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实验开始前清点实验仪器，约半小时。
实验1 药物一般杂质检查一、目的要求1、通过对葡萄糖分析，了解药物的一般杂质检查项目和意义2、掌握葡萄糖分析中氯化物、硫酸盐、铁盐和重金属限度检查的原理和方法二、原理《药物分析》书中一般杂质检查方法中的氯化物检查法、硫酸盐检查法、铁盐检查法和重金属检查法的原理。
Ag+ + Cl-→AgCl↓白色凝乳状的沉淀氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色浑浊液，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银的浑浊液比较，以判断供试品中氯化物是否超过了限量。
Ba2++ SO42-→BaSO4↓硫酸钡微粒硫酸盐的检查是利用SO42-与Ba2+在盐酸酸性溶液中生成的硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件下生成的浑浊比较，以判断供试品中硫酸盐是否超过了限量。
Fe3++ 6SCN-→ [Fe(SCN)6]3- ↓红色可溶性的硫氰酸铁配位离子铁盐在酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性的硫氰酸铁配位离子，与一定量标准铁溶液用同法处理后所显的颜色进行比较，以判断供试品中铁盐是否超过了限量。
CH3CSNH2+ H2O →CH3CONH2+ H2S ( pH =3.5)Pb2++ H2S →PbS↓+ 2H+硫代乙酰胺在弱酸性（pH =3.5醋酸盐缓冲液）条件下，产生硫化氢，与重金属离子（如Pb2+）生成黄色到棕黑色的硫化物浑悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判断供试品中重金属含量是否符合限量规定。
三、操作1、氯化物样品：葡萄糖0.6g————————︳标准：标准NaCl (aq) 6.0mL————︳（标准NaCl (aq)浓度为0.01mgCl-/mL）→用水溶解为25mL→加稀HNO3 10mL→加水至40mL →加AgNO3 溶液1.0mL→加水至50mL→摇匀，暗处放置5min，置黑色背景下-实验台面上，从比色管上方自上向下观察、比较，写出实验现象。
药品的一般杂质检查概述1药品的杂质：系指存在于药物之中的微量无治疗作用，或影响药物稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。
2来源：生产过程中所用原料不纯;制备过程中所用溶剂残留;生产工艺中带来的中间体及副产物;器皿,装置，设备引入；药物因外界条件而引起的变化。
3分类：一般杂质：在自然界分布较广，或在多种药物生产，储存过程中容易引入。
特殊杂质：在一些药物种独特存在。
4杂志限量=杂质量/供试品量%一氯化物检查法1原理：氯化物在酸性溶液中与硝酸银生成氯化银浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在同条件下生成的氯化银浑浊比较，来检查供试品中氯化物的限量。
适用于微量氯化物的检查。
2仪器：纳氏比色管3标准氯化钠溶液的配置：称取氯化钠0.165克，置100ML容量瓶中，溶解并稀释至刻度。
4操作方法：除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25m1(溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml 纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。
另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50m1纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照溶液。
于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。
以上检查方法中使用的标难氯化钠溶液每lml相当于10μg的Cl。
在测定条件下，氯化物浓度以50ml中含50~80μg的Cl为宜。
在此围氯化物所显浑浊梯度明显，便于比较。
5注意事项：检查在硝酸酸性溶液中进行。
加入硝酸可避免弱酸银盐(如碳酸银、磷酸银以及氧化银)沉淀的形成而干扰检查，同时还可加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊。
酸度以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。
为了避免光线使单质银析出，在观察前应在暗处放置5min。
由于氯化银为白色沉淀，比较时应将比色管置黑色背景上，从上方向下观察，比较。
第三章 药物的杂质检查杂质（forin 、impurities ）是指：1. 有毒副作用的物质2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质3. 本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质药物中杂质的来源1. 生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物（2）试剂、溶剂、催化剂类（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质2. 贮藏过程中产生水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等药物中的杂质按来源分为1. 一般杂质（general impurities ）如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。
一般杂质的检查方法收载在中国药典的附录中。
2. 特殊杂质（special impurities ）：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的有关物质。
特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。
杂质限量：指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几来表示药物的杂质检查法1. 对照法限量检查法 （Limit Test ）特点：不需知道杂质的准确含量2. 灵敏度法系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。
