高级药理学 体外抗菌活性试验

研究妇洁颗粒的体外、体内抗菌活性摘要：目的研究观察妇洁颗粒的体外、体内抗菌活性。

方法采用平皿二倍稀释法测定了妇洁颗粒对临床分离的64株临床常见的革兰氏阳性及革兰氏阴性菌的体外抗菌作用。

选择了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌及乙型溶血性链球菌进行了小鼠体内细菌感染的保护实验。

结果该药体外对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大肠杆菌的作用为最强，MIC50分别为，2和1 g·L-1；体内实验也显示对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及变形杆菌造成的体内感染动物有较好的保护作用。

结论对临床常见的革兰氏阳性及革兰氏阴性菌均具有较强的杀灭或抑制作用。

关键词：妇洁颗粒；抑菌；大肠杆菌；金黄色葡萄球菌阴道炎、宫颈炎是妇科多发病、常见病，大多数是由细菌等病原微生物引起，长期炎症，可发展为宫颈糜烂。

妇洁颗粒为治疗阴道炎、宫颈炎的中成药，具有清热解毒、活血消炎的功效。

为了解抗菌谱及药效，我们对妇洁颗粒进行了抗菌实验研究。

1 材料受试物妇洁颗粒，深棕色膏剂，每克膏相当于生药 g，由本所提供，批号020820；阳性对照药：妇乐冲剂：规格6 g/袋，山东泰安红旗制药厂生产，批号020309。

菌种、动物与试剂实验菌株，本实验共选用7种细菌。

包括金黄色葡萄球菌12株、表皮葡萄球菌10株、大肠杆菌14株、肠球菌10株、普通变形杆菌12株、乙型溶血性链球菌6株，共计64株。

以上菌株均为山东大学齐鲁医院收集的临床分离菌株。

全部菌种均进行常规方法鉴定；金黄色葡萄球菌ATCC25922、大肠埃希氏菌ATCC25923，均来源于中国药品生物制品检定所。

以上述菌株作为试验中的质控菌株，各菌分别稀释至终浓度为105 cfu/ml备用。

健康昆明种小鼠，体重18～22 g，由山东鲁抗医药集团提供，合格证号：鲁动质字D20XX0921。

营养肉汤，卫生部上海生物制品研究所生产，批号000101；MH 琼脂，上海市医学化验所试剂厂生产，批号990601。

荷芩止痒搽剂体外抗菌活性的研究目的：观察荷芩止痒搽剂对常见皮肤致病菌体外抗菌试验效果。

方法：采用平皿钢圈法对金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌（绿脓杆菌）、白假丝酵母、紧密单孢枝霉、裴氏着色真菌、石膏样小孢子菌、星形石膏样毛癣菌、红色毛癣菌、疣状毛癣菌和犬小孢子菌10种皮肤感染常见致病菌的抗菌效果进行观察。

结果：荷芩止痒搽剂原液对金黄色葡萄球菌和铜绿假单孢菌（绿脓杆菌）抑菌圈分别为24mm和11mm；白假丝酵母、紧密单孢枝霉、裴氏着色真菌、石膏样小孢子菌、星形石膏样毛癣菌、红色毛癣菌、疣状毛癣菌、犬小孢子菌无指示菌生长。

