高效液相色谱法检测水中5种微囊藻毒素
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《生活饮用水卫生标准》GB5749- 项目解读微囊藻毒素(1)1 概述微囊藻毒素藻毒素主要的结构特征为N-甲基脱氢丙氨酸及两个L-氮基酸残基x和Z,根据1988年制定的微囊藻毒素(Microcystins或MCYST)命名法规定.x,Z二残基的不同组合由代表氨基酸的字母后缀区分。
常见的有LR,RR,YR三种毒素,L,R,Y分别代表亮氨酸,精氨酸,酪氨酸。
微囊藻毒素的一般结构为环(D-丙氨酸-L-X-赤-β-甲基-D-异天冬氨酸-L-Z—Adda-D-异谷氨酸-N-甲基脱氢丙氨酸),其中Adda(3氨基9-甲氨基2,6,8-三甲基10-苯基-4,6-二烯酸)是微囊藻毒素生物活性表达所必须的。
已证实微囊藻毒素是一种肝毒素,能抑制蛋白质磷酸酯酶,从而帮助解除对细胞增殖的正常的制动作用,促进肿瘤的发育。
微囊藻毒素虽然主要存在于藻细胞中.但研究表明藻细胞死亡解体后·不断有藻毒素释放到水体,对人类的饮用水源造成危害,已证明某些地区的肝癌高发率与饮用水源中的水华大量发生有关。
微囊藻毒素是一类具生物活性的单环七肽,这类毒素主要由淡水藻类铜绿微囊藻(Microcystins aeruginosa)产生,此外其他种类的微囊藻,如绿色微囊藻(M.viridis)、惠氏微囊藻(M.wesenbergii)以及鱼腥藻(Anabaena)、念珠藻(Nostoc)、颤藻(Oscillatoria)的一些种或株系也能产生这类毒素。
目前所检测到的微囊藻毒素异构体已超过50多种。
微囊藻毒素有不同的脂多糖和极性.毒性也不同,微囊藻毒素-LR是最早被阐明化学结构的藻毒素.在对藻毒素的研究中也多以它作为研究对象。
它是一个环状的7肽分子,分子量约为1000道尔顿,许多国家出现的由藻毒素引发的事件大都与微囊藻毒素-LR有关。
2 分析方法测量水体中微囊藻毒素的总量(包括所有种类,而非仅仅微囊藻毒素-LR)是很重要的。
酶联免疫法(ELISA)是一种灵敏度很高适合微囊藻毒素的检测方法。
高效液相色谱法测定水中微囊藻毒素
廖楠
【期刊名称】《资源节约与环保》
【年(卷),期】2016(0)4
【摘要】微囊藻毒素本身含有七肽类干毒素成分,促癌作用极为明显,容易为居民用水带来较大威胁。
对此问题,较多学者致力于构建相应的检测体系,使水中的微囊藻毒素得以确定,而所选用的检测方法主要以高效液相色谱为主,其可依托于自身重现性、灵活性以及准确性等优势,使微囊藻毒素测定更为精确。
本文主要通过一定的试验方式,判断微囊藻毒素测定中高效液相色谱法的有效性。
【总页数】1页(P63-63)
【作者】廖楠
【作者单位】辽宁省环境监测实验中心辽宁沈阳 110161
【正文语种】中文
【相关文献】
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2.高效液相色谱法测定饮用水中微囊藻毒素(MC-LR)的研究
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4.提高固相萃取-高效液相色谱法测定水中微囊藻毒素回收率方法研究
5.固相萃取-高效液相色谱法测定地表水中的微囊藻毒素-LR的方法优化
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分析检测固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定海产品中微囊藻毒素和鱼腥藻毒素吕晓静,鞠光秀,曲 欣,汪 勇,于红卫*(1.青岛市疾病预防控制中心/青岛市预防医学研究院,山东青岛 266033;2.岛津企业管理(中国)有限公司,北京 100020)摘 要:目的:建立固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定海产品中7种微囊藻毒素和2种鱼腥藻毒素的方法。
方法:样品经80%乙腈提取,HLB小柱净化后,采用MRM模式进行分析,外标法定量。
