小鼠肠道内容物中短链脂肪酸提取与检测方法

小鼠肠粘膜组织提取方法
嘿，咱今天就来讲讲这小鼠肠粘膜组织提取方法！这可真是个精细
活儿啊！
你想想，那小鼠的身体里藏着这小小的肠粘膜组织，就像是一个小
宝藏，咱得小心翼翼地把它给挖出来。

首先呢，得把小鼠给准备好呀，让它舒舒服服地躺在那儿。

然后，
就像一个小探险家一样，拿起工具，准备开启这场提取之旅。

咱得用特别精细的手法，就好像在雕琢一件艺术品似的。

轻轻地把
小鼠的肚子打开，可不能太粗鲁啦，不然把其他地方弄坏了可咋办呀！接着，找到那肠粘膜组织，就像是在一堆宝藏里找到那颗最闪亮的宝石。

这时候，就得格外小心啦，别一不小心就把肠粘膜给弄破了，那可
就前功尽弃喽！就好像走钢丝一样，得稳稳当当的。

你说这肠粘膜组织咋就这么娇气呢，稍微不注意就不行啦。

但咱可
不能怕麻烦呀，毕竟这可是很重要的东西呢。

提取出来后，还得好好地处理它，就像对待一个宝贝似的。

给它清
洗干净，让它干干净净地待着。

哎呀，这整个过程可不简单呐！但只要咱细心、耐心，就一定能把
这小鼠肠粘膜组织完美地提取出来。

这就好比一场战斗，咱得有策略、有技巧，才能取得胜利呀！你说
是不是？要是随随便便地弄，那肯定不行呀！
所以啊，做这个可得认真对待，不能马虎。

想想看，要是因为咱的
不小心，导致实验结果不准确，那多可惜呀！咱可不能让这种事情发生。

总之呢，小鼠肠粘膜组织提取方法虽然有点难，但只要咱用心去做，就一定能做好。

就像那句话说的，世上无难事，只怕有心人嘛！咱可
得加油哦！。

肠道菌群相关代谢物--短链脂肪酸⽣物学功能短链脂肪酸是肠道微⽣物重要的代谢物之⼀，作为信号分⼦对宿主的⼀系列活动产⽣影响，本期⼩编系统整理了肠道菌群相关代谢物——短链脂肪酸的⽣物学功能，供⼤家参考。

已有越来越多的研究针对饮⾷、微⽣物和⽣理学之间相互作⽤展开研究，本⽂将重点关注膳⾷纤维的微⽣物发酵产物短链脂肪酸（SCFAs）的⽣物学功能。

SCFAs主要由⼄酸盐、丙酸盐和丁酸盐组成，在调节宿主代谢、免疫系统和细胞增殖⽅⾯具有关键作⽤。

SCFAs在盲肠和近端结肠中浓度最⾼，是结肠细胞能量来源（尤其是丁酸盐），也可以通过门静脉转运到外周循环中作⽤于肝脏和外周组织。

尽管外周循环中SCFAs⽔平较低，但它们作为信号分⼦参与宿主不同的⽣物过程。

微⽣物发酵产物：短链脂肪酸在肠道前端，膳⾷纤维不被宿主消化酶进⾏分解代谢，⽽进⼊盲肠和结肠部位，该部位的微⽣物群将膳⾷纤维发酵代谢产⽣SCFAs，以⼄酸盐、丙酸盐和丁酸盐为主。

然⽽，当可发酵纤维供不应求时，微⽣物转向对⽣长不太有利的能量来源，如来⾃膳⾷的氨基酸、内源蛋⽩质或膳⾷脂肪。

这导致微⽣物群发酵活性和SCFAs等产物浓度降低。

蛋⽩发酵可以保持SCFAs池，但主要产⽣⽀链脂肪酸如异丁酸、2-甲基丁酸、异戊酸，源⾃⽀链氨基酸缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸，⽽这可能与胰岛素抵抗相关。

