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高级药理学 体外抗菌活性试验_PPT幻灯片

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项目7药物体外抗菌试验技术_PPT幻灯片

项目7药物体外抗菌试验技术_PPT幻灯片
3．酚系数测定
是用来测定消毒剂效力的一种指标，是以石炭酸为标准，在相同的实验条件下， 将消毒剂和石炭酸的杀菌力作比较，所得的杀菌效力的比值，石炭酸系数≥2为合格。
（三）联合抗菌试验法
同时应用两种抗菌药物时，两种药物之间既可能 产生相互影响，也可能彼此不影响；产生影响时，既 可能是相互加强(协同作用)，或两药作用出现累加现 象(即两药作用之和)也可能是相互减弱(拮抗作用)， 要确定两种药物之间的作用关系时，通常需用联合抗 菌试验法。 最简便、最常用的方法：纸条或纸片试验法。
可吸收的止血剂：如凝血酶等用于止血并可被组织吸收的各种 药物制剂。
无菌检查法
（一）直接接种法。若被检品是液体，可直接接种于培养基内。 若被检品是固体粉末或冻干制剂，则需用无菌生理盐水溶解，或制成均匀悬液再作检验。若 被检品是无菌敷料，则以无菌操作打开包装，于各部位剪取1cmX3cm大小的样品，再接种到 培养基中。
(二)体外杀菌试验
用途：评价药物对微生物的致死活性
1．最小杀菌浓度的测定
是取MIC终点以上未长菌的各管培养液，分别取出并移种于无菌平板上，培养后凡 平板上无菌生长的药物最低浓度，即为该药物的MBC。对微生物广义而言，也可称之 为最小致死浓度 (MLC)。某药物能杀死微生物的最低浓度。
2．活菌计数法
在—定浓度的定量药物内，加入—定量的试验菌，作用—定时间后取样稀释，再 取—定量的此稀释液混入未凝固的琼脂培养基中，立即倾注成平板，培养后计算菌落 数。由于每个菌落是由—个菌细胞繁殖而来，则菌落数或菌落形成单位CFU)乘以稀释 倍数，再除以稀释液用量，即得该药物与试验菌的混合液中每毫升内存活的细菌数或 CFU，从而可算出该药物对细菌的致死率。
1、灭活法 ２、薄膜过滤法 ３、离子交换树脂法 4、稀释法

高级药理学 体外抗菌活性试验ppt课件

高级药理学 体外抗菌活性试验ppt课件


液 体 稀 释 法

1.4 试验方法
取灭菌带塞小试管15支，标号，向 第1支试管中加入0.9ml营养肉汤，其余 各管加入0.5ml；然后，向第1支试管内 加入0.1ml药液，混匀后，取出0.5ml加 入第2管内，依次类推至13管，混匀后 吸出0.4ml弃之，另取0.1ml涂于营养琼 脂平板上；然后向1~14管内加入0.5ml 菌液，混匀盖塞后，37℃培养16~18h， 观察。相同过程重复三次。 附：琼脂平板为无菌检查；14管为培养 物对照（接种同数量的细菌，不加药 液）；15管为培养基对照（不加菌，不 加药）。

体 外 抗 菌 活 性 试 验
三、比浊法
2. 步骤 将检品液也稀释成1~3种不同浓度， 加入肉汤菌液培养基中。 将全部试管移至37℃恒温水浴箱 中约3~4h，待细菌充分生长后取 出，用光电比色计测定其透光度， 根据同浓度的读数求出平均值， 然后绘出标准曲线。 将检品管同样求出平均值，根据 标准曲线即可求出被检品的效价。
体 外 抗 菌 活 性 试 验
三、比浊法
2. 步骤 将标准药液稀释成不同稀释度 1:10,1:15,1:20,1:30,1:40。然后于 大小相同的试管内加入8.8mL肉 汤培养基，同时接种试验菌液 0.2mL。取上述已稀释好的标准 稀释液1mL加入肉汤菌液试管中。 此时的稀释倍数为 1:100,1:150,1:200,1:300,1:400

二、扩散法
(二)杯碟法

在已配好的含菌平板上用钢管放 置器均匀分布灭菌不锈钢牛津杯， 用无菌胶头滴管往每个牛律杯中 分别加入稀释为50倍和100倍的 1280µ g/mL待检药品溶液，注意 要做到“满而不溢”。盖上陶瓦 盖放入托盘中，小心地移至培养 箱，37℃培养24h。用游标卡尺精 确测量各个抑菌圈直径（精确到 0.01mm）。