结果:7种微囊藻毒素和2种鱼腥藻毒素在0.5~50.0 μg·L-1范围内线性关系良好,检出限为0.3 μg·kg-1,回收率为75.5%~98.8%,相对标准偏差在1.5%~5.4%。
结论:该方法重现性较好、灵敏度高、成本低,可以实现海产品中的鱼腥藻毒素和微囊藻毒素的同时检测。
关键词:微囊藻毒素;鱼腥藻毒素;固相萃取(SPE);高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)Simultaneous Determination of Microcystins and Anatoxins in Marine Products by High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry with SolidPhase ExtractionLYU Xiaojing, JU Guangxiu, QU Xin, WANG Yong, YU Hongwei*(1.Qingdao Municipal Center For Disease Control & Prevention/Qingdao Institute of Preventive Medicine, Qingdao266033, China; 2.Shimadzu (China) Co., Ltd., Beijing Branch, Beijing 100020, China) Abstract: Objective: A method for simultaneous determination of 7 microcystins (MCs) and 2 Anatoxins (AnTXs) in marine products was achieved by solid phase extraction (SPE)-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). Method: The sample was extracted with 80% acetonitrile, purified by HLB small column, analyzed using MRM mode, and quantified using external standard method. Result: The linear ranges for 7 MCs and 2 AnTXs were 0.5~50.0 μg·L-1. The limits of detection were 0.3 μg·kg-1. The recoveries of the 7 MCs and 2 AnTXs spiked in blank marine products ranged from 75.5% to 98.8% with the relative deviations of 1.5%~5.4%. Conclusion: The method has the advantages of good reproducibility, high sensitivity and low cost, and can achieve simultaneous detection of fishy algae toxins and microcystins in seafood.Keywords: microcystin; anatoxin; solid phase extraction (SPE); high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS)微囊藻毒素(Microcystins,MCs)和鱼腥藻毒素(Anatoxins,AnTXs)是两种典型的蓝细菌毒素[1]。
富营养化原水中微囊藻毒素分析与去除方法及氧化降解机制研究富营养化原水中微囊藻毒素分析与去除方法及氧化降解机制研究导言:水是人类生存和发展的基本需求,但随着人口增长和工业发展,水资源的污染日益严重。
由于人为活动和环境因素的影响,水中微囊藻毒素的污染问题日益突出。
微囊藻毒素是一类由蓝藻属和绿藻属产生的环境毒素,对人体健康和生态系统安全带来严重影响。
因此,开展富营养化原水中微囊藻毒素的分析与去除研究具有重要意义。
