紫外灯照射牛血清白蛋白的共振光散射光谱法测定

紫外法测定蛋白质含量中存在的问题及解决办法
存在问题：紫外分光光度法测定蛋白质含量的方法准确度和灵敏度差一点。

干扰物质多；对于测定那些与标准蛋白质中铬氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差。

若样品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物质，会产生较大干扰。

主要受溶剂的影响。

解决措施：紫外分光光度法测定蛋白质含量的方法操作简便、迅速、不需要复杂和昂贵的设备，不消耗样品，测定后仍能回收利用，低浓度的盐和大多数缓冲溶液不干扰测定。

紫外分光光度法测定蛋白质含量1仪器与试剂TU-1 9 01紫外一可见分光光度计，比色管,吸量管标准蛋白质溶液：5、00 mg、mL-l溶液0、9% NaCl洛液，待测蛋白质溶液2实验方法与原理本实验采用紫外分光光度法测定蛋口质含量。

紫外一可见吸收光谱法乂称紫外一可见分光光度法,它就是研究分子吸收19 0 nm〜750nm波长范围内得吸收光谱，就是以溶液中物质分子对光得选择性吸收为基础而建立起来得一类分析方法.紫外-可见吸收光谱得产生就是山于分子得外层价电子跃迁得结果，其吸收光谱为分子光谱，就是带光谱。

蛋口质中酪氨酸与色氨酸残基得苯环含有共轨双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光得性质，其最大吸收峰位于280 nm附近（不同得蛋白质吸收波长略有差别）•在最大吸收波长处，吸光度与蛋口质溶液得浓度得关系服从朗伯一比耳定律。

该测定法具有简单灵敬快速高选择性,且稳定性好，干扰易消除不消耗样品，低浓度得盐类不干扰测定等优点。

3实验步骤3、1准备工作3、3、1启动计•算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。

3、3、2在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量,设置测量条件（测量波长等）。

3、3、3将空白放入测量池中，点击START扫描空白，点击ZERO校零。

3、3、4标准曲线得制作。

3、2测量工作3、2、1吸收曲线得绘制用吸量管吸取2mL5、00m g/mL标准蛋白质溶液于1 0 mL比色管中，用 0、9% NaCl溶液稀释至刻度，摇匀。

用1 cm石英比色皿，以0、9% N&C1溶液为参比，在190 nm〜40 0 nm区间，q全波段扫描。

3、2、2标准曲线得制作用吸量管分别吸取 0、5、1、0、1、5、2、0 、2、5m L 5、00 mg、niL—l标准蛋白质溶液于5只1 0 mL比色管中，用0、9% N&C1溶液稀释至刻度，摇匀•用1 cm石英比色皿，以0、9%NaC 1溶液为参比，在280 nm处分别测定各标准溶液得吸光度A決记录所得读数.3、2、3样品测定取适量浓度得待测蛋口质溶液3mL,按上述方法测定2 78 n m处得吸光度。