实验4 药物体外抗菌试验_PPT幻灯片

实验4 药物体外抗菌试验_PPT幻灯片
• 今天要用显微镜，请单学号同学去 领显微镜，双学号同学不用领
1、 K—B纸片法（学生操作）
纸片法常用于测定试验菌对各种抗生素 的敏感性，所以又叫做药物敏感试验，在 临床上可作为选择用药的重要依据。
操作步骤
1 培养试验菌：将菌种斜面培养物移种到肉 汤培养液中，37℃培养过夜，使菌液浓度 约为1.5×108cfu/ml.
最小抑菌浓度（MIC）：能抑制测试菌 生长的最低药物浓度即为MIC。
最小杀菌浓度（MBC）：能杀死测试菌 的最低药物浓度即为MBC。
试验测试(1h)
1、革兰氏染色 做好后请用油镜调好后举手示意
2、平板分区画线 做好后做好标记（学号）将平板扔到玻璃 缸中
2 涂布试验菌：用无菌吸管吸取一滴菌液滴 加在MHA平板上，用无菌涂布棒（L棒）将 菌液在整个平板上涂布均匀。
3 贴含药的滤纸片：用无菌镊子贴加含药滤 纸片。Байду номын сангаас
4 将平板倒置于37 ℃培养24h，观察结果， 测定抑菌圈的大小，并对照NCCLS的解释 标准来判断试验菌的药敏性。
2、连续稀释法
连续稀释法：人为配置连续梯度的药物 浓度来检测其抗菌能力，从而找出药物的 最小抑菌浓度。

thweek药学实验四药物的体外抗菌试验

thweek药学实验四药物的体外抗菌试验
。
结果观察与记录
观察抑菌圈
通过观察抑菌圈的大小，初步判断药物的抗菌 效果。
数据记录
详细记录实验过程中的数据，如菌种名称、药 物名称、稀释比例、抑菌圈大小等。
结果分析
根据记录的数据，进行结果分析，计算药物的抑菌率或最小抑菌浓度等指标。
04
数据分析与结论
数据整理与处理
数据收集
收集实验过程中获得的药物抗菌数据，包括不同 药物浓度下的抑菌圈直径、细菌生长曲线等。
展望未来研究方向
根据实验结果和数据分析，展知
实验操作注意事项
实验前应仔细阅读相关文 献，了解实验原理、操作 步骤及注意事项。
在实验过程中，应保持实 验室整洁，避免交叉污染。
确保实验操作符合实验室 安全规定，遵循正确的操 作流程。
实验结束后，应按照实验 室规定正确处理废弃物。
纸片扩散法
将含有不同浓度抗菌药物的纸片贴在接种了细菌的琼脂平板上，观察 抑菌圈的大小，判断药物的抗菌效果。
时间-杀菌曲线法
记录抗菌药物在不同时间对细菌数量的影响，了解药物的杀菌速率和 杀菌效果。
了解抗菌药物的作用机制
大环内酯类
主要抑制细菌蛋白质的合成。
氨基糖苷类
与细菌核糖体结合，抑制蛋白 质合成。
thweek药学实验四药物的 体外抗菌试验
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 数据分析与结论 • 实验注意事项与安全须知
01
实验目的
理解药物体外抗菌试验的原理
药物体外抗菌试验是指在体外条件下，通过实验室方法测试抗菌药物对病原微生 物的抑制或杀灭作用。其原理基于药物对微生物细胞膜、细胞壁、核酸或蛋白质 等生物大分子的影响，从而干扰或破坏微生物的正常生长和繁殖。

药理学PPTPPT课件

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THANKS
感谢观看
吸收
药物通过口服、注射、吸入、皮肤等 途径进入体内，经过消化、血液循环 等过程进入靶部位。
分布
药物在体内通过血液和组织液的交换， 将药物输送到靶部位或组织中。
代谢
药物在体内经过酶的代谢，转化为活 性或无活性的代谢产物。
排泄
药物及其代谢产物通过尿液、胆汁、 汗液等途径排出体外。
药物的作用机制分类
01
基因组学在药理学中的应用
基因组学技术用于研究药物作用机制、药物反应个体差异以及新药靶发现等方面。通过 基因组学研究，可以更深入地了解药物的疗效和不良反应，为个体化用药提供依据。
蛋白质组学在药理学中的应用
蛋白质组学技术用于研究药物与靶点蛋白的相互作用、蛋白质修饰以及蛋白质之间的相 互作用等。通过蛋白质组学研究，可以更准确地揭示药物的作用机制，为新药研发提供
药理学的应用领域
临床医学
药理学在临床医学中具有广泛应 用，医生需要根据患者的病情和 药物的作用机制，选择合适的药
物进行治疗。
药学
药理学在药学中也有广泛应用，药 剂师需要根据药物的性质和作用机 制，合理地选择和使用药物。
公共卫生
药理学在公共卫生领域中也具有重 要作用，通过对流行病学的调查和 研究，可以了解疾病的流行趋势和 防治措施。
有力支持。
药物设计和优化技术的发展
计算机辅助药物设计
利用计算机模拟技术，对药物分子的 结构进行预测和优化，以提高药物的 活性、选择性和药代动力学特性。计 算机辅助药物设计为新药研发提供了 高效、精准的途径。
药物优化技术
通过化学修饰和结构改造等方法，对 现有药物进行优化，以提高药物的疗 效、降低不良反应和降低生产成本。 药物优化技术对于开发新药和改进现 有药物具有重要意义。

体外抗菌实验PPT精选文档

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第二十章 药物的体外抗菌试验
1
药物的体外抗菌试验
药物的体外抗菌试验是在体外测定微 生物对药物敏感程度的试验，
已广泛地应用于科研、生产和临床。如抗菌 药物的筛选、提取过程中的追踪、抗菌谱的定、 药物含量的测定、药物血浓度测定、指导临床用 药的药敏试验等。
抗菌试验包括抑荫试验和杀菌试验。
抑菌：即抑制微生物的生长繁殖，但不能杀死微 生物，在药物除去后微生物又能生长. 杀菌：即能杀死微 生物，当药物除去后，微生 物也不能再生长繁殖。
2
第一节 常用的体外抑菌试验
连续稀释法：
可用于测定药物的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀 菌浓度(MBC)。可以用液体培养基，也可用固体培 养基。
1．液体培养基连续稀释法 2．固体培养基连续稀释法
分平板法和斜面 法。
3
琼脂扩散法：
是利用药物可以在琼脂培养基中扩散，在药 物有效浓度的范围内形成抑菌圈或抑菌距离，以 抑菌圈直径或抑菌距离的大小来评价药物抗菌作 用强弱。
7
第三节 联合抗菌试验
在药学上作中，常需检查两种抗菌药物 在联合应用时的相互作用以及抗菌药物与不 同pH值或不同离子溶液的相互影响。如加强 药物抗菌作用的为协同(synergism)；减弱药 物作用的为拮抗(antagonism)；相互无影响的 为无关(indjfference)；作用为二者之和的为累 加(addition)。
8
纸条试验
即在已接种试验菌的平板表面垂直放置两条各浸有 一种药液的滤纸条，培养后根据抑菌区的加强、减弱或 无影响来判断它们在联合应用时的效应。
梯度平板纸条试验
需先制备含药的梯度平板。将试验菌悬液涂布于 平板表面，取滤纸条浸透另一待检药液，按梯度平板 中药物浓度递减的方向置于平板表面。培养后，如该 待检药液对平板内的药物有加强作用，则可见沿纸条 两边的抑菌区被扩大。

药物的抗菌试验

药物的抗菌试验

药物的抗菌试验
•药物及浓度
•
•链霉素 •（µg／ml）
•
64
•
32
•
16
•
8
•
4
•青霉素G单药对照
青霉素G(IU／m1) 4 2 1 0.5 0.25
-- -- -- -- -- -- -
---++ ++ ++
链霉素单药对照
+ + 细菌对照
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•-：无细菌生长 +：有细菌生长 •FIC指数=1／1+16／16=2——无关
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药物的抗菌试验
பைடு நூலகம்
•三、影响抗菌试验的因素
•1. 菌种 • 在抗菌试验中所用到的菌种，必需是国 家卫生部生物制品检定所菌各保藏中心专门提 供的标准菌株。在特殊情况下，也可以采用临 床新分离的并经过鉴定、纯化及合理保藏的菌 株。而且我们要用到的试验菌种应该选择是对 数期生长的菌。因为那时菌种生命力最旺盛， 这对于我试验测定的结果也会准确些。
•在进行棋盘法之前应先测定两种抗菌药物单独对受 试菌的MIC，然后以两药MIC的8倍、4倍、2倍、1倍 以及MIC的1/2、1/4、1/8浓度（或4倍、2倍、1倍、 1/2、1/4浓度）分别进行联合。可见举例，如表—1的 青霉素G与链霉素联合药敏实验和表2的TMP+SMZ的 联合作用。
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药物的抗菌试验
•器材及试剂: •药敏片：含各种抗生素的市售产品 •培养基平板：普通牛肉膏蛋白胨固体培养基，待 检细菌的培养物。 •眼科镊、无菌棉拭子、酒精灯等。
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药物的抗菌试验

实验4药物体外抗菌试验PPT课件

实验4药物体外抗菌试验PPT课件
考虑药物浓度的影响
在解读结果时，需要考虑药物浓度对抑菌效果的影响。一般来说，药物浓度越高，抑菌效 果越好。因此，在比较不同药物或不同浓度时，需要确保实验条件的一致性。
结合临床实际
在解读结果时，需要结合临床实际考虑药物的抗菌效果。例如，对于某些临床常见细菌， 如果实验结果显示药物具有较好的抗菌作用，那么该药物可能对治疗该细菌感染具有一定 的应用价值。
头孢菌素类
具有广谱抗菌作用，对革 兰氏阳性菌和阴性菌均有 较强抗菌活性。
碳青霉烯类
具有非常强的抗菌作用， 对大多数细菌均有较好的 抗菌效果。
大环内酯类
红霉素
主要对革兰氏阳性菌有抗菌作用 ，对部分革兰氏阴性菌和支原体 也有效。
阿奇霉素
具有广谱抗菌作用，对革兰氏阳 性菌、革兰氏阴性菌和支原体均 有较好抗菌效果。
避免不良反应
联合用药可能会增加不良反应的风险，因此应谨 慎选择药物组合。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
稀释法
总结词
稀释法是通过连续稀释抗菌药物浓度， 观察细菌生长情况，从而判断细菌对 抗菌药物的敏感程度。
详细描述
稀释法是将抗菌药物稀释成不同浓度， 然后将不同浓度的抗菌药物与细菌混 合培养。通过观察细菌的生长情况， 可以判断细菌对抗菌药物的敏感程度。
E-test法
总结词
E-test法是一种基于纸片扩散法的改良方法，通过在平板上涂布抗菌药物的纤维棒，测量抑菌圈的大小判断细菌 对抗菌药物的敏感程度。
测定药物能够抑制细菌生长的最低浓 度，是衡量药物抗菌效果的重要指标。 MIC值越低，说明药物抗菌效果越好。
细菌生长情况
观察细菌在药物作用下的生长情况， 可以评估药物的抗菌效果。如果细菌 生长受到明显抑制，说明药物具有较 好的抗菌作用。

实验三_药物敏感试验和消毒灭菌ppt课件

实验三_药物敏感试验和消毒灭菌ppt课件

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12
长期使用抗生素的病人应该怎样做
药敏试验？
长期使用抗生素的病人尤其是住院病人应该经常做药敏试
验。所谓的长期，并不是一个很长的时间概念，住院病人每隔 3-4天就需要做一次细菌学检查。对于ICU病房的病人，可能每
天都要做细菌学检查。因为这些病人多数免疫力较差，容易受
条件致病菌的侵犯，而且反复发作。此外病原菌常呈多重耐药 性，产超广谱β-内酰胺酶的G-杆菌（ESBL）以及耐甲氧西林葡 萄球菌（MRSA和MRSCN）、产AmpC酶的阴沟肠杆菌、铜绿假单胞 菌在ICU病房最为常见。对于长期使用抗生素的病人，其感染有
– 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测 – β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等
完整版课件
6
五、纸片扩散法（K菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周 围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度 范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
细菌接种量
细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏 药物的抗菌活性。
药物浓度
药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药 应严格按照其推荐治疗量配制。
培养时间
一般培养温度和时间为37℃ ，8-18小时，有些抗菌药扩散慢如多粘 菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时 ，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的 生长，而得到较大的抑菌圈。
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8
注意事项
1 纸片应分布均匀，中心距离不小于24mm。 2 含菌平板必须避免过浓或过稀。 3 纸片贴完后应在15min内将平板反过来，置于
37度温箱中。 4 纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。 5 要注意无菌操作。

