酸性乙醇分化液(1%)

他用来染细胞质时， 能把 胶 胚胎材料等。

刚果红 可以跟苏 所以洗涤和脱水 处理要迅速。

三、常用染料介绍 （一）天然染料1、苏木精苏木精是从南美的苏木 （热带豆科植物） 干枝中用乙醚浸制出来的一种色素， 是最常用的染 料之 一。

苏木精不能直接染色， 必须暴露在通气的地方， 使他变成氧化苏木精 （又叫苏木素） 后才能 使用，这叫做“成熟” 。

苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力 愈强。

被染材 料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。

所以在配制苏木精染剂时都要用媒 染剂。

常用的媒染剂 有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。

苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体， 易溶于酒精， 微溶于水和甘油， 是染细胞核的优良 材 料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。

分化时组织所染的颜色因处理的情 况而异， 用酸性溶液 （如盐酸—酒精） 分化后呈红色， 水洗后仍恢复青蓝色， 用碱性溶液 （如 氨水）分 化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。

2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。

一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末， 提取出虫红，再用明 矾处 理，除去其中杂质， 就制成洋红。

单纯的洋红不能染色， 要经酸性或碱性溶液溶解后才 能染色。

常 用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。

洋红使细胞核的优良染料， 染色的标本不易褪色。

用作切片或组织块染都适宜， 尤其适宜于 小型 材料的整体染色。

用洋红配成的溶液染色后能保持几年。

洋红溶液出现浑浊时要过滤后 再用。

（二）人工染料人工染料， 即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多， 应用极广。

它们的缺点是经日光照射容易 褪 色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。

在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也 能经几年不 褪色。

1、酸性品红 酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3% ）。

他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。

HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。

以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。

B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。

C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。

染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。

EA50染液pH值变化对宫颈脱落细胞染色的影响曹加兴;赵玺龙;字灿忠;郑艳梅;王力【摘要】Objective To discuss the effects of Ph value changes in EA50 staining solution on the staining of exfoliated cervical cells, and to seek ways to improve the quality of Pap staining. Methods EA50 staining solution was treated with 1 mol/L Na2 CO3 solution and 1 mol/L HAC solution respectively, and the Ph values of the two kinds of staining solutions were determined. Observation was made in the staining results of exfoliated cervical cells in these EA50 staining solutions of different Ph values. Results In the solution of low Ph value, the staining of the cervical cells was not bright - colored, and the pigmentation of cytoplasm was abnormal with serious dyeing of red and hazy contrasting in coloring of red, yellow and green; In the solution of high Ph value, the staining was not bright - colored either, and the pigmentation of cytoplasm was abnormal with serious dyeing of green and hazy contrasting in coloring of red,yellow and green; In the solution of Ph 4. 0,the staining was bright - colored, and the pigmentation of cytoplasm was normal with clear contrasting in coloring of red, yellow and green. Conclusion The changes of Ph value in EA50 staining solution have obvious influence on effects of the Pap staining. If the Ph value of the staining solution is kept at about 4.0,the quality of Pap staining can be significantly improved.%目的探讨EA50染液pH值变化对宫颈脱落细胞染色的影响,寻求提高巴氏染色质量的方法.方法用1 mol/L Na2CO3和1 mol/L HAC分别处理EA50染液,测定其pH值,观察宫颈脱落细胞在不同pH值EA50染液中染色的效果.结果宫颈脱落细胞在低pH值染液中着色不鲜艳,细胞质染色异常,表现为红染严重,红、黄、绿着色对比不清晰;宫颈脱落细胞在高pH值染液中着色不鲜艳,细胞质染色异常,表现为绿染严重,红、黄、绿着色对比不清晰;宫颈脱落细胞在pH值4.0左右染液中细胞着色鲜艳,细胞质染色正常,红、黄、绿着色对比清晰.结论 EA50染液pH值变化对巴氏染色效果有明显影响,稳定染液的pH值在4.0左右可显著提高巴氏染色质量.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2012(022)006【总页数】3页(P608-610)【关键词】EA50染液;pH值;巴氏染色;宫颈脱落细胞【作者】曹加兴;赵玺龙;字灿忠;郑艳梅;王力【作者单位】665100,云南,普洱,解放军62医院检验病理科;成都军区昆明总医院病理科;665100,云南,普洱,解放军62医院检验病理科;665100,云南,普洱,解放军62医院检验病理科;成都军区昆明总医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R446巴氏染色是人体和动物脱落细胞学染色最常用的染色方法之一，广泛应用于呼吸系统、泌尿系统及女性生殖系统等脱落细胞学的诊断及微生物感染的鉴定等领域，特别在宫颈脱落细胞学诊断方面更具有独到之处〔1〕。