白蛋白吸收峰白蛋白是一种重要的血浆蛋白，它在人体内具有许多重要的功能。

在分析白蛋白时，常常使用紫外-可见光谱（UV-VIS）来测量其吸收光谱。

白蛋白的吸收光谱通常会显示一个或多个峰，其中最显著的峰被称为白蛋白的吸收峰。

1.什么是吸收光谱吸收光谱是指物质在吸收特定波长的光时所表现出的吸收现象。

当光通过物质时，物质分子吸收了光的能量，并将其转化为分子内部的激发态能量。

吸收光谱通常由光的波长（纳米）在X轴上表示，吸收率或透过率在Y轴上表示。

2.为什么白蛋白具有吸收峰白蛋白是一种具有复杂结构的蛋白质，它含有许多不同的氨基酸残基，这些残基可以吸收特定波长的光。

白蛋白中含有芳香族氨基酸（如苯丙氨酸和色氨酸），这些氨基酸可以吸收紫外光，产生吸收峰。

此外，白蛋白还含有一些色氮基团，它们也能吸收特定波长范围的光，形成吸收峰。

3.白蛋白的吸收峰在哪个波长范围白蛋白的吸收峰通常位于紫外光（200-400纳米）和可见光（400-700纳米）之间的波长范围。

在紫外光区域，白蛋白的吸收峰通常在280纳米左右，而在可见光区域，其吸收峰则在400-500纳米之间。

这些吸收峰的位置可以通过使用光谱仪或分光光度计进行测量和确定。

4.为什么测量白蛋白的吸收峰测量白蛋白的吸收峰可以提供有关白蛋白的结构和浓度的信息。

由于白蛋白是血浆中最丰富的蛋白质之一，其浓度的变化可能与某些疾病的发展相关。

通过测量白蛋白吸收峰的强度和形状，可以检测和监测许多疾病，如肝脏疾病、肾脏疾病和营养状态的改变等。

此外，白蛋白的吸收峰还可以用于研究蛋白质的稳定性和相互作用等方面。

总结：白蛋白吸收峰是指白蛋白在紫外-可见光谱中的特定波长范围内吸收光的现象。

白蛋白的吸收峰主要由其含有的芳香族氨基酸和色氮基团引起。

测量白蛋白的吸收峰可以提供有关白蛋白结构和浓度的信息，有助于疾病的诊断和监测。

作品名称：苏丹红Ⅱ、Ⅳ与牛血清白毒性作用机理的研究大类：自然科学类学术论文小类：生命科学简介：此项目是国际上首先提出苏丹红Ⅱ、Ⅳ与牛血清白蛋白毒性作用机理的研究及毒性比较的评价体系。

从微观层面研究苏丹红对牛血清白蛋白的猝灭方式、结合力以及对蛋白骨架和对蛋白二级三级结构和物理结构的影响；进而对其与蛋白质结合位点及周围化学环境做出准确判断。

从化学角度更加详细地分析两者的结合带来的图谱变化，并对紫外强吸收峰变化的原因，荧光内滤效应的去除方法等解释。

详细介绍：2011年4月23日，国家卫生部正式公布47种食品中可能违法添加的非食用物质名单，排名第二位的就是苏丹红。

苏丹红为何屡禁不止？不同种类苏丹红对人体的具体致毒情况如何？微观致毒机理如何？如何更好的检测和预防食品中的苏丹红？如何准确医治因食用含有苏丹红的食品而造成的疾病？基于对以上现象的思考，作者开始了挑战的旅程……首先，我们进行了两次大型的实地调研。

1年来我们分别深入政府、企业、医院、社区、校园等地对产品质量监管人员、环保执法人员、医疗护理人员、社区公众以及学生五类群体中展开调研。

我们发放问卷2219份，回收有效问卷989份。

通过访谈录音整理以及数据分析，我们发现：公众对苏丹红食品的认知及辨别存在盲区；目前我国食品安全检测有滞后性，标准体系存在不规范、不健全的现象，短期内无法完全杜绝苏丹红被不法商贩应用于食品中；社会对苏丹红的毒性认识停留在与小鼠作用的实验结果：苏丹红I号（宏观层面）具有致癌作用。

接下来，我们决定通过科学的研究，系统准确地从微观角度解释不同种类的苏丹红在人体水环境下与牛血清白蛋白（对人血清白蛋白绝对参考）毒性作用的机理，从而为医疗方面更好的处理因食用含苏丹红食品而造成人体健康损害的问题提供有效帮助。

在刘汝涛教授的指导下，作者查阅了大量的相关文献发现目前对苏丹红的学术研究现状：“在苏丹红的科学研究方面，对食品中苏丹红含量的测定研究较多，而对其毒性的研究较少。

I. 紫外分光光度法测定蛋白质的含量一、实验目的掌握紫外分光光度法测定蛋白质的含量的方法。

二、实验原理蛋白质分子中存在含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，使蛋白质对280nm的光波具有最大吸收值，在一定的范围内，蛋白质溶液的吸光值与其浓度成正比，可作定量测定。

该法操作简单、快捷，并且测定的样品可以回收，低浓度盐类不干扰测定，故在蛋白质和酶的生化制备中广泛被采用。

但此方法存在以下缺点：1．当待测的蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基含量差别较大是会产生一定的误差，故该法适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的样品。