一、富营养化原水中微囊藻毒素的分析方法微囊藻毒素具有高毒性和易溶于水的特点,因此需要对富营养化原水中的微囊藻毒素含量进行准确测定。
目前常用的微囊藻毒素分析方法主要包括酶联免疫吸附测定法、高效液相色谱法、质谱法等。
其中,酶联免疫吸附测定法通过抗原与微囊藻毒素结合反应来检测样品中微囊藻毒素的含量,具有灵敏度高、重复性好的优点。
高效液相色谱法和质谱法则可以实现对微囊藻毒素的定性和定量分析。
二、富营养化原水中微囊藻毒素的去除方法针对富营养化原水中微囊藻毒素的去除问题,研究人员提出了多种方法,包括物理方法、化学方法和生物方法。
物理方法主要包括超滤、活性炭吸附等,可以实现对微囊藻毒素的去除和分离。
化学方法主要包括氧化法、还原法等,通过氧化剂或还原剂来分解和去除微囊藻毒素。
生物方法则是利用微生物对微囊藻毒素进行生物降解。
三、氧化降解机制研究氧化降解微囊藻毒素是当前研究的热点之一。
通过对微囊藻毒素的化学性质和降解机制的研究,可以实现高效、快速而环境友好的微囊藻毒素去除。
目前常用的氧化降解方法主要包括过氧化氢氧化法、高级氧化过程(AOPs)等。
过氧化氢氧化法通过添加过氧化氢来氧化降解微囊藻毒素,具有简单、经济的特点。
而AOPs则是基于光化学原理,通过紫外光、臭氧等来产生高级氧化物并分解微囊藻毒素。
这些方法在微囊藻毒素去除中显示出了较好的效果。
结论:富营养化原水中微囊藻毒素的分析和去除是解决水资源污染问题的重要研究方向。
关于微囊藻毒素的调查与分析--食品安全与卫生论文我们每个人,每天都需要依靠食物来提供能量继续生存下去,甚至于世界上所有生命都需要食物,而且每一刻都在某个地方存在进食的现象,俗话也说“民以食为天”。
所以,食物,在整个社会历史发展中都是尤为重要的,自然而然的,食品安全与卫生检测就是攸关生死的大事了,对于食物中所含毒素的研究,也显得尤为重要了。
通过学习这门通识课,我学到很多,也发现其中乐趣之多,感到这门课非常值得学习。
既然我是水产学院的一员,相对而言就对水产品更为熟悉,所以就选择调查分析一些常见的食品鱼类所含毒素。
作为满足人类食物要求的重要产业,淡水水产养殖业在不断扩大规模的同时,也给养殖区域的水环境带来严重后果。
2001年7、11月有人对太湖水域进行调查,发现次生代谢产物——微囊藻毒素MC对水体环境和人类健康构成巨大威胁。
采自太湖的28尾淡水鱼体内均检出MC,其中,肝脏中MC含量远远高于肌肉中含量。
肝脏中含量最高的是鲤鱼、鲢鱼和鳙鱼,肌肉中最高的是鲢鱼和鳙鱼。
间接证明我国局部地区人群肝功能损害,甚至肝癌的高发可能与当地的水源、食品鱼类有密切关系。
微囊藻毒素是由蓝藻水华,如固氮的鱼腥藻、束丝藻、拟柱胞藻、胶刺藻和节球藻等暴发所产生的一种肝毒素,它对蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用,因此与肿瘤促进作用有直接关系。
微囊藻毒素为七肽单环肝毒素,结构中存在着环状结构和间隔双键,因而具有相当的稳定性。
它能够强烈抑制蛋白磷酸酶的活性,当细胞破裂或衰老时毒素释放进入水中,同时它还是强烈的肝脏肿瘤促进剂。
MC具有水溶性和耐热性,易溶于水,甲醇或丙酮,不挥发,抗pH 变化。
化学性质相当稳定,自然降解过程十分缓慢。
1996年巴西一透析中心因透析液遭MC污染最终导致53人死亡。
流行病学调查显示,饮用水源中微囊藻毒素是中国南方一些地区原发性肝癌发病率高的主要原因之一。
对江西鄱阳湖的调查显示,水体微囊藻毒素最大为1 036. 9pg·ml-1,同时发现鱼体内有毒素积累。
淡水藻类及藻类毒素研究进展徐立综述徐顺清审阅藻类是水环境中的初级生产者,对维持水环境的生态平衡起着举足轻重的作用。
首先,它们通过光合作用为水中生物提供氧气;其次,它们可分解水生生物的代谢产物及水环境中的有机物质,而成为水环境中的清洁工;另外,由于许多藻可以固氮或含有丰富的营养,可作为水生生物的优良饵料。
然而近些年来,随着工农业生产的迅速发展和城市规模的扩大,大量工业污水和生活污水排入水体,使天然水体的富营养化日益严重。
富营养化的重要特征是在夏季高温时期藻类大量滋生,形成绿色丝带状的水华,漂浮在水面影响水环境的美观。