一、常用染色液的配制⒈碘—碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂.配方:碘化钾2g ;蒸馏水300ml ；碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内.用时可将其稀释2—10倍,这样染色不致过深，效果更佳。

⒉苏丹Ⅲ(sudanⅢ或Ⅳ)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。

配方：（1)苏丹III或苏丹Ⅳ干粉；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2)先将苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70％酒精50ml.（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液.⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。

配方：洋红1g ；45％醋酸100ml煮沸2h左右，并随时注意补充加入蒸馏水到原含量，然后冷却过滤，加入4％铁明矾溶液1～2滴（不能多加，否则会发生沉淀)，放入棕色瓶中备用.⒋改良苯芬品红染色液（Carbol fuchsine) 核染色剂。

配制步骤：先配成三种原液，再配成染色液。

原液A:3g碱性品红溶于100ml 70％酒精中。

原液B：取原液A10ml加入到90ml 5％石炭酸水溶液中。

原液C：取原液B 55ml，加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林（38％的甲醛）.（原液A和原液C可长期保存，原液B限两周内使用）染色液：取C液10～20ml，加45％冰醋酸80～90ml，再加山梨醇1～，配成10％～20％浓度的石炭酸品红液，放置两周后使用，效果显著(若立即用，则着色能力差）。

适用范围：适用于植物组织压片法和涂片法，染色体着色深，保存性好，使用2～3年不变质。

山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色，但效果较差。

⒌中性红(neutral red)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。

HE染色实验步骤及常见问题解析一、HE染色HE染色全名为苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理学染色技术。

一张质上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。

HE染色是目前国内外病理诊断上广泛采用的常规染色方法。

切片质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。

因此，能制作出一张高质量的HE染色切片，是必须掌握的技术之一。

二、染色原理1.细胞核染色原理：苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。

细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。

苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2.细胞浆染色原理：细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。

当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。

因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。

伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。

3.分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。

在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。

经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

改良Harris苏木素染色液操作步骤及注意事项货号:G1150规格:100ml/500ml产品说明：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。

细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

操作步骤（仅供参考）：（一）石蜡切片染色1、切片脱蜡至水①二甲苯作用2次，每次5～10min。

②（可选）无水乙醇作用2次，每次3～5min。

③95%的乙醇3～5min④90%的乙醇3～5min⑤80%的乙醇3～5min⑥自来水或蒸馏水冲洗1～3min2、染色①改良Harris苏木素染色液5～8min②自来水或蒸馏水冲洗5～10s③（可选）1%盐酸乙醇分化2～5s④自来水冲洗20～30s⑤（可选）弱碱性水返蓝20～40s⑥自来水冲洗30～60s⑦伊红染色3～5min⑧自来水冲洗1～5s3、脱水、透明、封固①80%乙醇10～20s②90%乙醇10～20s③95%乙醇作用2次，每次1～2min。

④无水乙醇作用2次，每次2～3min。

⑤二甲苯透明3次，每次2～3min。

⑥中性树脂封片。

染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。

（二）冰冻切片染色1、乙醚-乙醇混合固定液5～10s2、自来水冲洗2～5s3、改良苏木素染色液滴染1～2min(可加热至50℃)。

4、自来水冲洗2～5s5、（可选）1%的盐酸乙醇分化液2～5s6、自来水冲洗2～5s7、（可选）弱碱性水返蓝2～5s8、自来水冲洗5～10s9、伊红染色液染色2～5s10、水洗1～2s11、80%的乙醇1～2s12、95%的乙醇1～2s13、无水乙醇2～5s14、苯酚二甲苯（1:3）2～5s15、二甲苯透明3次，每次2～5s。

HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。

以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。

B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。

C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。

染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。