第七章 分光光度法 【基本要求】
1.1 掌握分光光度法基本原理—Lambert-Beer定律，能熟练运用Lambert-Beer公式进行有关计算。 1.1 掌握吸光度、透光率、吸光系数、摩尔吸光系数的概念。
1.2 明确溶液颜色与光吸收的关系。
1.3 了解物质对光的选择性吸收及吸收光谱。
1.4 了解分光光度计的基本构造；提高测量灵敏度和准确度的方法。
1.5 了解紫外分光光度法进行物质定性分析和定量测定的基本原理。
【重点难点】
2.1 重点
分光光度法原理－Lambert-Beer定律。紫外分光光度计的使用
2.2 难点
提高测量灵敏度和准确度的方法。
【讲授学时】 4学时
4.1 第一节 概述
一、比色分析法
比色分析法：利用比较溶液颜色深浅的方法来确定溶液中有色物质的含量。
有色物质溶液颜色越深，浓度越大；颜色越浅，浓度越小。
二、比色分析法测定步骤
①选择适当显色剂，使被测组分转变成有色物质，称为显色阶段。测定无色溶液时要进行显色阶段。
②选择最佳条件测定溶液的深浅度，称为比色阶段。
三、发展过程：
目视比色法 → 光电比色法 → 分光光度计（吸光光度法）
四、比色与分光光度法的特点
比色和分光光度法主要用于测定微量组分。
1、灵敏度高：测定试样中微量组分（1～0.001%）常用方法，甚至可测定 10-4 ~ 10-5%的痕量组分。
2、准确度高：一般比色法相对误差为5～10%，分光光度法为2～5%，其准确度虽比重量法和滴定法低，但对微量组分的测定已完全满足要求。如采用精密
蓝
450-480
紫
400-450红
650-750青蓝480-490青490-500绿500-580黄580-600
橙600-650白光分光度计，误差将减少至1～2%。
3、应用广泛：几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用比色法和分光光度法进行测定。
4、操作简便、快速，仪器设备也不复杂。
例如：试样中含Cu量为0.001%，即在100mg试样中含Cu 0.001mg，用比色法可以测出。
第七章药物鉴别
与硫酸的呈色反应； 地塞米松+硫酸——淡红棕色，加水后颜色消失
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC
与硫酸的呈色反应； 泼尼松+硫酸——橙色，加水为黄色，渐变成蓝绿色
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC
与硫酸的呈色反应； 乙酸可的松+硫酸——黄色或微带橙色，加水颜色消失，溶液澄清
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC
硫酸苯肼法
乙酸可的松+乙醇+硫酸苯肼——黄色
与硫酸的呈色反应； 氢化可的松+硫酸——棕黄至红色并显绿色荧光
加水后颜色变黄至橙黄色，微带绿色荧光，有少量絮状沉淀
硫酸苯肼法 氢化可的松+乙醇+硫酸苯肼——黄色
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC C17—α—醇酮基的还原反应
氢化可的松+碱性酒石酸——砖红色沉淀
与硫酸的呈色反应； 乙酸氢化可的松+硫酸——黄色至棕黄色，并带绿色荧光
硫酸苯肼法 乙酸氢化可的松+乙醇+硫酸苯肼——黄色
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC
与硫酸的呈色反应； 雌二醇+硫酸——黄绿色荧光，加三氯化铁后呈草绿色
加水稀释后变红色
重氮苯磺酸反应
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC
与硫酸的呈色反应； 甲睾酮+硫酸——黄色并带有黄绿色荧光
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC
C17—α—醇酮基的还
原反应 地塞米松磷酸钠+碱性酒石酸酮——红色沉淀
硫酸苯肼反应鉴别 地塞米松磷酸钠+硫酸苯肼——黄色
磷酸盐反应鉴别
氧瓶燃烧法 地塞米松磷酸钠+茜素氟蓝——蓝紫色
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC
C17—α—醇酮基的还原反应