饮⾷补充富含蛋⽩质或脂肪的膳⾷纤维可恢复有益微⽣物⽔平，降低有毒微⽣物代谢产物的⽔平，增加SCFAs含量。

⼄酸：SCFAs主要成分，许多肠道菌群通过⼄酰辅酶A（acetyl-CoA）或Wood-Ljungdahl途径代谢丙酮酸产⽣。

Wood-Ljungdahl途径分为两个分⽀：C1分⽀（东⽅分⽀）将CO2还原为甲酸；⼀氧化碳分⽀（西⽅分⽀）将CO2还原成CO，CO进⼀步与甲基结合以产⽣⼄酰辅酶A。

丙酸：通过琥珀酸途径将琥珀酸转化为甲基丙⼆酰辅酶A产⽣。

丙烯酸与乳酸作为前体通过丙烯酸酯途径合成丙酸，也可以通过丙⼆醇途径合成，该途径以脱氧⼰糖（如海藻糖和⿏李糖）为底物。

Cell子刊：宿主通过粪便中的microRNA塑造肠道菌群一、导读miRNA是一类小的非编码RNA，大约长度为18-23nt，在细胞核中合成，细胞质中发挥功能。

然而，越来越多的证据表明miRNA也出现在胞外并随体液而流动散播。

先前的研究已经发现粪便中的miRNA可以作为肠道肿瘤的分子标志物。

但正常的肠道中是否拥有miRNA还未探明。

本文在肠内容物及粪便中发现miRNA，并且阐明其在调控宿主菌群的角色。

二、论文IDMicroRNA译名：宿主通过粪便中的microRNA塑造肠道菌群期刊：Cell Host＆MicrobeIF：14.946发表时间：2016年1月通讯作者：Howard L. Weiner通讯作者单位：哈佛医学院（Harvard Medical School）三、试验设计四、结果否是一种相关关系，作者又比较了SPF小鼠与抗生素处理小鼠的粪便miRNA组成，发现通过抗生素处理清除肠道菌的小组其拥有更多的miRNA（图1F）。

图1 鉴别（identification）粪便及肠腔内容物中的miRNA注：D-F上侧为火山图，统计差异及差异显著性。

横轴为Log2（X/X数量的倍数），纵轴为P值。

图中小点表示某一种miRNA；下侧为PCA分析，分析组成的相似性或差异性。

2.肠上皮细胞及表达Hopx阳性细胞是miRNA的两大主要来源粪便中miRNA的来源先前未被报道过，因为有研究表明肠上皮细胞（IECs）分泌外泌体（exosome），而作者发现miRNA存在于外泌体中，他们就设计实验来验证miRNA是否源自IECs。

Dicer酶是在miRNA成熟过程中的必须酶，它参与miRNA的剪切。

故作者培育了IECs细胞无Dicer酶表达的小鼠（Dicer1∆IEC），与IECs细胞表达Dicer酶的小鼠（Dicer1fl/fl）并比较两组小鼠粪便中的miRNA的丰度，图2A中火山图表明IECs细胞无Dicer酶的小鼠，其粪便中的miRNA减少了，所以可以得出IECs是miRNA的来源。

1. 掌握小鼠肠切片的基本操作流程。

2. 观察小鼠肠黏膜的形态结构，了解其生理功能。

3. 学习显微镜下观察细胞和组织结构的方法。

二、实验原理小鼠肠切片实验是研究小肠形态结构和功能的重要方法。

通过制作肠切片，可以观察肠黏膜的形态、绒毛结构、腺体分布等，进而了解其生理功能。

三、实验材料与仪器1. 实验动物：昆明小鼠1只2. 仪器：手术显微镜、解剖显微镜、切片机、显微摄影仪、显微镜、载玻片、盖玻片、染色液、生理盐水、酒精、二甲苯等3. 试剂：4%多聚甲醛、HE染色液、苏木精染色液、伊红染色液等四、实验方法1. 实验动物处死：采用颈椎脱位法处死小鼠，取出小肠。

