2016年国家春小麦品种试验DNA指纹检测总结
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2016年国家春小麦品种试验DNA指纹检测总结哈尔滨按照农技种函[2016]19号文件《全国农技中心关于印发2016年国家春小麦品种区域试验实施方案的通知》的要求,农业部谷物及制品质量监督检验中心(哈尔滨)承担了2016年国家春小麦区域试验品种DNA指纹检测工作,现将检测结果报告如下:1、检测的品种本中心于2016年4月份收到2016年度春小麦区试品种27份,按照要求鉴定27份品种,包括参试品种24份,对照品种3份。
品种信息见表6、表7。
2、用于检测的SSR分子标记引物本次检测工作使用了13对核心SSR分子标记,同时根据需要选用了17对备选SSR分子标记用于进一步的检测工作(核心标记、备选标记在小麦的不同染色体上的分布见表1、2)。
表1:13对核心SSR分子标记引物名称染色体位置barc912B/4Dgwm2612Dcfa20287A/7Bgwm1553Acfd295Dgwm675B/3Agdm723Dgwm6104Agwm4292Bbarc198 6Bgwm437 7Dbarc80 1Bcwem40 5A表2:17对备选SSR分子标记引物名称染色体物位置wmc7642Bgwm169 6Agwm44 7Dgwm645 3Dwmc468 4Agwm271 2Bgwm161 3Dgwm495 4Bwmc506 7Dgwm539 2Dwmc617 5Awmc720 4Dwmc18 2Dgwm186 5Awmc457 4Dbarc59 2Dcfd8 5D3、检测方法及结果3.1种子纯度的检测采用小麦醇溶蛋白电泳方法检测品种纯度,不同品种由于遗传组成不同,种子内所含的蛋白质种类有差异,这种差异可利用电泳图谱加以鉴别。
具体方法是每个品种分别提取40个小麦单籽粒醇溶蛋白,比对其电泳谱带以确定其中是否混有杂株,如果未发现或发现3株及以下的杂株,则直接统计结果。
如果某一品种检出3株以上的杂株,继续提取该品种40个单籽粒醇溶蛋白,检测杂株数量。
种子纯度计算公式如下:种子纯度(%)= (检测总株数—杂株株数)/ 检测总株数×100% 本次检测中发现有4个品种含有杂株,经计算其纯度2016C008、2016C012、2016c022、2016c027均大于90%,结果见表3。
表3 品种纯度统计品种编号品种名称种子纯度检测株数杂株个数2016C002 陇春30号100% 40 02016C003 农麦5号100% 40 02016C004 巴09-520 100% 40 02016C005 H3015-S 100% 40 02016C006 H4510 100% 40 02016C007 宁春4号(CK) 100% 40 02016C008 龙垦401 90% 40 42016C009 克春100249 100% 40 02016C010 龙10-0518 100% 40 02016C011 龙辐08-6564 100% 40 02016C012 东农11-6306 95% 40 22016C013 龙垦402 100% 40 02016C014 克春100456 100% 40 02016C015 龙11-1017 100% 40 02016C016 克111362 100% 40 02016C017 克110182 100% 40 02016C018 龙辐12-876 100% 40 02016C019 龙辐10-527 100% 40 02016C020 龙麦51 100% 40 02016C021 垦红19 100% 40 02016C022 垦九10号(CK) 90% 40 42016C023 九三08-51266 100% 40 02016C024 红10-602 100% 40 02016C025 龙辐10-367 100% 40 02016C026 克10-365 100% 40 02016C027 垦九10号(CK) 90% 40 43.2 DNA位点纯合率的检测提取每个品种20个植株的叶片DNA,选用30对SSR分子标记检测,统计每个品种的纯合与非纯DNA位点数目,按如下公式计算每个品种的DNA位点纯合率。
品种DNA位点纯合率(%)= (检测位点总数-非纯位点数)/ 检测位点总数×100%在27个被检测品种中,有1个品种检出非纯位点,位点纯合率大于90%结果见表4:表4 检出非纯位点的品种品种编号检测位点总数非纯位点数目DNA位点纯合率(%)非纯位点名称2016C001酒042330 1 97﹪Xbarc913.3相似品种的筛查提取每个品种的叶片DNA,用13对核心SSR分子标记为每个品种构建DNA指纹数据,将构建的DNA指纹数据与DNA指纹数据库中的已审定品种及本年度国家区试品种进行比对,筛查出指纹相似的品种。
根据90%原则,当两个品种中只有1个位点不同或者所有位点全部相同时,再采用更多的分子标记检测相似品种。
通过数据比对,未发现相似品种。
3.4同名品种真实性检测。
将2016年与2015年同名品种进行32对引物DNA指纹数据比对,统计其一致性发现16个被检测品种基因型完全相同(表5)。
表5. 2016年与2015年同名品种比对2016年品种编号2015年品种编号品种名称相似度检测位点数不同位点数2016c001 2015c002 酒0423 100﹪32 0 2016c013 2015c003 龙垦402 100﹪32 0 2016c011 2015c004 龙辐08-6564 100﹪32 0 2016c010 2015c007 龙10-0518 100﹪32 0 2016c009 2015c008 克春100249 100﹪32 0 2016c026 2015c010 克10-365 100﹪32 0 2016c008 2015c012 龙垦401 100﹪32 0 2016c023 2015c014 九三08-51266 100﹪32 0 2016c025 2015c015 龙辐10-367 100﹪32 0 2016c012 2015c017 东农11-6306 100﹪32 0 2016c015 