实验一 药物的杂质检查

实验一 药物的杂质检查

实验目的：

1. 掌握药物的一般杂质检查原理与实验方法。

2. 掌握杂质限度试验的概念及计算方法。

3. 熟悉一般杂质检查项目与意义。

实验原理：

酸碱度、氯化物、硫酸盐、不挥发物、重金属的检查原理参见教材第三章中杂质检查部分。

实验器材：纳氏比色管，

试药：葡萄糖、氯化钠原料药。

仪器：50mL纳氏比色管、刻度吸管、100mL测砷瓶，药物天平。

实验内容与方法：

（一）葡萄糖

1、酸度

取本品2.0g，加水20mL溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）0.20mL，应显粉红色。

2、溶液的澄清度与颜色

取本品5g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10mL，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录H）比较，不得更浓；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液3mL、比色用重铬酸钾液3mL与比色用硫酸铜液6mL，加水稀释成50mL）1.0mL加水稀释至10mL比较，不得更深。

3、乙醇溶液的澄清度

取本品1.0g，加90%乙醇30mL，置水浴上加热回流约10分钟，溶液应澄清。

4、氯化物

取本品0.6g，加水溶解使成25mL，再加稀硝酸10mL；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，摇匀，即得供试溶液。另取标准氯化钠溶液6.0mL，置50mL纳氏比色管中，加稀硝酸10mL，加水使成40mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0mL，用水稀释，使成50mL，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较（附录A）。供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓（0.01%）。

5、硫酸盐

取本品2.0g，加水溶解使成约40mL；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中，加稀盐酸2mL，摇匀，即得供试溶液。另取标准硫酸钾溶液2.0mL，置50mL纳氏比色管中，加水使成约40mL，加稀盐酸2mL，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液5mL，用水稀释至50mL，充分摇匀，放置10分钟，同置黑色背景上，从

比色管上方向下观察、比较（附录B）。供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓（0.01%）。

6、亚硫酸盐与可溶性淀粉

取本品1.0g，加水10mL溶解后，加碘试液1滴，应即显黄色。

7、干燥失重

取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过9.5%（附录E）。

8、炽灼残渣

不得过0.1%（附录F）。

9、铁盐

取本品2.0g，加水20mL溶解后，加硝酸3滴，缓缓煮沸5分钟，放冷，加水稀释使成45mL，加硫氰酸铵溶液（30→100）3mL，摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0mL用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.001%）。

10、重金属

取25mL纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL后，加水稀释成25mL。取本品4.0g，置乙管中，加水适量溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL，加水使成25mL；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管颜色一致。再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2mL，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深（附录C），含重金属不得过百万分之五。

11、砷盐

取本品2.0g，加水5mL溶解后，加稀硫酸5mL与溴化钾溴试液0.5mL，置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸散的水分，放冷，加盐酸5mL与水适量使成28mL，置测砷瓶中，作为供试溶液。另精密量取标准砷溶液2mL，照供试品制备项下方法，自"加水5mL溶解后"起，至"置测砷瓶中"，同法处理，作为标准液。

取供试溶液和标准液分别进行以下操作：加碘化钾试液5mL与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将装妥的导气管密塞于测砷瓶上，并将测砷瓶置25~40℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，比较。供试溶液生成的砷斑与标准砷斑比较（附录D），不得更深（0.0001%）。

实验注意事项：

1、比色管的正确使用——选择配对的两支纳氏比色管，用清洁液荡洗除去污物，再用水冲洗干净。采用旋摇的方法使管内液体混合均匀。

2、正确选用量具——根据检查试验一般允许误差为±10%的要求和药品、试剂的取用量，选择合适的容量仪器。

3、平行操作——标准与样品必须同时进行实验，加入试剂量等均应一致。观察时，两管受光照的程度应一致，使光线从正面照入，比色时置白色背景上，比浊时置黑色背景上，自上而下地观察。

4、注意刻度吸管的正确使用和观察。

5、限量计算:杂质限量%=((V标准×C标准)/W样)×100%。式中V标准为标准液体积，

C标准为标准液浓度，W样为样品取样量。

实验报告：

实验结束后，书写实验报告。

实验一

指导要点：

1. 比色管的选择、洗涤和使用

选择两支配对的纳氏比色管，50mL比色管有25mL和50mL两个刻度，要求两管的粗细、长短、玻璃颜色、刻度高低等一致。比色管的清洁不能用毛刷刷，以免玻璃发毛，影响比色、比浊，应用清洁液荡洗，然后用水冲洗干净。比色管使用中不能直火加热或高温烘烤。比色、比浊操作要注意平行原则，即样品与标准须同时进行试验，加入试剂的量、顺序，放置时间，稀释程度等均应一致。在比色管中加入试剂后，要求旋摇均匀，即用手指握住比色管上端，利用手腕旋转的惯性使比色管向四周作圆锥形旋摇。观察方式，比浊时以黑色为背景，比色时以白色为背景，使两管受到的光线照射程度一致。让光线从正前方射入向上反射，由上而下垂直观察，比较样品管与标准管的浑浊或颜色深浅程度。

2. 正确选用量器 在杂质检查中允许的误差为±10%，量筒的绝对误差为1毫升至数毫升，刻度吸管的绝对误差为0.01～0.1mL，药物天平的绝对误差为0.1g。在实验中，应根据样品、标准液的取用量，正确选用量器。例：取标准液2mL，允许的误差为：X/2×100%=10%，X=0.2mL，故应选择刻度吸管吸取标准液。取样品2g，允许的误差为0.2 g，可选用药物天平称取。

3. 葡萄糖铁盐检查时，采用硝酸氧化Fe2+→Fe3+，不再加过硫酸铵，标准液与样品液同法操作。样品液加硝酸煮沸时，采用小火，注意爆沸，必要时补充适量水。

4. 重金属检查时，若样品液有色，需用稀焦糖溶液调节标准液颜色。稀焦糖溶液的制备：取蔗糖置烧杯中，用小火加热使成焦状，然后加水溶解，取上清液备用。根据供试品溶液的颜色深浅，掌握加热程度和加水稀释程度，随加热温度与时间的不同，得到的水溶液呈黄、褐或棕黑色。标准管中加入的稀焦糖溶液量一般控制在1～2滴。

5.葡萄糖砷盐检查时采用湿法破坏，在酸性溶液中用溴进行有机破坏使砷游离。有机破坏在小烧杯中进行，20分钟内要保持过量的溴存在，随时补充消耗的溴化钾溴试液，使溶液呈黄色，20分钟后要将多余的溴除尽，使溶液无色。

6.选择配对的测砷瓶和测砷管，加砷粒前按装好醋酸铅棉花和溴化汞试纸，醋酸铅棉花的填塞松紧度、长短要适宜，溴化汞试纸应盖住测砷管孔，并盖紧盖子，勿使漏气（示范）。加砷粒后必须立即塞紧测砷管，在规定温度下反应1小时。

7.比较氯化钠和葡萄糖中杂质限度检查的几种方法。

附录

A． 氯化物检查法

标准氯化钠溶液的制备: 精密称取干燥至恒重的氯化钠0.165g，置1000mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相当于10μg Cl的标准溶液。

干扰的排除：供试溶液如带颜色，可取供试溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份中加硝酸银试液1.0mL，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5分钟，作为对照溶液；另一份中加硝酸银试液1.0mL与水适量使成50mL，摇匀，在暗处放置5分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。

用滤纸滤过时，应预先用含有硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后再过滤。

B．硫酸盐检查法

标准硫酸钾溶液的制备：精密称取干燥至恒重的硫酸钾0.181g，置1000mL量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相当于100μg SO4的标准溶液。

干扰的排除：供试溶液如带颜色，可取供试溶液两份，分置50mL纳氏比色管中，一份中加25%氯化钡溶液5mL，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准硫酸钾溶液与水适量使成50mL，摇匀，放置10分钟，作为对照溶液；另一份中加25%氯化钡溶液5mL与水适量使成50mL，摇匀，放置10分钟，按上述方法与对照溶液比较，即得。

C．重金属检查法

标准铅溶液的制备：精密称取干燥至恒重的硝酸铅0.160g，置1000mL量瓶中，加硝酸5mL与水50mL溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10mL，置100mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相当于10μg Pb的标准溶液。

干扰的排除：若供试液带颜色，可在标准管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与样品管颜色一致。如在标准管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该药品项下规定的二倍量的供试品和试液，加水或该药品项下规定的溶剂使成30mL，将溶液分成甲乙二等份，乙管中加水或该药品项下规定的溶剂稀释成25mL；甲管中加入硫代乙酰胺试液2mL，摇匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3mm）滤过，然后甲管中加入标准铅溶液一定量，加水或该药品项下规定的溶剂使成25mL；再分别在乙管中加硫代乙酰胺试液2mL，甲管中加水2mL，依法比较，即得。

配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。

D．砷盐检查法

仪器装置：A为100mL标准磨口锥形瓶（测砷瓶）；B为中空的标准磨口塞，上连导气管C；D为具孔的有机玻璃旋塞，E为中央具有圆孔的有机玻璃旋塞盖。

测试时，于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度60~80mm），再于旋塞D的顶端

平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞盖E并旋紧，即得。

标准砷溶液的制备： 精密称取干燥至恒重的三氧化二砷0.132g，置1000mL量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5mL溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10mL，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液10mL，置1000mL量瓶中，加稀硫酸10mL，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1mL相当于1μg As的标准溶液。