着多糖浓度的增大清除效果增强。油菜花粉精制多糖的作用效果大于油菜花粉粗多糖。

关键词：油菜花粉多糖；破壁；分离纯化；抗氧化活性

ⅡＩＡｂｓｔｒａｃｔＡＢＳＴＲＡＣＴＩｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｐｏｌｌｅｎｈａｓｂｅｅｎｕｓｅｄａｓａｆｏｒｍｏｆｆｕｌｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎｆｏｏｄａｌｌｏｖｅｒｔｈｅｗｏｒｌｄ．Ｉｎ

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ｓｕｃｈａｓａｎｔｉｃａｎｃｅｒ，ｅｎｈａｎｃｉｎｇｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｅｔａ１．Ｍａｋｉｎｇｆｕｌｌｕｓｅｏｆｒａｐｅｐｏｌｌｅｎ㈣Ｕｒｅｅａｎｄｄｏｉｎｇ

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ｏｒｄｅｒｔｏ

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Ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｂｒｅａｋｗａｌｌｏｆｒａｐｅｐｏｌｌｅｎ．Ｗａｌｌ－ｂｒｅａｋｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅｆｏｍｅｒｔｗｏｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅｆａｒｉｎｆｅｒｉｏｒｔｏＳｕｐｅｒｆｉｎｅ

ｃｏｍｍｉｎｕｔｉｏｎ．Ｗａｌｌ—ｂｒｅａｋｉｎｇｔａｌｅｏｆＳｕｐｅｒｆｉｎｅｃｏｍｍｉｎｕｔｉｏｎｃｏｕｌｄｒｅａｃｈ

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ａｃｉｄｍｅｔｈｏｄｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ

ＩＶＡｂｓｔｒａｃｔ∞ｆｏｌｌｏｗｓ：１．０ｍＬ５％ｐｈｅｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎｗａｓａｄｄｅｄｔｏ２．０ｍＬｒａｐｅｐｏｌｌｅｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ

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ａｄｄｅｄ

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ｆａｃｔｏｒｓｓｕｃｈａｓｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｉｍｅ，ｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄａｎｄｔｉｍｅｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｅｒｅ

ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅＷａｓｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔ，ｔｉｍｅ

Ｗａｓ

ｔｈｅｓｅｃｏｎｄ，ｔｉｍｅｓＷａｓｔｈｅｔｈｉｒｄ，ａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄ—ｌｉｑｕｉｄＷａＳｔｈｅｌｅａｓｔ，Ｔｈｒｏｕｇｈｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ

ｔｅｓｔ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｅｌ＇ｅｏｂｔａｉｎｅｄｏｎｔｈｅｂａＳｉｓｏｆｓｉｎｇｌｅ

ｆａｃｔｏｒ

ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ

ｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：９０＂Ｃｆｏｒ４ｈａｎｄ３ｔｉｍｅｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄ－ｌｉｑｕｉｄ

ｌ：８．Ｔｈｅ

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ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．

５．ＰｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅｃｒｕｄｅｒａｐｅｐｏｌｌｅｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓＷａｓｒｅｍｏｖｅｄｂｙＳｅｖａｇ

ｍｅｔｈｏｄａｎｄ

ｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄｓｅｄｉｍｅｎｔａｔｉｏｎｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲｅｍｏｖａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｌａｔｔｅｒＷａＳｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｆｏｒｍｅｒ，ａｎｄｍｅａｎｗｈｉｌｅｔｈｅｌｏｓｓｒａｔｅ

ｏｆｔｈｅｌａｔｔｅｒＷａＳｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｆｏｒｍｅｒ．

６．Ｔｈｅｐｒｉｍａｒｙｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒｅｆｍｉｎｇｒａｐｅｐｏｌｌｅｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｗｅｒｅｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｂｙ