不同Waxy基因型水稻的遗传多样性

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研究报告RESEARCHREPORT

不同Waxy基因型水稻的遗传多样性何风华 曾瑞珍 席章营 AkshayTalukdar 张桂权3华南农业大学植物分子育种研究中心,广州,510642

3通讯作者,gqzhang@scau1edu1cn

摘要利用均匀分布于水稻基因组的238个微卫星标记对包含15种Waxy复等位基因的41个水稻品种(系)的遗传多样性进行了分析。结果表明有221对SSR引物在供试材料间检出多态性,共检出1156个

等位基因,平均每个座位可检出5123个等位基因;各个座位的多态信息量(Polymorphisminformation

content,PIC值)的变幅为0105-0189,平均PIC值为0159。聚类分析结果表明:41个供试品种(系)明显地聚为两大类群,分别对应于籼亚种和粳亚种,不同(CT)重复次数的品种(系)在两大类群中有明显的分布规律:(CT)重复次数较少(n=8、10、11和12)的品种(系)只出现在籼稻类群中,粳稻类群的重复次数相对较多(n=14-21),而(CT)17和(CT)18的品种(系)中既有属于籼稻类群的,又有属于粳稻类群的;Waxy基因第一内含子5′端剪切位点上的G-T单核苷酸多态与籼粳分类没有直接联系。41个品种(系)之间的遗传相似系数介于0113-0188之间,平均相似系数为0135。Waxy座位上丰富的等位基因,以及品种间较高的遗传多样性,为水稻的品质育种提供了丰富的种质资源。

关键词水稻,直链淀粉含量,蜡质基因,微卫星标记,遗传多样性

GeneticDiversityofDifferentWaxyGenotypesinRiceHeFenghua ZengRuizhen XiZhangying AkshayTalukdar ZhangGuiquan3Plantmolecularbreedingresearchcenter,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou,5106423Correspondingauthor,gqzhang@scau1edu1cn

AbstractGeneticdiversityof41ricecultivarscontaining15multiallelesatthewaxylocus,wereinvestigatedusingtwohun2dredsandthirty-eightSSRmarkerswhichdistributedevenlyon12ricechromosomes.Twohundredsandtwenty-onepolymorphicmarkersdetected1156alleles,withanaverageof5123allelesperSSRlocus.ThePIC(Polymorphismin2formationcontent)valueofthepolymorphicmarkersvariedfrom0105to0189,withanaverageof0159.Throughclusteranalysisbasedonthe238SSRmarkers,the41cultivarscouldbeclassifiedintotwodistinctgroups,whichcorre2spondedtotheindicaandjaponicasubspecies,respectively.Atthewaxylocus,lower(CT)nrepeats(n=8,10,11,12)werefoundonlyinindicavarietieswhilejaponicavarietiescontainedhigher(CT)nrepeats(n=14-21),but(CT)17and(CT)18allelesoccurredbothinindicaandjaponicavarieties.G-TpolymorphismattheWaxyleaderintron5′splicesitewasnotcorrelatedwiththeclassification.Geneticsimilaritycoefficientamong41cultivarsranged

分子植物育种,2003年,第1卷,第2期,第179—186页MolecularPlantBreeding,2003,Vol11,No12,179—186

from0113to0188.Themultipleallelesatthewaxylocusandthegeneticdiversityinthevarietiesprovideabaseforgrainqualityimprovementinrice.

KeywordsRice,Amylosecontent,Waxygene,SSRmarker,Geneticdiversity

1前言稻米直链淀粉含量(AmyloseContent,AC)是稻米加工和食用品质的一项重要指标。稻米直链淀粉含量的遗传主要受水稻蜡质基因座位Waxy(Wx)控制(申岳正等,1990;黄超武等,1990),这个基因被定位

在六号染色体的短臂上,稻米的另外两个品质性状稻米胶稠度和糊化温度也与Wx基因或与其紧密连锁的区域有关(Tanetal1,1999)。Sano等(1986)最先用RFLP标记对Wx基因的遗传变异性进行了研究,他们在非糯性品种中检测到了Wxa和Wxb两个等位基因,这两个等位基因在水稻的两个亚种中出现了明显的分化:籼稻(包括野生稻)中以Wxa为主,

而粳稻中以Wxb为主,Wxa品种的直链淀粉含量比Wxb品种的高。

简单重复序列(simplesequencerepeats,SSR)又称微卫星DNA标记,由于具有多态性高,可靠性高,实验操作简单、方便、快捷等特点(Mc2Couchetal1,2001),在水稻遗传连锁图谱构建(Temnykhetal1,2000;2001),基因定位(Liet

al1,2002),品种遗传多样性研究(Yangetal1,1994)和水稻分子标记辅助选择育种(张泽民和

张桂权,2001)等领域得到了广泛应用。Bligh等(1995)最先发现在Wx基因第1内含子5′端剪切

位点上游55bp处有一个简单重复序列,并设计了微卫星标记引物对484/485,他们在13个品种中发现了4种(CT)重复次数的变异,并且首次证明了这个标记在水稻品质育种中的应用价值。Aryes等(1997)运用这个微卫星标记在92个美国水稻品种中检测到了8种等位性变异,这些变异可以解释其中89个非糯品种直链淀粉含量变异的8219%,并且发现在Wx基因第一内含子5′端剪切位点上存在一个单核苷酸位点G-T的变异,

这一变异可以用AccⅠ酶切检测:高AC的为G,

可以被AccⅠ酶切;低AC的为T,不能被AccⅠ酶切。舒庆尧等(1999)在中国的74个非糯品种

检测到了7种(CT)n多态性,可以解释其直链淀粉含量变异的9112%,并且发现不同(CT)n在籼粳亚种间的分布存在较大差异。Tan等(2001)在74个水稻品种中检测到了8个等位基因,他们发现这些等位基因在籼粳亚种间有很明显的分布规律,还认为SSR变异与直链淀粉的含量之间存在近乎完全的相关性。曾瑞珍等(2001)利用微卫星标记在来源非常广泛的243个水稻品种(系)中检测到了15种Wx复等位基因,其中包括12种(CT)重复次数的变异(n=8,10,11,12,14,15,16,17,

18,19,20,21);在(CT)16、(CT)17和(CT)18

三种等位基因中都包括能被AccⅠ酶切和不能被

AccⅠ酶切的等位性变异,而其余9种(CT)重复次数的等位基因都能被AccⅠ酶切。本研究利用SSR标记对包含有这15种Wx复等位基因的41份材料的遗传多样性进行了研究,对这些材料的遗传距离和亲缘关系进行了分析;并且探讨了不同Wx等位基因在水稻两个亚种间的分布,以期为今后水稻的品质育种提供依据。

2材料和方法211实验材料研究材料共41个,包括38个非糯品种和3

个糯性品种,分别来自13个不同的国家,具有广泛的代表性。这些材料的名称,编号和来源详见表1。这41份供试材料包含了Wx座位的15种等位基因,其中有12种(CT)重复次数的变异,另三种为(CT)16、(CT)17和(CT)18中的G-T变异(曾瑞珍等,2001)。

212实验方法21212SSR标记的选择根据Temnykh等(2000,2001)发表的微卫星标记图谱选择均匀分布于12条水稻染色体的238个

180

分子植物育种MolecularPlantBreeding表1 41个供试水稻品种(系)的名称、来源及Waxy基因型Table1Theoriginandmicrosatellitegenotypesof41varieties

代号Code品种Variety来源Origin(CT)nG-T多态G-Tpolymorphism

1华粳籼74Huajingxian74中国China11G2Tetep越南Vietnam8G3Amol3(Sona)伊朗Iran10G4中4188Zhong4188中国China10G5BG367孟加拉国Bangladesh10G6Zihui100中国China12G7Katy美国U.S.A14G8苏御糯Suoyunuo中国China16T9IR64菲律宾Philippines(IRRI)17G10Basmati385巴基斯坦Pakistan17G11南洋占Nangyangzhan中国China17G12Basmati370巴基斯坦Pakistan17G13IR58025B菲律宾Philippines(IRRI)17T14江西丝苗Jiangxi-Si-Miao中国China17T15联鉴33lianjian33中国China17T16美国茉莉稻Americanjasminerice美国U.S.A17T17赣香糯Ganxiangnuo中国China17T18IRAT261尼日利亚Nigeria18T19Kyeema澳大利亚Australia18T20成龙水晶米Chenglongshuijingmi中国China18T21IR65598-112-2菲律宾Philippines(IRRI)19G22Khazar伊朗Iran20G23Lemont美国U.S.A20G24Starbonnet99美国U.S.A20G25IAPAR9巴西Brazil20G26IR66897B菲律宾Philippines(IRRI)15G27IR66167-27-5-1-6菲律宾Philippines(IRRI)18G28Co43印度India8G29急稻Ji-dao中国China12G30花壳仔Hua-ke-zi中国China12G31Alan美国U.S.A14G32Puntal西班牙Spain14G33Cuil印度尼西亚Indonesia15G34寸谷糯Cungunuo中国China16T35Nutsuriwai印度尼西亚Indonesia16G36N29印度尼西亚Indonesia16G37IR64a菲律宾Philippines(IRRI)18G38Calotoc美国U.S.A18G39元子2号Yuan-zi2中国China21G40恩稻5号Endao5中国China11G41谷农矮23Gunongai23中国China11G