ER β1基因及其剪切变异体真核表达载体的构建与鉴定

人β-神经生长因子基因真核细胞表达载体的构建与鉴定李甫强;王廷华;董坚;梅妍;周鸿鹰;项涛;羊惠君【期刊名称】《四川解剖学杂志》【年(卷),期】2005(012)001【摘要】目的构建人β-神经生长因子基因(β-NGF)的真核细胞表达载体,为运用进行基因治疗和细胞移植的研究奠定基础.方法采用RT-PCR方法从人脑肿瘤旁组织的mRNA中扩增人β-神经生长因子的基因片段,将目的基因、真核表达载体pcDNA3同时经HindⅢ和Apa双酶切、纯化、连接、转化及筛选而构建重组载体pcDNA3-β-NGF;经酶切和测序对重组体进行分析和进一步鉴定.结果RT-PCR 产物琼脂糖电泳结果显示:在预期位置有阳性条带.重组载体经酶切、测序等分析插人的基因片段为表达β-NGF的基因.结论人β-NGF基因重组真核细胞表达载体pcDNA3-β-NGF构建成功,为进一步开展β-NGF基因治疗脑部疾患、脊髓损伤修复等研究奠定基础.【总页数】4页(P2-5)【作者】李甫强;王廷华;董坚;梅妍;周鸿鹰;项涛;羊惠君【作者单位】四川大学华西医学中心人体解剖教研室;四川大学华西医学中心人体解剖教研室;昆明医学院附属一院肿瘤研究中心;四川大学华西医学中心人体解剖教研室;四川大学华西医学中心人体解剖教研室;四川大学华西医学中心人体解剖教研室;四川大学华西医学中心人体解剖教研室【正文语种】中文【中图分类】Q782【相关文献】1.人乙酰肝素酶基因启动子驱动的真核细胞表达载体构建、鉴定及功能分析 [J], 陈晓鹏;胡良鹤;王永2.人神经生长因子基因真核细胞表达载体的构建与鉴定 [J], 王传恩;阮奕文;姚志彬3.人CD134L基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及序列分析 [J], 汤永平;张春艳;邵焰4.人BLyS基因真核细胞表达载体的构建和鉴定 [J], 张志方;张春艳;林学颜;潘敬运5.人CD154基因真核细胞表达载体的构建、鉴定及序列分析 [J], 张春艳;宁波;李树浓;张志方;冯炼强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

真核表达载体GV394-Nurr1的构建及鉴定樊秀双;郭军堂;陈安琪【摘要】目的：构建含人源性Nurr1基因真核表达载体GV394⁃Nurr1，检测其瞬时表达对细胞内活性氧类物质（ ROS）水平的影响。

方法 PCR扩增人Nurr1基因，克隆至 T载体，测序正确后与真核载体 GV394一起，经BamHI和XhoI 双酶切，T4 DNA连接酶连接，构建GV394⁃Nurr1；采用脂质体将GV394⁃Nurr1瞬时转染神经母细胞瘤SH⁃SY5Y细胞，RT⁃PCR检测Nurr1基因mRNA水平，通过DCFH⁃DA染色检测Nurr1对细胞内ROS水平的影响。

结果PCR及测序证实人Nurr1基因正确克隆至真核表达载体GV394； RT⁃PCR显示Nurr1基因mRNA水平在瞬时转染的细胞中明显增高；DCFH⁃DA染色显示瞬时转染Nurr1的神经母细胞瘤细胞的细胞内的ROS水平峰值较对照组明显左移。

结论成功构建人源性Nurr1真核载体，可在SH⁃SY5Y细胞中表达并减少细胞内ROS水平，为进一步在体外研究Nurr1的功能及其与多巴胺能神经元的保护作用的关系提供了基础。