2015c018 龙11-1017 100﹪32 0 2016c002 2015c019 陇春30号100﹪32 0 2016c014 2015c023 克春100456 100﹪32 0 2016c022 2015c025 垦九10号100﹪32 0 2016c024 2015c026 红10-602 100﹪32 0 2016c007 2015c013 宁春4号100﹪32 0表6:2016年国家春小麦区试品种品种名称组合育种单位酒0423 0325F1/冀89-6091 甘肃酒泉市农业科学研究院陇春30号永1265/墨引13 甘肃酒泉市农业科学院小麦研究所农麦5号巴97-8812/SD3620 内蒙古农科院作物所巴09-520 永3119/临春1号巴彦淖尔市农牧业科学研究院H3015-S 石4185/TaiWSC1700 宁夏农林科学院农作物研究H4510 粗山羊草属后代/宁春16-S 宁夏农林科学院农作物研究宁春4号(CK) 宏图/索若拉64 宁夏种子工作站(供种)龙垦401 九三04F3-21/北麦6号北大荒垦丰种业股份有限公司九三育种试验站克春100249 克00-1153/龙02-2523 黑龙江省农科院克山分院龙10-0518 龙99-6189-2/克丰5//龙01F3-5050-1 黑龙江省农科院作物育种所龙辐08-6564 (克丰10组培/龙0117)F0种子诱变黑龙江省农科院作物育种所东农11-6306 东引冬05-325/东引85云582 东北农业大学农学院龙垦402 金K核不育聚合杂交北大荒垦丰种业股份有限公司九三育种试验站克春100456克春10-0456克00-1153/龙01-1069 黑龙江省农科院克山分院龙11-1017 龙麦26/克涝6号黑龙江省农业科学院作物育种研究所克111362克春11362龙10135/北麦4号黑龙江省农科院克山分院克110182克11-182克01-3519/北麦4号黑龙江省农科院克山分院龙辐12-876 (龙辐04-711/北0027)F0诱变黑龙江省农业科学院作物育种研究所龙辐10-527 (克丰10/克96RF6-976//克95R498SP4 黑龙江省农业科学院作物育种研究所龙麦51 龙麦03-3675-1/龙辐20-378 黑龙江省农业科学院作物育种研究所垦红19 北麦2号/龙01-0060 黑龙江省农垦总局红兴隆农业科学研究所垦九10号(CK) 北大荒垦丰种业股份有限公司九三育种试验站九三08-51266 金K核不育聚合杂交选育北大荒垦丰种业股份有限公司九三育种试验站红10-602 龙01-1122/农大97-2829 北大荒垦丰种业股份有限公司龙辐10-367 龙00-0657SP4/九三3U108)F0诱变黑龙江省农科院作物育种所克10-365 克00-1153/龙01-1069 黑龙江省农科院克山分院垦九10号(CK) 北大荒垦丰种业股份有限公司九三育种试验站表7:2016年度参加国家春小麦区试品种DNA指纹品种名称gwm437 gdm72 cwem40 barc198 cfd29 gwm429 barc91 gwm610 gwm261 gwm155 barc80 cfa2028 gwm67 酒0423 26 13 19 8 10 13 17 7 30 9 12 9 22 陇春30号26 13 19 8 20 13 17 7 30 9 12 9 22 农麦5号26 13 21 8 10 13 17 7 30 20 12 9 22 巴09-520 26 13 21 24 10 13 17 7 30 9 12 9 22 H3015-S 26 13 21 8 10 13 17 7 30 9 12 9 22 H4510 26 13 21 8 20 13 17 7 30 20 12 9 22 宁春4号(CK) 26 13 21 9 15 13 17 7 30 9 12 9 22 龙垦401 26 13 21 24 20 16 9 7 30 9 12 9 22 克春100249 26 13 21 11 20 16 9 6 30 9 12 9 22 龙10-0518 16 11 19 10 20 18 14 6 30 8 12 9 22 龙辐08-6564 26 11 17 9 20 18 14 6 30 8 11 9 22 东农11-6306 26 20 13 10 20 18 14 6 30 8 11 9 22 龙垦402 14 11 21 10 20 18 14 6 30 8 11 9 22 克春100456 26 11 19 10 20 18 12 6 30 8 11 9 22 龙11-1017 26 12 19 10 20 18 14 6 30 8 12 9 22 克111362 26 14 17 10 20 18 14 6 30 8 12 9 22 克110182 26 14 19 10 20 18 12 6 30 8 11 9 22 龙辐12-876 9 14 17 10 20 18 14 6 30 8 11 9 22 龙辐10-527 26 13 17 11 20 17 12 10 30 6 11 9 22 龙麦51 18 13 19 11 20 17 12 6 30 8 12 9 22 垦红19 18 13 19 11 20 17 12 7 30 8 11 9 22 垦九10号(CK) 18 13 17 10 20 17 12 7 30 8 11 9 22 九三08-51266 18 13 21 10 20 17 12 7 30 8 11 9 22品种名称gwm437 gdm72 cwem40 barc198 cfd29 gwm429 barc91 gwm610 gwm261 gwm155 barc80 cfa2028 gwm67 红10-602 18 20 19 11 20 17 12 7 30 8 11 9 22 龙辐10-367 26 13 13 10 20 17 9 7 30 8 11 9 22 克10-365 26 13 19 10 20 17 9 7 30 8 11 9 22 垦九10号(CK) 18 13 17 10 20 17 12 7 30 8 11 9 22。