药物的抗菌试验

药物的抗菌试验

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药物的抗菌试验
FIC指数 0 ． 5为协同作用；0．5－1为相加 作用； 1～2为无关作用；＞2为拮抗 作用。
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药物的抗菌试验
•[棋盘法的设计] •棋盘法的主要优点在于甲、乙两药的每个药物浓度 都有单独的和与另一个药物不同浓度的联合，因此能
精确测定两种抗菌药物在适当浓度的比例下所产生的 相互作用。
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药物的抗菌试验
•三、影响抗菌试验的因素
•1. 菌种 • 在抗菌试验中所用到的菌种，必需是国 家卫生部生物制品检定所菌各保藏中心专门提 供的标准菌株。在特殊情况下，也可以采用临 床新分离的并经过鉴定、纯化及合理保藏的菌 株。而且我们要用到的试验菌种应该选择是对 数期生长的菌。因为那时菌种生命力最旺盛， 这对于我试验测定的结果也会准确些。
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药物的抗菌试验
•二、药物的体内抗菌试验
• 药物的体内抗菌试验又称为动物实验治疗试验或保 护力试验。当抗菌药物进入机体后，其效力的发挥要受 体内各种因素的影响。如血液及组织内的蛋白质或磷脂、 脓汁内的核酸均与药物结合，降低药物的活性；坏死组 织内的酸性环境也能影响药物的活性。机体内的微生物， 代谢活动较低，对药物的敏感性降低，有时还可形成细 胞壁缺陷型细菌，对某些药物不敏感。机体内各组织中 药物的吸收，分布不同，使药物的浓度难以恒定。因此 在评定新药的药效时除做体外抗菌试验外还需要做体内 的抗菌试验。
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药物的抗菌试验
•1. 活菌计数法 •将定量的试验菌加入到一定浓度的定量药物中，作 用一定时间后，取样进行活菌数计数，从存活的微生 物数量计算出药物对试验菌的致死率，从而判断药物 的杀菌能力。 •活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作用后混合 液稀释后，混入琼脂培养基做成平板，培养后数平板 上形成的菌落数，由于一个菌落是由一个细菌繁殖而 来的，所以可以用菌数乘以稀释倍数，计算出混合液 中存活的细菌数。或者也可以用微孔滤膜过滤药物与 试验菌的混合液，洗净药液，将滤膜放在平板上培养 后数菌落数。

《兽医药理学综合实验》教学课件：实验13 抗菌药的体外抑菌作用

《兽医药理学综合实验》教学课件：实验13 抗菌药的体外抑菌作用

移液枪 200 µL ，共8支
灭菌枪头 200 µL，共8盒
酒精灯 8个
37±1℃恒温培养箱
操作步骤
1、抗菌药物的配制 ➢ 抗菌药物原液的配制：配制各种抗菌药物原液的溶剂和 稀释剂应根据药物理化性质与抗菌活性而定。原液浓度 常为测定最高浓度的10倍以上。肉汤稀释法常用原液浓 度为1280 µg/ml ，琼脂稀释法用的原液浓度为5120 µg/ml 。 ➢ 大部分原液-20℃可保存3个月，4℃保存1周。 ➢ 测定浓度范围：包括质控标准菌株的MIC，一般128 µg/ml 为测定浓度上限 。
抗菌药原液的配制与保存期限
抗菌药
青霉素类 头孢菌素类
氨基苷类 四环素类 林可胺类
磺胺类
红霉素
溶剂
浓度 (µg/mL)
pH6.0磷酸盐缓冲液 1280
pH6.0磷酸盐缓冲液 1280
pH7.8磷酸盐缓冲液 1280
pH4.5磷酸盐缓冲液 1280
pH7.8磷酸盐缓冲液 1280
用NaOH溶解再用蒸馏 水稀释
• 3、涂布平板：
➢ 用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多 余的菌液旋转挤去；
➢ 在MH琼脂平板上均匀涂布接种3次，每次 旋转平板60度；
➢ 最后沿平板内沿涂抹1周，盖子半开室温 放置3-5min，待干。注意：涂布均匀、 致密。
4、放置药敏纸片
➢ 将镊子通过酒精灯火焰灭菌，待冷却后，用此镊子夹 取不同药敏纸片，按一定间隔贴在琼脂表面，各纸片 中心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
➢ 一般140 mm平板放置纸片不超过12个，100mm平板不超 过5个纸片
5、孵育 ➢ 放置好纸片15min内倒置平板并将其置于35±2 ℃