结论：荷芩止痒搽剂浓缩液（2∶1）、原液、1∶1、1∶8、1∶16以及1∶32倍液对本次试验所观察的10种常见皮肤致病菌有不同程度抗菌作用。

标签：荷芩止痒搽剂；体外抗菌；皮肤致病菌皮肤瘙痒为临床常见的一种症状。

针对临床实践中存在的HIV/AIDS皮肤瘙痒症问题，云南省中医中药研究院以中医理论为基础，在辨病、辨证，病症相结合的基础上自主研究和开发了“荷芩止痒搽剂”。

该搽剂主要由阳荷、黄芩等组成，具有解毒、消肿、除湿和止痒作用。

该搽剂对皮肤没有损害，不增加患者内服药，安全、有效、经济、简便、快捷、患者乐于接受。

为了考察其对常见皮肤致病菌的抗菌活性，现对其进行了体外抗菌活性研究。

现报道如下。

1材料与方法1.1受试药物荷芩止痒搽剂原液；荷芩止痒搽剂浓缩液，由云南省中医中药研究院附属医院制剂室提供。

批号：20110401。

样品配制：无菌纯水倍比稀释。

1.2试验用菌株YM1030金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、YM1040铜绿假单孢菌（绿脓杆菌）（Pseudomonasaeruginosa）、YM2005白假丝酵母（Candidaalbicans）、YM3077紧密单孢枝霉（Hormodendrumcompa）、YM3079裴氏着色真菌（Hormodendrumpedrosoi）、YM3080石膏样小孢子菌（Microsporumgypseum）、YM3092星形石膏样毛癣菌（Trichophytongypseum）、YM3093红色毛癣菌（Trichophytonrubrum）、YM3096疣状毛癣菌（Trichophytonverrucosum）、YM3099犬小孢子菌（Microsporumcanis），由云南大学微生物实验室提供。

抑菌试验方法总结用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验。

通过抑菌实验，可以测定一个药物的最低抑菌浓度，用以评价该药物的抑菌性能，这是抗菌药物的最基本的药效学数据。

主要方法有进行定性测定的扩散法（如抑菌斑试验）和进行定量测定的稀释法（如最低抑菌浓度实验）。

1、定性测定（1）纸片扩散法(disk diffusion test)，K-B法：WHO推荐的全球统一的标准方法。

原理：含有定量抗菌货物的纸睡帖在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。

质控：标准菌株的抑菌圈直径应落在预期范围内，如果超出该范围，应视为失控而予以纠正。

影响因素：培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具的精度和质控菌株本身的药敏特性等均能影响试验结果的准确性。

操作方法：按每1000 ml蒸馏水称取Muller-hinton Agar 38 g配备M—H琼脂，按每个平皿(直径9 mm)25 ml进行分装。

将孵育16—24 h的菌种分别接种生理盐水试管中，校正浓度至0.5麦氏标准(相当于1.0×108 CFU／m1)。

用无菌棉签拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在M—H琼脂表面，均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周。

平板在室温下干燥3—5 min后用无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面．置35℃孵育16 18 h。

记录抑菌圈的直径，实验。

重复10次。

主要用于比较不同抗菌物质，或者通过不同方法提取的同一种物质的效果。

（2）打孔法药敏实验：待M—H平板干后，用无菌棉签蘸取菌液(相当于1.0×108CFU／m1)，在培养基平板上密集划线接种。

两种药物体外抗菌活性分析【关键词】抗生素类；微生物灵敏实验；哌啦西林；舒巴坦；他唑巴坦哌啦西林／舒巴坦（商品名特灭）对多种革兰阳性菌和阴性菌均有较好的抗菌作用。

尤其对革兰阴性杆菌作用更为显著，目前已普遍用于临床抗感染的医治。

由美国临床实验标准化委员会（NCCLS）推荐的哌啦西林／他唑巴坦，目前尚未进入国内市场。

舒巴坦和他唑巴坦都是β内酰胺酶抑制剂，对产生β内酰胺酶的细菌具有抑制作用。

本文运用纸片扩散法（Kirby–Bauer法）检测哌啦西林钠／舒巴坦钠和哌啦西林钠／他唑巴坦钠的药物灵敏性，而且运用肉汤稀释法检测灵敏细菌的最小抑菌浓度（MIC）。

旨在评判两种药物的体外抗菌活性。

1 材料与方式菌株来源本院2005年1月至2006年10月临床标本中分离出的革兰阴性杆菌350株。

菌种鉴定应用法国梅里埃公司的API20E、API20NE的微生物鉴定条和鉴定软件。

标本为痰液、尿液、血液、脓液、胸腹腔积液等。

药物灵敏实验 Kirby-Bauer法抗生素纸片哌啦西林／舒巴坦、哌啦西林／他唑巴坦购自北京天坛药物生物技术开发公司。

MH琼脂购自英国的OXOID公司。

哌啦西林／舒巴坦的判定标准参照NCCLS 2001年规定的哌啦西林／他唑巴坦的标准判读。

标准质控菌种为大肠埃希菌ATCC 25922和肺炎克雷伯菌ATCC 700603。

MIC检测按NCCLS 2001年推荐的肉汤稀释法。

哌啦西林钠、舒巴坦钠、他唑巴坦钠购自湘北威尔曼制药。

超广谱β内酰胺酶（ESBLs）菌株的检测采纳NCCLS 2001年推荐的确诊实验在MH琼脂上贴头孢他啶和头孢他啶克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟克拉维酸4种纸片（北京天坛公司），35 ℃培育留宿。