2．若样品中含有其他在280nm吸收的物质如核酸等化合物，就会出现较大的干扰。

但核酸的吸收高峰在260nm，因此分别测定280nm和260nm两处的光吸收值，通过计算可以适当的消除核酸对于测定蛋白质浓度的干扰作用。

但因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不同的，虽经校正，测定结果还存在着一定的误差。

三、实验器材1．紫外分光光度计2．移液管3．试管及试管架4．石英比色皿四、材料与试剂1．标准蛋白质溶液：准确称取经凯氏定氮校正的牛血清清蛋白，配制成浓度为1mg/mL的溶液。

2．待测蛋白溶液：酪蛋白稀释溶液，使其浓度在标准曲线范围内。

五、操作方法1．标准曲线的制作按表1加入试剂。

表1 标准曲线的制作度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出血清蛋白的标准曲线。

2．未知样品的测定取待测蛋白质溶液1mL，加入3mL蒸馏水，在280nm下测定其吸光度值。

并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。

II. Bradford法测定蛋白质的含量一、实验目的学习考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质的原理和方法。

二、实验原理1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的原理，迅速而准确的定量蛋白质的方法。

染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收光的改变，从465nm变为595nm。

蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度（最低检出量为1μg）。

收稿日期:2000-02-18作者简介:石　燕(1964-),女,副教授. 文章编号:1006-0464(2000)03-0282-04牛血清白蛋白的同步荧光分析法石　燕1　鄢　远2　黄坚锋2(南昌大学1.食品科学系;2.化学系,江西南昌　330047)摘　要:建立了用染料麦塔喇红固定波长同步荧光分析法测定牛血清白蛋白的新方法,实验结果表明,以麦塔喇红为荧光探针,用同步荧光分析法测定蛋白质方法简便,反应速度快,灵敏度高,线性范围为0～4μg /mL ,检测限为66.0ng /mL 。

相对标准差(n =8)为0.67。

关键词:麦塔喇红;蛋白质;同步荧光分析法中图分类号:O657.3 文献标识码:A蛋白质中研究得较多的是白蛋白,白蛋白是血浆中最丰富的蛋白质,在人体内起着重要的储存和输运作用〔1〕。

因此对蛋白质的定量分析具有十分重要的意义。

自1971年同步荧光光谱法被提出以来,由于其具有灵敏度高,选择性好,谱带简化及可减小散射光影响等优点,已成功地应用于多组分的同时测定〔2〕以及生物分子的研究中〔3〕。

目前,临床上测定蛋白质多采用染料结合法,而用同步荧光分析法鲜有报道。

麦塔喇红(以下简称MR )是一种发荧光的碱性染料,蛋白质能与其发生作用,使其荧光发生猝灭,其荧光猝灭程度在一定的范围内呈现良好的线形关系。

但是,如果用于蛋白质的测定,由于其stokes 位移(λex /λem =540nm /556nm )很小,散射光会对其产生影响。

因此,我们采用同步荧光分析法可减小由上述因素带来的误差。

实验结果表明,以麦塔喇红为荧光探针,用同步荧光分析法测定牛血清白蛋白(以下简称BSA )方法简便快速,灵敏度也较高。

1　实验方法Hitachi F -3010荧光分光光度计(日本日立),pH s -2c 型酸度计(上海雷磁仪器厂),BSA 购自华美公司,以50mmol /L NaCl 水溶液配制。

M R (分析纯)用水配制。

共振光散射光谱法测定酚磺乙胺片剂的含量
王振;何佳敏;袁莉;刘毅;马卫兴
【期刊名称】《山东化工》
【年(卷),期】2022(51)8
【摘要】在pH值4.56的Britton-Robinson缓冲溶液中,酚磺乙胺分子上磺酸根阴离子与质子化牛血清白蛋白的铵根阳离子依靠静电作用形成离子缔合物,酚磺乙胺分子上酚羟基与牛血清白蛋白的肽键依靠氢键形成超分子,使得反应产物分子体积增大,导致体系共振光散射信号强度显著增强,以此为基础建立了一种新的测定酚磺乙胺含量的共振光散射光谱分析法。

实验发现检测波长在250 nm处,共振光散射信号强度的差值△I_(RLS)(resonance light scattering)与酚磺乙胺的质量浓度在0.06~0.11 mg·L^(-1)范围内呈现良好的线性关系,其线性回归方程为
△I_(RLS)=230321C-10830,相关系数R为0.9993,检出限为0.002 mg·L^(-1)。