第二十章药物制剂的微生物学检查_PPT幻灯片

第二十章药物制剂的微生物学检查_PPT幻灯片

（三）联合抗菌试验
联合抗菌试验主要用于测定两种抗菌药 物联合应用时的相互影响。两种抗菌药联合 应用时抗菌作用加强的称为协同作用；抗菌 作用减弱的称为拮抗作用；相互无影响的称 为无关。常用的联合抗菌试验的方法有以下 几种。
出现4种结果： ①无关作用小，两种药物联合作用的活性
等于其单独活性； ②拮抗作用，两种药物联合作用显著低于
2、 培养基
试验所有到的培养基应按各试验菌的营养 要求进行配制，严格控制各种原料、成分的质 量及培养基的配制过程。要注意当有些药物具 有抗代谢作用时，培养 应不能存在代谢物， 否则抑菌作用将会被消除。培养基内如果含有 血清等蛋白质时，有可能与某些抗菌药物结合， 使抗菌药物失去，所以就要避免培养基混进这 类营养物。
(2)挖沟法 (3)打孔法
（二）体外杀菌试验 杀菌试验是用来评价药物对微生物的致
死活性的。 1、最低杀菌浓度（MBC）（最小致死浓
度MLC）的测定 按液体培养基稀释法的操作方法测定药
物的MIC。然后把未长出菌的各个试管培养液 分别移种到无菌平板上，培养后凡是平板上 无菌生长的药物最低浓度就是最小致死浓度 （MLC）。如果是细菌的话可以称为最小杀菌 浓度（MBC）。
二、药物的体内抗菌试验
药物的体内抗菌试验又称为动物实验治疗试验或保 护力试验。当抗菌药物进入机体后，其效力的发挥要 受体内各种因素的影响。如血液及组织内的蛋白质或 磷脂、脓汁内的核酸均与药物结合，降低药物的活性； 坏死组织内的酸性环境也能影响药物的活性。机体内 的微生物，代谢活动较低，对药物的敏感性降低，有 时还可形成细胞壁缺陷型细菌，对某些药物不敏感。 机体内各组织中药物的吸收，分布不同，使药物的浓 度难以恒定。因此在评定新药的药效时除做体外抗菌 试验外还需要做体内的抗菌试验。

实验六抗菌药物的体外药效试验

实验六抗菌药物的体外药效试验

实验六抗菌药物的体外药效试验文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-实验六、抗菌药物的体外药效试验（药敏试验）各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选最有疗效的药物，用于临床对控制细菌性传染病的流行至关重要。

此外，通过药物敏感试验可为新抗菌药物的筛选提供依据。

药敏试验的方法很多，普遍使用的有滤纸片扩散试验（Kirby-Baueer Dice Diffusion）；最低抑菌浓度试验（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）和最低杀菌浓度试验（Minimum Bactericidal Concentration, MBC）。

［目的要求］1、熟悉体外抗菌试验操作技术。

2、掌握药物抗菌能力体外测定的常用方法及其用途。

［实验原理］常用的体外测定药物抑菌能力的方法有两大类：琼脂渗透法与浓度系列稀释法。

琼脂渗透法时利用药物能够渗透至琼脂培养基的性能，将实验菌混入琼脂培养基后倾注成平板；或将试验菌均匀涂于琼脂平板的表面，然后用不同的方法将药物置于已含试验菌的琼脂平板上。