2. 小肠清洗：将小肠置于生理盐水中，轻轻揉搓，去除内容物和脂肪。

3. 小肠固定：将清洗干净的肠管置于4%多聚甲醛溶液中固定，时间约24小时。

4. 小肠脱水：将固定好的肠管依次放入不同浓度的酒精溶液中脱水，直至100%酒精。

5. 小肠透明：将脱水后的肠管置于二甲苯中透明。

6. 小肠浸蜡：将透明后的肠管浸入石蜡中，使石蜡充分渗入组织内部。

7. 小肠包埋：将浸蜡后的肠管放入包埋盒中，冷却凝固成蜡块。

8. 切片：使用切片机将蜡块切成厚度约5-7μm的薄片，贴于载玻片上。

9. 染色：将切片依次进行HE染色、苏木精染色和伊红染色。

10. 观察：使用显微镜观察切片，记录观察结果。

1. 小肠切片的HE染色结果显示，肠黏膜层分为黏膜层、黏膜下层和固有层。

2. 黏膜层：由黏膜上皮、固有层和黏膜肌层组成。

黏膜上皮为单层柱状上皮，细胞排列整齐，细胞核呈椭圆形，位于细胞基底部。

固有层含有丰富的血管和淋巴管，有利于营养物质和水分的吸收。

3. 黏膜下层：主要由结缔组织、血管和淋巴管组成，起到支持作用。

4. 固有层：由密集的结缔组织、平滑肌纤维和神经纤维组成，有利于调节肠道运动和分泌。

六、实验讨论1. 本实验成功制作了小鼠肠切片，并观察到了肠黏膜的形态结构。

2. HE染色结果显示，小肠黏膜层由黏膜上皮、固有层和黏膜肌层组成，具有吸收营养物质和水分的功能。

小鼠肠道蛋白处理是一种常用的实验方法，用于提取和纯化小鼠肠道中的蛋白质。

这种方法通常包括以下几个步骤：
1. 样品准备：首先，需要从小鼠的肠道中取出一定量的组织样本。

这些样本可以是小鼠的结肠、回肠等部位。

然后，将样本进行研磨或匀浆，以便后续的蛋白质提取。

2. 蛋白质提取：接下来，需要将研磨或匀浆后的样品进行蛋白质提取。

这通常涉及到使用一些化学试剂，如盐酸、EDTA等，来破坏细胞膜和释放出内部的蛋白质。

3. 蛋白质纯化：提取出的蛋白质通常会含有一些杂质，如多糖、脂肪等。

因此，需要对蛋白质进行纯化，以去除这些杂质。

这通常可以通过一系列的色谱步骤来实现，如离子交换色谱、凝胶过滤色谱等。

4. 蛋白质定量：最后，需要对纯化后的蛋白质进行定量。

这通常可以通过使用一些生物化学试剂，如BCA试剂盒、Bradford试剂盒等，来测定蛋白质的浓度。

科研Nature子刊：短链脂肪酸促进IL-22产生从而维持肠道免疫稳态编译：北越城主，编辑：Tracy、江舜尧。

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导读先天性淋巴样细胞（ILC）和CD4+T细胞产生IL-22对于肠道免疫至关重要。

之前有研究表明肠道菌群是肠道中IL-22产生的关键因素，但调节机制尚不清楚。

在本研究中，我们发现来源于微生物群的短链脂肪酸（SCFA）促进CD4+T细胞和ILC通过G蛋白受体41（GPR41）产生IL-22，并抑制组蛋白脱乙酰基酶（HDAC）活性。

SCFA通过促进芳烃受体（AhR）和缺氧诱导因子1α（HIF1α）的表达来上调IL-22的产生，而HIF1α受mTOR和Stat3的差异调节。

其中，HIF1α直接与IL22启动子结合，而SCFA通过组蛋白修饰增加HIF1α与IL22启动子的结合，补充SCFA还可以增强IL-22的产生，从而保护肠道免受炎症，SCFA也能促进人CD4+T细胞IL-22的产生。