%Objective To construct the eukaryotic expression vector GV394⁃Nurr1 containing human Nurr1 gene and to study the effects of transient transfection of Nurr1 on intracellular reactive oxygen species level. Methods The full⁃length of human Nurr1 gene amplified by PCR was subcloned into T vector and sequenced. GV394⁃Nurr1 vector was constructed by BamHI and XhoI double digestion and then T4 DNA ligase conjunction. GV394⁃Nurr1 was transfected into SH⁃SY5Y cells by liposome transfection technique;The mRNA of Nurr1 was detected by RT⁃PCR;The effect of Nurr1 expression on intracellular reactive oxygen species ( ROS ) was detected by ( DCFH⁃DA ) staining. Results PCR and sequencingconfirmed that the Nurr1 gene was correctly cloned into eukaryotic expression vector GV394. The RT⁃PCR results showed that the Nurr1 mRNA expression in the neuroblastoma SH⁃SY5Y cells transiently transfected Nurr1 was higher than that in the control group. DCFH⁃DA staining showed that the level of reactive oxygen peak in neuroblastoma cells transiently transfected Nurr1 obviously shifted to the left compared to the control group. Conclusions The human Nurr1 gene eukaryotic expression vector was successfully established and its high expression in the neuroblastoma SH⁃SY5Y cell line significantly decreased the ROS level. This provide the basis for further study on the function of Nurr1 in vitro and its relationship with the protective effect of dopaminergic neurons.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2016(026)007【总页数】5页(P31-34,63)【关键词】Nurr1;真核表达载体;帕金森氏病;细胞活性氧【作者】樊秀双;郭军堂;陈安琪【作者单位】潍坊医学院临床学院，山东潍坊 261053;潍坊医学院临床学院，山东潍坊 261053;潍坊医学院临床学院，山东潍坊 261053【正文语种】中文【中图分类】R-332帕金森氏病(Parkinson disease,PD)是与年龄相关的中枢神经系统退行性疾病，临床上主要表现为静止性震颤、肌强直、动作徐缓、姿态异常等运动功能障碍和自主神经功能障碍。

干扰素β1a基因真核表达质粒的构建和表达王妍;黄志立;李艳晖;张丽君;解桂秋【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(039)002【摘要】目的:构建干扰素β1a(IFN-β1a)的CHO表达体系,探讨人IFN-β1a在真核细胞中的表达效果.方法:采用全基因合成法获取重组人IFN-β1a基因,并通过点突变将IFN-β1a的17位半胱氨酸进行修饰,合成的基因经PCR扩增,连接入pSV2-dhfr质粒中,构建重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β1a.将质粒转染至CHO-dhfr-细胞中,经MTX加压筛选,获得稳定生长的能够持续表达IFN-β1a的单克隆细胞株；提取细胞基因组DNA,进行PCR鉴定.收集细胞培养上清液,采用Wish细胞病变抑制法检测转染细胞中IFN-β1a的抗病毒活性.结果:重组真核表达质粒pSV2-dhfr-IFN-β 1a经PCR及双酶切鉴定证明构建正确；以转染细胞基因组DNA为模板,可扩增出IFN-β1a基因；转染后重组细胞表达的IFN-β1a具有抗病毒活性,达到3×105 IU·mL-1.结论:IFN-β1a基因真核表达质粒构建成功,并在CHO细胞中成功表达了具有较高生物学活性的IFN-β1a蛋白.【总页数】5页(P204-208)【作者】王妍;黄志立;李艳晖;张丽君;解桂秋【作者单位】深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东深圳518055;吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室,吉林长春130012;深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东深圳518055;深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东深圳518055;深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东深圳518055;吉林大学药学院基因工程教研室,吉林长春130021【正文语种】中文【中图分类】Q784【相关文献】1.鸭α-干扰素真核表达质粒的构建及其对DVH弱毒苗免疫鸭细胞免疫调节作用研究 [J], 刘闯;程安春;汪铭书;陈斌;程志萍;段坤;杨梅;周雪;陈孝跃2.贵州白香猪γ-干扰素真核表达质粒的构建 [J], 王伟丞;梁海英;曾智勇;汤德元;刘钊3.新兴猪γ-干扰素基因克隆及其真核表达质粒的构建 [J], 温纳相;陈瑞爱;裴仉福;唐满华;朱文冠;程含波;李琳4.共表达鸡传染性法氏囊病毒VP2基因和鸡补体因子C3d基因的真核表达质粒的构建 [J], 周雪媚;佘锐萍;李永清;章振华;王宏俊;王德成;熊金茂5.大鼠干扰素诱导蛋白-10真核表达质粒的构建及其在NIH 3T3细胞中的表达 [J], 祁志荣;李明远;张林;蒋忠华;代吕霞;李虹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。