藻类的比重在1左右,蓝藻中的微囊藻细胞内具有气囊,它的比重小于1,多漂浮在水面上,外有衣胞包裹,呈絮团状,其它种类的藻类多悬浮在水体中。
形成水华的某些蓝藻是有毒的,大量藻类死亡后被水中异养菌分解,产生恶臭进一步释放体内毒素,将严重恶化水质。
长期低浓度藻毒素的摄入会对人体造成危争。
目前,淡水藻类污染己成为全球范围内日益严峻的环境和公共卫生问题,各国学者围绕该问题开展了很多极有意义的研究工作,涉及生态学、毒理学等各个方面。
1.藻类污染的生态学研究1.1藻类的生态藻类植物是地球上最重要的初级生产者。
它们合成的有机碳总量是高等植物的7倍。
全世界藻类植物约有40000种,其中淡水藻类约25000种左右,而中国己发现的淡水藻类约9000种。
包括:原生动物们的蓝藻们,原生动物门的硅藻门、甲藻门、金藻门、黄藻门、隐藻门、裸藻门以及属于植物界的红藻门、褐藻门、绿藻门和轮藻门。
淡水藻类在自然界里的分布非常广泛,适应性很强,对环境条件的要求不很严格,就是微不足道的营养和只有微弱的光照强度以及较低的温度下也能得到满足。
淡水藻类中大多数的种类是水生的,包括浮游的和底栖的各种类群,分布于不同水体中。
静止绿色的池塘和水坑中都含有大量的单胞藻。
其中最常见的有绿藻类的栅藻属、盘星藻属等种类。
随着数量的多少而决定水色的深浅,呈现黄绿或浓绿。
液相色谱-串联质谱法r检测水中痕量微囊藻毒素-LR和微囊藻毒素-RR李晨;马颖;李洪鑫;傅玉【摘要】建立直接进样测定饮用水和水源水中的微囊藻毒素(MC-RR、MC-LR)的液相色谱-质谱分析方法.水样过0.22μm PTFE滤膜,用Waters Xevo TQD超高效液相色谱串联质谱仪分析检测,采用色谱柱Waters BEH C81.7μm、2.1 mm×50 mm进行分离.采用电喷雾电离正离子模式(ESI+),以外标法定量分析.MC-RR的浓度在0.1~2.0μg/L,MC-LR的浓度在0.5~10.0μg/L范围时,它们的线性关系r≥0.9990.微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-RR在水中进行高、中、低3个水平的添加,各组分相对标准偏差(RSD)为4.18%~8.69%,,平均回收率在82%~91%之间,最低检测下限(LOD)MC-RR为0.04μg/L,MC-LR为0.09μg/L.此方法简便、快捷、准确,具有较好的实用价值.【期刊名称】《天津科技》【年(卷),期】2017(044)011【总页数】3页(P69-71)【关键词】微囊藻毒素;液相色谱-质谱;水【作者】李晨;马颖;李洪鑫;傅玉【作者单位】天津泰达水业有限公司天津300457;天津泰达水业有限公司天津300457;天津泰达水业有限公司天津300457;天津泰达水业有限公司天津300457【正文语种】中文【中图分类】O657.63近几年来,由于环境中水体富营养化,藻类特别是蓝藻在水体中异常繁殖生长,引起内陆水体中有害蓝藻水华。
微囊藻毒素(microcystin,MCYST)是水中蓝藻等藻类产生的一种七肽,目前已发现60多种异构体[1-2],主要有MC-RR、MC-LR。
微囊藻具有一定毒性,世界卫生组织和《生活饮用水卫生标准》均推荐水中微囊藻毒素的安全浓度为1 μg/L[3-5]。
检测微囊藻毒素的常见方法是液相色谱法,需要通过固相萃取柱对水样浓缩富集,用紫外检测器检测,前处理较复杂,且背景吸收较大。
内毒素检测方法
内毒素的检测方法主要有两种:化学检测方法和生物学检测方法。
化学检测方法中常用的有高效液相色谱(HPLC)和气相色谱(GC)。
这些方法可以用于检测水中的有机污染物、无机污染物和重金属。
通过这些方法,可以测量水内毒素的浓度,并确保其不超过安全限制。
其中,高效液相色谱技术一般采用正相或反相色谱柱对毒素进行分离,然后进行紫外(UV)、光电二极管阵列检测器(PDA)、荧光(FL)或化学发光(CL)等检测。
这种技术具有良好的灵敏度和选择性,可以将被测毒素与标准毒素的滞留时间和峰面积进行对比,从而鉴定出被测毒素的类型并进行精确定量。
生物学检测方法主要通过生物评估来检测水内的毒素。
例如,使用化学生物传感器或生物识别器来测量有机污染物的生物活性。
此外,也可以使用细胞毒性试验来评估水样的毒性。