我们的这些发现确定了SCFA在诱导CD4+T细胞和ILC中IL-22产生以维持肠道稳态。

论文ID原名：Intestinal microbiota-derived short-chain fatty acids regulation of immune cell IL-22 production and gut immunity译名：短链脂肪酸促进IL-22产生以维持肠道免疫稳态期刊：Nature CommunicationsIF：12.12发表时间：2020.09通讯作者：Yingzi Cong通讯作者单位：德克萨斯大学医学部实验设计先天性淋巴样细胞（ILC）和CD4+T细胞产生IL-22对于肠道免疫至关重要。

研究认为肠道菌群是肠道中IL-22产生的关键因素，但调节机制尚不清楚。

(1)从野生型（WT）C57BL/6J（B6）小鼠中分离CD4+T细胞和ILC细胞与短链脂肪酸（SCFAs）进行体外共培养，乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐均可增加IL-22的mRNA和蛋白表达或其水平，表明SCFA促进ILC和CD4+T细胞中IL-22的表达；(2)体内研究发现丁酸盐可以促进ILC和CD4+T细胞中IL-22的表达，丁酸盐可抑制组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)活性，并与G蛋白受体41(GPR41)结合促进芳烃受体（AhR）和缺氧诱导因子1α（HIF1α）表达，从而上调IL-22；也可以通过激活mTOR和Stat3调节HIF1α和AhR的表达；(3)机制上，丁酸盐可促进HIF1α与IL-22启动子的HRE区域结合，从而诱导IL-22启动子HRE区域组蛋白乙酰化，从而增强IL-22表达；(4)在柠檬酸杆菌感染诱导的小鼠结肠炎模型中，补充丁酸盐可促进IL-22的产生，从而保护肠道免受炎症的侵袭，缓解小鼠结肠炎。

第1篇一、实验目的1. 掌握小鼠解剖技术，了解小鼠肠道结构。

2. 学习观察和分析小鼠肠道形态、位置和功能。

二、实验材料1. 实验动物：成年雄性小鼠（体重约20-25g）。

2. 实验器材：解剖盘、剪刀、镊子、解剖剪、解剖针、解剖镜、生理盐水、消毒液、棉签、纱布、注射器、记录纸、笔等。

三、实验步骤1. 实验动物处死：将小鼠放入麻醉盒中，用CO2气体麻醉至小鼠呼吸停止，然后将小鼠放入解剖盘中。

2. 解剖准备：用剪刀剪开小鼠颈部皮肤，暴露气管，用注射器注入少量生理盐水，使气管扩张，便于观察。

3. 解剖腹部：剪开小鼠腹部皮肤，暴露腹腔，观察腹腔内脏器官的位置和形态。

4. 分离小肠：用镊子轻轻提起小肠，沿小肠方向剪开，分离出小肠。

5. 观察小肠：将小肠平铺在解剖盘上，用解剖镜观察小肠的形态、颜色、皱襞等特征。

6. 测量小肠长度：用尺子测量小肠的长度。

7. 小肠功能观察：向小肠内注入少量生理盐水，观察小肠蠕动情况。

8. 解剖回收：将小肠回收，进行清洗、消毒，备用。

9. 实验记录：详细记录实验过程，包括小鼠性别、体重、解剖过程、小肠形态、长度、蠕动情况等。

四、实验结果与分析1. 实验结果：（1）小鼠性别：雄性。

（2）小鼠体重：22g。

（3）小肠形态：呈长管状，表面有皱襞，颜色为粉红色。

（4）小肠长度：约20cm。

（5）小肠蠕动情况：注入生理盐水后，小肠出现明显的蠕动现象。

2. 结果分析：（1）小鼠小肠形态、颜色、长度等特征符合正常小鼠肠道结构。

（2）实验过程中，小鼠小肠蠕动情况良好，说明肠道功能正常。

五、实验结论通过本次实验，我们掌握了小鼠解剖技术，了解了小鼠肠道结构，观察了小肠形态、位置和功能，为后续相关实验奠定了基础。

六、实验注意事项1. 实验过程中，应严格遵守实验操作规程，确保实验安全。

2. 实验动物处死时，要确保小鼠麻醉充分，避免动物痛苦。

3. 解剖过程中，注意观察各器官的位置和形态，以免误伤。

4. 实验记录要详细，包括实验时间、实验过程、结果分析等。