微生物知识总结资料
- 格式：doc
- 大小：189.00 KB
- 文档页数：11
微生物知识总结 精品文档
收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 微生物学实验复习
1、培养基的种类及用途：
标准 培养基类型 配制特点 主要应用
物理性质 固体培养基 加入琼脂较多 菌种分离、鉴定、计数
半固体培养基 加入琼脂较少 菌种保存
液体培养基 不加入琼脂 工业生产、连续培养
化学合成 合成培养基 由已知成分配制而成，培养基成分明确 分类、鉴定
天然培养基 由天然成分配制而成，培养基成分不明确 工业生产
半合成培养基 部分天然物质和部分化学试剂配制而成 兼有天然培养基和合成培养基的优点
目的用途 加富培养基 营养物质仅适合一种或一类微生物 能使某种微生物的生长、繁殖比其他微生物更加迅速、逐渐淘汰其他微生物
鉴别培养基 添加某种指示剂或化学药剂 菌种的鉴别
选择培养基 添加(或缺少)某种化学成分 菌种的分离
2、培养基中的营养物质：
营养要素 含义 作用 主要来源
碳源 凡能提供所需碳元素的物质 构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质 无机化合物：CO2、NaHCO3；
有机化合物：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等
氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等
生长因子 生长必不可少的微量有机物 酶和核酸的组成成分 维生素、氨基酸、碱基等
水 在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高 不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定
无机盐 为微生物提供除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素 细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂
3、培养基的配置原则： 精品文档
收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 (1)目的要明确(根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无机物组成，生产用培养基内可加入化学成
分不明确的天然物质，而分类、鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。
(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。
(3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌、放线菌和真菌的最适pH分别
为：6.5～7.5、7.5～8.5和5.0～6.0。
4、灭菌与消毒：
项目 概念 常用方法 应用的范围
消毒 使用较为
温和的物理
或化学方法
仅杀死物体
上绝大多数
微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞) 煮沸消毒法：在100 ℃煮沸5～6 min 一般物品
巴氏消毒法：70～75 ℃煮30 min或在80 ℃煮15 min 一些不耐高温的液体，如牛奶
化学药剂消毒法 如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等
紫外线消毒法：30 W紫外灯照射30 min 接种室
项目 概念 常用方法 应用的范围
灭菌 使用强烈
的物理或
化学方法
使物体内
外所有的
微生物永
远丧失其
生长繁殖
能力 灼烧灭菌：酒精灯火焰 接种工具的灭菌
干热灭菌：160～170 ℃下灭菌1～2 h 玻璃器皿、金属工具的灭菌
高压蒸汽灭菌：121 ℃条件下，灭菌15～30 min 培养基及容器灭菌 精品文档
收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 5、细菌培养基的配制过程？
答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面（搁置斜面的长度不超过试管总长的1/2）
【问题与探究】
（1）培养基灭菌后，为什么需要冷却到50 ℃左右时，才能用来搁置斜面或倒平板？你用什么办法来估计培养基的温度？
【提示】 琼脂的凝固点为40 ℃，温度太高易使培养皿破裂，低于40 ℃，培养基已凝固，倒不出，所以培养基灭菌后，需冷却到50 ℃左右时才能用来倒平板，可以用手触摸盛有培养基的试管，感觉试管的温度下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了。
（2）为什么需要使试管口通过火焰？
【提示】 通过灼烧灭菌，防止试管口的微生物污染培养基。
（3）为了能彻底灭菌，在操作过程中应注意哪些事项？
【提示】 使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先的空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注意高压蒸汽灭菌锅的压力(100 kPa)、温度(121 ℃)和灭菌时间(20 min)。
6、无菌操作和接种技术
(1)接种
概念：在_无 菌 条件下将微生物接入 培养基____的操作过程。
工具：玻璃刮铲、接种针和接种环。
方法：穿刺接种、斜面划线接种和平板划线接种、涂抹平板等。
（2）无菌操作——微生物接种技术的关键
①培养微生物用的试管、培养皿和微生物培养基等，在接种之前都需要 灭菌_。
②通常接种操作要在____酒精灯火焰__的附近进行。 精品文档
收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 【想一想】 在微生物的培养过程中为什么要进行无菌操作？
提示：无菌操作的目的是防止受到空气中的杂菌污染。
7、微生物的分离
（1）原理：根据微生物对_营养成分、氧气、pH等要求的不同，通过只提供目的微生物生长的必需条件，或加入某些抑制剂使非目的微生物不能生长，从而达到 选择分离
微生物的目的。
(2)方法
①据菌落形态特征初步分离
②常用方法——平板分离法
分类_____________混合平板法______________：是常用的平板分离法，有扇形划线、 连续划线、交叉划线和方格划线等
目的：在培养基上得到目的微生物的 单个 菌落
【归纳】无菌技术的具体内容
(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。
(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3)实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。
(4)实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。
（5）在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。
8、平板分离法 涂抹平板法
平板划线法 精品文档
收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 ①原理：大多数细菌、许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落。平板分离法能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成便于移植的菌落。
②常用培养基：最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基。
③.方法：(1)涂抹平板法：分离材料进行10倍系列稀释，取一定稀释度样品倒入预先准备好的琼脂平板，用无菌玻璃刮铲将样品涂布均匀，细菌菌落常仅在平板表面生长。
(2)混合平板法：分离材料进行10倍系列稀释，取一定稀释度样品与溶化的琼脂混合，将与样品混合的琼脂倒入无菌平皿，细菌菌落出现在平板表面及内部。
(3)平板划线法：有扇形划线、连续划线、方格划线等。
4.目的：通过采用各种平板分离法在培养基上得到目的微生物的单个菌落。
(1)灭菌后的接种环须冷却后再挑取菌种，否则会杀死菌种。
(2)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。
(3)划线时用力大小要适当，防止用力过大使培养基划破。
9、菌落数目的统计方法
(1)显微镜直接计数法
①原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
②方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻
片，其上有特定的面积为1 mm2，高为0.1 mm的计数室，一个计数室又被分成25个(或16个)中
格，每个中格再被划分成16个(或25个)小格，每个计数室都由400个小格组成。 精品文档
收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 ③操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。
④计算公式
每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。
⑤缺点：不能区分死菌与活菌。
（2）间接计数法(活菌计数法)
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作
⒈设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落
数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培
养，计算出菌落平均数。
2.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。
(3)滤膜法
①实例：测定饮用水中大肠杆菌的数目。
②过程：将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现绿色，并带有金属光泽可根据培养基上绿色的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。 精品文档
收集于网络，如有侵权请联系管理员删除 【特别提醒】
统计菌落数目的注意事项：
①一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
③统计结果一般用菌落数而不是用活菌数表示。
④设置对照，目的是排除实验组中无关因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
实验探究：微生物的分离
【操作与实践】
微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。
1.稀释
用1 mL无菌吸管吸取1 mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9 mL无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL无菌水的试管中，混合均匀，依次类推制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。
2.划线或涂布