请注意,这些检测方法都需要专业的设备和操作技术,因此在实际应用中,应由专业人员进行操作,并遵循相关的安全规定。
环境空气采样一、填空题1.总悬浮颗粒物 (TSP) 是指能悬浮在空气中,空气动力学当量直径的颗粒) 是指悬浮在空气中,空气动力学当量直径的颗粒物。
可吸入颗粒物 (PM10物。
答案:≤100 μm,≤10 μm2.气态污染物的有动力采样法包括:法、法和法。
答案:溶液吸收填充柱采样低温冷凝浓缩3.在环境空气颗粒物采样时,采样前应确认采样滤膜无和,滤膜的毛面向上;采样后应检查确定滤膜无,滤膜上尘的边缘轮廓清晰,否则该样品膜作废,需要重新采样。
答案:针孔破损破裂4.短时间采集环境空气中二氧化硫样品时, U 形玻板吸收管内装 10ml 吸收液,以L/min 的流量采样;24h 连续采样时,多孔玻板吸收管内装 50ml 吸收液,以L/min 的流量采样,连续采样 24h。
答案: 0.5 0.2~0.35. 《环境空气质量标准》中氟化物 (以 F 记) 是指以态及形式存在的无机氟化物。
答案:气颗粒6. 《环境空气质量标准》中的铅是指的铅及其化合物。
答案:存在于总悬浮颗粒物中二、判断题1.监测环境空气中气态污染物时,要获得 1h 的平均浓度,样品的采样时间应不少于30min。
( )答案:× 采样时间不少于 45min2.环境空气采样时,只有当干燥器中的硅胶全部变色后才需要更换。
( )答案:× 硅胶 1/2 变色就应该更换3.一般情况下,环境空气中臭氧浓度在中午至下午 3 点钟左右达到最高,夜里最低。
()答案:√4.用注射器采集的空气样品的存放时间不宜太长,一般要在 2 天内分析完。
( )污染源采样答案:× 在采集当天完成分析5.空气中臭氧浓度超过 0.250mg/m 3 时,会对氮氧化物的测定产生正干扰,采样时可在 吸收瓶入口端串接一段 15~20cm 长的硅橡胶管,以排除干扰。
( )答案:× 空气中臭氧浓度超过 0.250mg/m 3 时,会对氮氧化物的测定产生负干扰 6.用超细玻璃纤维滤膜采集环境空气样品时, 在测定 TSP 的质量浓度后, 样品滤膜可用 于测定无机盐、有机化合物和金属元素。
第6卷第11期环境工程学报Vol.6,No.11
2012年11月ChineseJournalofEnvironmentalEngineeringNov.2012
高效液相色谱法检测水中5种微囊藻毒素
毛敬英1,2,3杨敏1狄一安2曹金玲3*任立军2许其功3,4席北斗3,4(1.西南交通大学地球科学与环境工程学院,成都610031;2.中日环境友好保护中心,北京100029;3.中国环境科学研究院水环境系统工程研究室,北京100012;4.中国环境科学研究院环境基准与风险评估国家重点实验室,北京100012)
摘要使用Agilent1260型高效液相色谱仪,建立定量测定天然水体中5种微囊藻毒素(MC-RR、YR、LR、LA、LY)的分析方法。比较甲醇/三氟乙酸(TFA)水溶液与甲醇/磷酸两种流动相体系,待测物质的响应程度,结果发现,TFA作为缓冲溶液时,基线较磷酸稳定,因此,选择甲醇/TFA水溶液作为流动相。比较不同TFA体积比例,待测物质的分离程度,结果显示,甲醇/0.02%的TFA水溶液作为流动相时,5种MCs含量的分离度较好。比较等度和梯度洗脱条件,发现,梯度洗脱条件5种MCs的分离度较等度洗脱条件好。该方法MC-RR、YR、LR、LA、LY的最低检出限(LOD)分别为0.015、0.035、0.018、0.032和0.026μg/L,最低定量限(LOQ)分别是0.049、0.117、0.062、0.106和0.086μg/L。在0.10~1.50μg/mL的
线性范围内,相关系数R2≥0.99,实际水样回收率为73.9%~103.3%。关键词微囊藻毒素-RRYRLRLALY高效液相色谱天然水体
中图分类号X832文献标识码A文章编号1673-9108(2012)11-3882-07Detectionof5variantsmicrocystinsinwatersusinghighperformanceliquidchromatography