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
HPLC
乙酸去氧皮质酮+氨制硝酸银——黑色沉淀
C17—α—醇酮基的还原反应
紫外分光光度法
红外分光光度法
TLC
第七章 食品腐败变质和天然毒素的检测
食品腐败变质系指在腐败细菌为主的各种因素（如日光、水分、温度、空气
等）作用下，使食品降低或丧失食用价值和商品价值的一切变化。食品中的天然
毒素是指自然界中有些动、植物如果误食或食用方法不当可能引起的中毒的一些
天然存在的物质成分。这类物质很多，毒性相差很大，中毒症状也各不相同。这
里仅选择四项作为一般性实验供选用。
实验一 挥发性盐基氮的检测
挥发性盐基氮，是动物性食品在腐败过程中，由细菌酶的作用，使蛋白质分
解而形成的物质，此类物质属带碱性的含氮物质，故也称碱性总氮（TVBN），
主要包括氨及少量伯胺和叔胺等，均具有挥发性。TVBN与动物性食品腐败程度
之间有明确的对应关系，常用于判定食品的新鲜程度和确定食品质量的好坏。
TVBN的检测方法有半微量定氮法和微量扩散法。
一．半微量定氮法
（一）目的与要求 学习鲜（冻）肉、鱼、禽等肉与肉制品的新鲜程度检测与
判别。
（二）原理 样品浸提液在弱碱性（MgO）条件下，碱性含氮物质游离并被蒸
馏出来，用标准酸溶液滴定计算含量。
（三）仪器与试剂
1．仪器：半微量凯氏定氮器
2．试剂：（1）氧化镁混悬液（10g/L）：称取1.0g氧化镁，加100mL水，振摇成
混悬液；（2）硼酸吸收液（20g/L）；（3）0.010mol/LHCl标准液；（4）混合指示
剂（2g/L甲基红－乙醇指示液与1g/L次甲基蓝指示剂，临用时等量混合）
（四）实验步骤
试样处理：将试样除去脂肪、骨或鳞等非食用部分后，绞碎拌匀，称取约
10.0g，置于锥形瓶中，加100mL水，不时振摇，浸渍30min后过滤备用。
蒸馏滴定：装好半微量凯氏定氮器，将盛有10mL硼酸吸收液及5－6滴混
合指示剂的锥形瓶置于冷凝管下端，并使端口处于液面以下。准确吸取5.0mL
上述滤液于蒸馏器反应室内，加5mL氧化镁混悬液，迅速盖塞，并用水封口，
通入蒸汽，蒸馏5min后停止。吸收液用盐酸标准溶液滴定至蓝紫色为终点，同
第七章 胺类药物的分析 桂林医学院药学-唐岩松
- 1 - 第七章 胺类药物的分析
在国内外药典中，收载有许多胺类药物，本章主要选择芳胺类、苯乙胺类、氨基醚衍生物类、磺胺类进行讨论。
第一节 芳胺类药物的分析
芳胺类药物具有芳胺或芳烃胺的基本结构，根据本类药物的结构，可将其分为两类：第一类是在芳环对位有取代的对氨基苯甲酸酯类药物。第二类则为芳伯氨基被酰化，并在芳环对位有取代的酰胺类药物。
一、典型药物结构及性质
(一)对氨基苯甲酸酯类药物
本类药物分子中都具有对氨基苯甲酸酯的母体，基本结构如下：
1、典型药物
对氨基苯甲酸酯类药物主要包括苯佐卡因(benzocaine)、盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride)和盐酸丁卡因(tetracaine hydrochloride)等局部麻醉药。
2、主要化学性质
(1)芳伯氨基特性：显重氮化-偶合反应；与芳醛缩合反应；易氧化变色等。
(2)水解特性：含酯键(或酰胺键)易水解。其水解的快慢受光线、热或碱性条件的影响。水解产物主要为对氨基苯甲酸(PABA)。
(3)弱碱性：除苯佐卡因外，因其脂烃胺侧链为叔胺氮原子，故具有弱碱性。因此能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应；可采用非水溶液滴定法测定含量。
(4)其他特性：本类药物的游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐均系白色结晶性粉末，具有一定的熔点，易溶于水和乙醇，难溶于有机溶剂。
(二)酰胺类药物
本类药物均系苯胺的酰基衍生物，其共性是具有芳酰氨基，基本结构为：
1、典型药物
酰胺类药物主要包括对乙酰氨基酚(paracetamol)等解热镇痛药、盐酸利多卡因(1idocaine hydroehloride)和盐酸布比卡因(bupivacaine hydroehloride)等局部麻醉药及醋氨苯砜(acedapsone)等抗麻风病药。