根据加药的操作方法不同而有滤纸片法、打洞法、管碟法及挖沟法等。

经适宜温度培养后观察药物的抑菌能力。

浓度系列稀释法时把药物稀释成不同的系列浓度，混入培养基内，加入一定量的试验菌，经适宜温度培养后观察结果，求得药物的最低抑菌浓度（MIC）。

1、细菌：所用细菌应包括主要致病菌。

革兰氏阳性球菌包括金黄色葡萄球菌(产酶与不产酶菌株)、表皮葡萄球菌，链球菌、肠球菌等。

革兰氏阴性球菌如淋球菌等。

革兰氏阴性杆菌包括流感杆菌、肠杆菌科细菌8～10种，绿脓杆菌与其它假单孢菌属及不动杆菌属等，厌氧菌包括脆弱类杆菌、消化球菌和消化链球菌等。

对临床应用有代表性的菌株数量，创新药应不小于1000株。

其它类新药根据新药抗菌谱宽窄可作200-500株。

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菌
大小相同的试管内加入8.8mL肉
活 性
汤培养基，同时接种试验菌液 0.2mL。取上述已稀释好的标准 稀释液1mL加入肉汤菌液试管中。
试
此时的稀释倍数为
验
1:100,1:150,1:200,1:300,1:400
三、比浊法
体
外
2. 步骤 将பைடு நூலகம்品液也稀释成1~3种不同浓度，
抗
加入肉汤菌液培养基中。
体 一、稀释法
外 （一）液体稀释法
抗 试管液体二倍稀释法
菌
活
1.1菌液的制备
性
试
将原菌液稀释，使之含菌数为 105个/mL。
验
液
1.2 药液的制备
体
准确称取各药用双蒸水溶
稀
解于10mL容量瓶内定容，使终
释
浓度为1280μg/mL，分装，贴 签，密封，4℃保存备用。
法
1.3 培养基的制备 营养肉汤、营养琼脂
菌
将全部试管移至37℃恒温水浴箱 中约3~4h，待细菌充分生长后取
活
出，用光电比色计测定其透光度，
性
根据同浓度的读数求出平均值， 然后绘出标准曲线。
试 将检品管同样求出平均值，根据
验
标准曲线即可求出被检品的效价。
菌液，混匀盖塞后，37℃培养16~18h，
观察。相同过程重复三次。
附：琼脂平板为无菌检查；14管为培养
物对照（接种同数量的细菌，不加药 液）；15管为培养基对照（不加菌，不 加药）。
一、稀释法
稀 (二)固体稀释法
释 2. 平皿稀释法
取平皿13只,加入不同浓度的药液
法
各1mL,第1~12平皿各加融化的普
性
要做到“满而不溢”。盖上陶瓦 盖放入托盘中，小心地移至培养
试
箱，37℃培养24h。用游标卡尺精
验
确测量各个抑菌圈直径（精确到 0.01mm）。
体 二、扩散法
外
抗
结果判定
菌
抑菌圈直径均值：
活
＞20mm为高敏药物
性
19mm～15mm为中敏药物
试
15mm～10mm为轻敏药物
验
＜10mm为抗药（不敏感）
活
药敏纸片按一定间隔均匀贴到琼 脂表面，每个平板放5张药敏纸片，
性
37℃培养24h。观察结果，用游标
试
卡尺测定抑菌圈直径。
验
体 外
二、扩散法
(二)杯碟法
在已配好的含菌平板上用钢管放
抗
置器均匀分布灭菌不锈钢牛津杯，
菌
用无菌胶头滴管往每个牛律杯中 分别加入稀释为50倍和100倍的
活
1280µg/mL待检药品溶液，注意
通琼脂培养基9.0mL，第13平皿作
为对照不加药，加入10mL培养基，
均匀摇动使其与药液合一。待琼
脂凝固、表面干燥后接种试验菌。 置37 ℃培养24~48h，观察结果，求出
MIC。
体 外
二、扩散法 (一)纸片法
用灭菌棉签（弯玻棒）将菌液均
抗
匀涂抹于普通琼脂平板。待琼脂
菌
表面干燥后，用灭菌镊子取各种
液
1.4 试验方法
体
取灭菌带塞小试管15支，标号，向 第1支试管中加入0.9ml营养肉汤，其余
稀 释
各管加入0.5ml；然后，向第1支试管内 加入0.1ml药液，混匀后，取出0.5ml加 入第2管内，依次类推至13管，混匀后
法
吸出0.4ml弃之，另取0.1ml涂于营养琼 脂平板上；然后向1~14管内加入0.5ml
体 三、比浊法
外 1. 原理
抗 细菌生长的浑浊度可以用透光度
菌
表示，则log透光度与一定范围内 的抗菌药的剂量呈直线关系，可
活
以制得标准曲线。
性 同样，被测药物所引起的抑制细
试
菌生长程度也可以用log透光度表
验
示。带入曲线方程可得对应的 MIC。
体
三、比浊法
外
2. 步骤
抗
将标准药液稀释成不同稀释度 1:10,1:15,1:20,1:30,1:40。然后于