该方法检测效率高、灵敏度高,成功地应用于酚磺乙胺片剂中主要成分含量的测定,结果与高效液相色谱法一致。

【总页数】4页(P137-139)
【作者】王振;何佳敏;袁莉;刘毅;马卫兴
【作者单位】江苏海洋大学药学院
【正文语种】中文
【中图分类】TQ460;R927.2
【相关文献】
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3.共振光散射光谱法测定片剂中阿昔洛韦的含量
4.邻苯二酚紫共振光散射光谱法测定蛋白质的研究
5.铝试剂共振光散射光谱法测定苯扎氯铵含量的研究
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有机磷农药与牛血清白蛋白的相互作用及分析应用王雪荣;韩晓锋;贾风燕;王荣;殷军港;刘永明【期刊名称】《烟台大学学报（自然科学与工程版）》【年(卷),期】2011(024)003【摘要】应用荧光光谱、同步荧光光谱和紫外吸收光谱研究了3种有机磷农药(敌百虫、乐果和甲基对硫磷)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用.实验表明敌百虫和甲基对硫磷与BSA的相互结合作用是单一静态猝灭过程,而乐果与BSA的相互结合作用是静态为主、动态为辅的猝灭过程.首次发现有机磷药物与BSA结合作用同药物疏水性直接相关:随着有机磷药物疏水性增大,猝灭常数KSV增大、BSA构象改变增大、药物与BSA的结合距离减小.有机磷药物与BSA的结合作用随着有机磷疏水性增强而增加.基于蛋白质与有机磷的结合作用研究,初步探讨了水产品中有机磷药物残留的提取方法,并利用气相色谱法检测了水产品中乐果和甲基对硫磷的含量,方法的回收率为85.71％～107.21％.该方法准确度高、简单、快速.【总页数】7页(P194-200)【作者】王雪荣;韩晓锋;贾风燕;王荣;殷军港;刘永明【作者单位】烟台大学化学生物理工学院,山东烟台264005;烟台万华超纤股份有限公司,山东烟台264002;烟台大学化学生物理工学院,山东烟台264005;烟台大学化学生物理工学院,山东烟台264005;烟台大学化学生物理工学院,山东烟台264005;烟台万华超纤股份有限公司,山东烟台264002;烟台大学化学生物理工学院,山东烟台264005;烟台大学化学生物理工学院,山东烟台264005【正文语种】中文【中图分类】O65【相关文献】1.荧光法研究琥珀酸曲格列汀与牛血清白蛋白的相互作用及分析应用 [J], 龚爱琴;金党琴;朱霞石2.虎红-牛血清白蛋白共振光散射光谱研究及其分析应用 [J], 李琼;宋九华;贺莉3.以草甘膦,马拉·毒死蜱为模型研究有机磷农药与牛血清白蛋白的相互作用 [J], 王珊;高奕红4.牛血清白蛋白修饰水溶性CdTe量子点及分析应用 [J], 张文龙;张俊生;周丽平;陈莉华5.共振光散射光谱法研究二氨基蓝3R与牛血清白蛋白的作用及其分析应用 [J], 胡文康因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

紫外可见分光光度计测定蛋白质的实验方法紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验目的1.学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。

2.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。

3.掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。

二、实验原理1.紫外-可见分光光度法，是以溶液中物质的分子或离子对紫外和可见光谱区辐射能的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。

紫外光：10-400 nm可见光：400-780 nm(可被人们的眼睛所感觉)特点：带光谱、分子光谱应用：定性分析-最大吸收波长; 定量分析-朗伯-比尔定律(标准曲线法和标准加入法) a.定性分析原理：吸收曲线：吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状.b.定量分析原理：根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。

定量分析常用的方法是标准曲线法即只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。

c.仪器组成部件:各种类型的紫外-可见分光光度计，如下图所示，从总体上来说是由五个部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示记录装置。

2.本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：(1)蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275--280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。

在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。

该法测定蛋白质的浓度范围为0.1—1.0mg/mL。

(2)此种方法测量的准确度差一点的原因：由于不同蛋白质中酪氨酸和色氨酸的含量不同，所处的微环境也不同，所以不同蛋白质溶液在280nm的光吸收职也不同。

据初步统计，浓度为1.0 mg/mL的1800种蛋白质及蛋白质亚基在280nm的吸光度在0.3—3.0之间，平均值为1.25+/-0.51。