特点：不需对照物质3. 比较法含量测定法：测定杂质的绝对含量，如测定吸光度、pH 值等。
特点：准确测定杂质的量，不需对照品杂质限量的计算供试品量允许杂质存在的最大量杂质限量一般杂质检查规则《药品检验操作标准》规定：1. 遵循平行操作原则（1）仪器的配对性：如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过 2mm ，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品同步操作2. 正确的比色、比浊方法3. 检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份氯化物检查法（一）原理 对照法检查方法 药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml （溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml 纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。
实验三 药物一般杂质检查
一、实验目的
熟悉药物中杂质检查的项目、原理和方法，并能进行检查操作。
二、实验原理
1.氯化物检查法
药物中微量氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色混浊液，与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银混浊液比较，以判断药物中氯化物的限量。
↓→++-AgCl Ag Cl
2．硫酸盐检查法
药物中微量硫酸盐与氯化钡在酸性溶液中作用，生成硫酸钡白色混浊液，与一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在相同条件下生成的混浊比较，以判断药物中硫酸盐的限量。
↓→++-4224BaSO Ba SO
3．重金属检查法
采用《中华人民共和国药典》（以下简称“中国药典”）（2005年版二部）收载的重金属检查的第一法。
硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）溶液中水解，产生硫化氢，与微量重金属离子作用，生成黄色到棕黑色的硫化物均匀昏悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，可判定药物中中重金属的限量。
S H CONH CH O H CSNH CH 223223+→+
↓→++PbS S H Pb 22
4．砷盐检查法
采用古蔡氏法检查砷盐。
利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中的微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，可判定药物中砷盐的限量，其反应如下：
O H Zn AsH H Zn AsO 223333393++↑→++++-
223)(22HgBr
AsH HBr HgBr AsH +→+黄色 323)(33HgBr As HBr HgBr AsH +→+棕色
三、实验方法
1．酸碱度 取本品10ml ，加甲基红指示剂2滴，不得显蓝色；另取10ml ，加溴麝香草酚蓝指示剂5滴，不得显蓝色。
2．氯化物、硫酸盐与钙盐 取本品，分置三支试管中，每管各50ml 。
第一管中加硝酸5滴与硝酸银试液1ml ，第二管中加氯化钡试液2ml ，第三管中加草酸铵试液2ml ，均不
得发生混浊。
3．重金属取本品40ml，加醋酸盐缓冲液（Ph3.5）2ml与硫代乙酰胺试液2ml,摇匀，放置2分钟，与标准铅溶液2.0ml加水38ml用同一方法处理后的颜色比较，不得更深（0.00005%）。
4．砷盐的检查
（1）仪器装置：检查前，先在两支检砷器的导气管中装入醋酸铅棉花约60mg（装管高度为60~80mm），再在有机玻璃旋塞的平面上放一片溴化汞试纸（试纸的大小以能覆盖孔径又不露出玻璃平面外为宜），盖上旋塞盖并旋紧。
（2）标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2ml置锥形瓶中，依次加入盐酸5ml与水21ml、碘化钾试液5 ml及酸性氯化亚锡试液5滴，混合后在室温放置10分钟，再加入锌粒2g，迅速将预先装妥醋酸铅棉花与溴化汞试纸并带瓶塞的部分塞紧在锥形瓶口上，保持反应温度在25~40℃，反应45分钟后，取出溴化汞试纸，即得标准砷斑。
（3）供试品砷斑的制备：称取碳酸氢钠1.00 g置锥形瓶中，加水23 ml溶解，小心加入盐酸5 ml后，依次加入碘化钾试液5ml及酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加入锌粒2 g，迅速将预先装妥醋酸铅棉花与溴化汞试纸并带瓶塞的部分塞紧在锥形瓶口上，在与制备标准砷斑相同的温度下反应45分钟后，取出溴化汞试纸，即得供试品砷斑。
（4）比色：比较标准砷斑与供试品砷斑的颜色，供试品砷斑的颜色不得比标准砷斑的颜色深（0.0002%）。
四、注意事项
1．比浊或比色试验所用的纳氏比色管的规格必须一致。
比色、比浊前应使比色管内试剂充分混匀。
比色方法是将两管同位置于白色背景上，从侧面或自上而下观察；比浊方法是将两管同置于黑色背景上，从上向下垂直观察。
所用比色管刻度高低差异不应超过2mm，使用过的比色管应及时清洗，注意不能用毛刷刷洗，可用铬酸洗液浸泡。
2．检查氯化物、硫酸盐、钙盐时，观察是否有轻度混浊，可以水作空白对照进行观察。
3．硫代乙酰胺试液不稳定，应新鲜配制。
药典规定应将配制的4%硫代乙酰胺水溶液置冰箱中保存，并于临用前每1.0ml硫代乙酰胺溶液加混合液（1mol/L）氢氧化钠溶液15ml，水5ml和甘油20ml制成），5.0ml，再置水浴加热20秒钟，冷后，立即使用。
4．（1）醋酸铅棉花不能塞得太紧，否则砷化氢气体上不来，影响检查；也不能塞得太松，否则不能除去全部硫化氢气体。
（2）标准砷斑和供试品砷斑在制作时，从“加碘化钾试液5m l……”起，就应该一起平行操作。
应在同一温度下45分钟后，取出溴化汞试纸。
（3）检砷装置应严密不漏气。
（4）应该严格按照操作顺序进行，不得随意改变加入试剂的顺序。
五、思考题
1．检查酸碱度时，为什么要用甲基红指示液及溴麝香草酚蓝指示液？
2．检查氯化物、硫酸盐、及重金属杂质各依据什么原理？其检查方法与常用的限度检查法有何不同？哪种更严格？
3．检查氯化物、硫酸盐、钙盐及重金属时，应在什么衬底上进行？
4．砷盐检查中加入碘化钾试液与酸性氯化亚锡试液后，须放置10分钟，为什么？。