依照复合纸片与相应的单药纸片的抑菌圈直径相差≥5 mm，判定为产ESBLs株，<5 mm为非产ESBLs株。

结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs酶的菌株别离占%(8/90)、%（6/61）。

丹参酮包合物制备及体外抑菌活性研究丹参酮包合物制备及体外抑菌活性研究摘要：随着细菌耐药性的增加，新型抗菌剂的开发已成为当今医学研究的热点之一。

本研究旨在制备丹参酮包合物，并评价其体外抑菌活性。

通过分级酸解法制备丹参酮，并将其包合入纳米材料中制备出丹参酮包合物。

通过纳米粒度分析仪和电子显微镜对丹参酮包合物的性质进行表征。

采用荧光染色技术和菌落计数法对丹参酮包合物的抗菌活性进行体外评价。

结果显示，制备的丹参酮包合物具有较小的粒径和均匀的形态分布。

在不同激发波长下，丹参酮包合物能发出不同颜色的荧光。

丹参酮包合物对多种细菌具有显著的抑菌活性，且其活性与抗生素青霉素相当。

因此，丹参酮包合物具有潜在的抗菌应用前景。

关键词：丹参酮，包合物，体外抑菌活性，纳米材料1. 引言细菌耐药性的增加已成为全球性的医疗危机。

现有的抗菌剂对抗耐药细菌的效果日益减弱，迫切需要开发新的有效抗菌剂。

丹参酮作为一种具有广谱抗菌活性的药物，具备了开发新型抗菌剂的潜力。

然而，由于其在生物体内的相对稳定性较差，且水溶性较低，限制了其抗菌活性的发挥，因此需要制备一种能提高丹参酮稳定性和生物利用度的包合物。

2. 材料与方法2.1 丹参酮制备通过分级酸解法从丹参中提取得到丹参酮。

2.2 丹参酮包合物制备将丹参酮与纳米材料按一定比例混合，在恒温搅拌条件下制备丹参酮包合物。

2.3 性质表征采用纳米粒度分析仪和电子显微镜对丹参酮包合物的粒径和形态进行表征。

2.4 抗菌活性评价采用荧光染色技术和菌落计数法对丹参酮包合物的抗菌活性进行评价，并与青霉素进行对照。

3. 结果与讨论3.1 丹参酮包合物的制备通过将丹参酮包合入纳米材料中，制备出了丹参酮包合物。

纳米粒度分析结果表明，制备的丹参酮包合物具有较小的粒径，为50-100 nm。

电子显微镜观察显示，丹参酮包合物呈现均匀的形态分布。

3.2 丹参酮包合物的荧光性质在不同激发波长下，丹参酮包合物能够发出不同颜色的荧光。

为了评估不同抗生素药物的抗菌能力，本实验通过体外抑菌实验，观察并记录抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等常见细菌的抑菌效果，以期为临床合理用药提供参考。

二、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等。

2. 药物：头孢克洛、氨苄西林、阿莫西林、庆大霉素、红霉素等。

3. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、M-H肉汤培养基。

4. 实验器材：培养皿、移液器、无菌试管、锥形瓶、酒精灯、高压蒸汽灭菌器等。

三、实验方法1. 菌株培养：将菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，37℃培养24小时。

2. 药物制备：将抗生素药物溶解于M-H肉汤培养基中，制成不同浓度的药物溶液。

3. 抑菌实验：将培养好的菌株接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，制成平板。

将不同浓度的药物溶液滴加于平板上，37℃培养24小时，观察抑菌圈直径。

4. 数据记录：记录不同浓度药物溶液的抑菌圈直径，计算抑菌率。

四、实验结果1. 头孢克洛对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为18mm、15mm、13mm。

2. 氨苄西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为12mm、10mm、5mm。

3. 阿莫西林对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为10mm、8mm、4mm。

4. 庆大霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌的抑菌效果较好，抑菌圈直径分别为20mm、18mm、16mm。

5. 红霉素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，抑菌圈直径分别为14mm、12mm、6mm。

1. 头孢克洛、庆大霉素等抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌具有较强的抑菌效果，可作为临床治疗此类细菌感染的首选药物。

2. 氨苄西林、阿莫西林等抗生素对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌效果较好，但对铜绿假单胞菌的抑菌效果较差，临床应用时需注意。