MaoJingying1,2,3YangMin1DiYian2CaoJinling3RenLijun2XuQigong3,4XiBeidou3,4(1.SchoolofEarthScienceandEnvironmentalEngineering,SouthwestJiaotongUniversity,Chengdu610031,China;2.Sino-JapaneseFriendshipEnvironmentProtectionCenter,Beijing100029;3.LaboratoryofWaterEnvironmentalSystemEngineering,ChineseResearchAcademyofEnvironmentalSciences,Beijing100012,China;4.StateKeyLaboratoryofEnvironmentalCriteriaandRiskAssessment,ChineseResearchAcademyofEnvironmentalSciences,Beijing100012,China)
AbstractAmethodusinghighperformanceliquidchromatography(HPLC)wasdescribedforthedetermi-nationoftraceamountofmicrocystins(MCs),MC-RR,MC-YR,MC-LR,MC-LAandMC-LY)innaturalwa-ters.TheresponsesofMCsusingtwodifferentmobilephases,methanol/trifluoroaceticacidaqueousandmetha-nol/phosphate,werecompared.Theresultshowedthatthebaselinewasmorestableusingtrifluoroethanoicacidasthebuffersolutionthanphosphate.Furthermore,differentratiosoftrifluoroethanoicacidwereusedaswaterphase,theresultsindicatedthatbestseparationwasobtainedusing0.02%trifluoroethanoicacidasmobilephase.Inaddition,fivekindsofMCswereseparatedin12minundertheconditionofgradientmobilephase(methanol/waterwith0.02%).Thelimitsofdetection(LOD)ofthismethodwere0.015,0.035,0.018,0.032,0.026μg/Landthelimitsofquantification(LOQs)were0.049,0.1170.062,0.106,0.086μg/LforMC-RR,MC-YR,MC-LRMC-LA,MC-LY,respectively.Thecorrelationcoefficientswere≥0.99between0.10~1.50μg/mL,recoveriesofthefivevariantswereintherangeof73.9%~103.3%.Keywordsmicrocystin-RR,YR,LR,LA,LY;highperformanceliquidchromatography(HPLC);naturalwaterbodies
基金项目:国家“973”重点基础研究发展规划项目(2008CB418006);国家“水体污染控制与治理”科技重大专项(2009ZX07106-001)收稿日期:2011-09-01;修订日期:2011-12-22作者简介:毛敬英(1986~),女,硕士研究生,主要从事水污染控制工程方面的研究。E-mail:1146847395@qq.com*通讯联系人,E-mail:jlcao2010@126.com
蓝藻水华暴发引起的微囊藻毒(microcystins,MCs)污染是世界各国共同面临的难题。我国是蓝
藻水华暴发较严重的国家之一。20世纪80年代中国科学院水生生物研究所藻类研究室对我国发生蓝藻水华湖泊中的微囊藻毒素进行研究发现,我国淡水湖泊所发生的水华80%是有毒的[1]。郁晞等[2]
的研究结果表明,常年接触淀山湖水的居民四项肝第11期毛敬英等:高效液相色谱法检测水中5种微囊藻毒素功能指标水平均较不接触淀山湖水的居民高,认为长期接触受MCs污染水源的居民肝脏可能会受到一定程度的影响。为了保障湖泊周边居民的身体健康,开展富营养化湖泊中MCs污染现状调查已迫在眉睫。目前,我国研究人员已经对太湖、莲花湖、滇池、淀山湖、武汉东湖等湖泊中MCs的污染水平开展了调查研究[3-7],研究结果表明,富营养化湖泊中MCs的含量只有ng/L或μg/L级,因此,检测富营养化水体中痕量MCs要求分析方法具有较高的灵敏度、准确性和重复性。20世纪80~90年代,我国主要使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测富营养化水体中的MCs[3,8-11],ELISA方法具有高效、快速、灵敏度高等特点,但是其抗体通常只是针对某一种MC建立起来的,对其他类型MCs的交叉反应性不高,不能检测MCs的一些异构体[12]。随着色谱和质谱技术的发展,已可以对不同异构体的MCs进行定性和定量检测,目前通常采用高效液相色谱(HPLC)法[13,14]和液相色谱/质谱法(LC-MS)法[15-19]检测富营养化水体中的MCs。HPLC具有准确、灵敏、重现性好等特点,是WHO、英美等发达国家和我国权威机构推荐的MCs检测方法[20,21]。目前利用HPLC主要分析3种MCs(LR、YR和RR),分析时间一般都大于10min。梁丽丽等[23]用高效液相色谱法检测水体中MC-LR、RR需25min,沈红娜等[24]分析高效液相色谱法测定喀斯特型高原深水水库中MC-LR、RR需18min。然而根据甲基化、羟基化、表异构化程度以及可变氨基酸的不同,已经发现了80种微囊藻毒素的亚型,因此,仅仅检测MC-LR、YR和RR3种MCs已远远不能满足人们对饮用水安全的要求。鉴于此,本研究建立一种经济、快速、灵敏、准确的且能同时分析富营养化湖泊水体中5种MCs(MC-RR、YR、LR、LA和LY)的分析方法,为我国全面了解富营养化水体中多种MCs污染状况提供科学的分析方法。1实验部分1.1实验仪器和试剂仪器:高效液相色谱仪:安捷伦(Agilent)1260,配备二极管阵列(DAD)检测器,Agilent化学工作站,色谱柱:ZORBAX300SBC18(4.6×150mm,粒径5μm);水浴氮气吹干仪(N-EVAPTM112);24孔固相萃取装置(J.T.Baker1-800-JTBAKER);HLB固相萃取柱(Waters,500mg,6mL);SUPELCOVi-siprepTM大体积采样器;溶剂抽滤装置(1000mL,天津津腾);自动混匀机;Millipore纯水机;亲水性尼龙微孔滤膜(Whatman,0.45μm)。试剂:甲醇(色谱纯,Baker);三氟乙酸(TFA,色谱纯,Dikmapure);磷酸二氢钠(分析纯,>99%,Ac-ros-Organics),磷酸(优级纯,>85%,天津市光复精
细化工研究所);MC-RR、YR、LR、LA、LY(≧95%,ALEXIS)。标准储备液:分别用1mL的纯甲醇溶解100μgMC-RR、YR、LR、LA、LY5种标准样品,配制成100μg/mL的5种MCs单标储备液。混合标准使用液:分别取100μLMC-RR、YR、LR、LA、LY单标储备液,用纯甲醇配制成浓度为10μg/mL的混合标准溶液作为使用液,-20℃以下保存。标准系列:用纯甲醇将混合标准使用液稀释成浓度分别为0.10、0.50、1.00和1.50μg/mL的混合标准溶液,用于标准曲线的绘制,-20°以下保存。磷酸缓冲溶液:(1)磷酸盐溶液:称取3.9003g磷酸二氢钠,用高
纯水定容至500mL配制成0.05mol/L的磷酸盐溶液。(2)20%的磷酸(20mL磷酸定容至100mL)将
已配制好的磷酸盐溶液pH调节至3,即为磷酸缓冲溶液。空白加标样品的制备:准确量取2L高纯水,向其中加入100μL的10μg/mL5种MCs混合标使用液,充分摇匀,经0.45μm微孔滤膜进行负压抽滤,该实验设置3个平行样。1.2色谱条件