RP-HPLC法测定尿囊素乳膏的含量

齐齐哈尔医学院学报２００　堡疆　！鲞箜　塑　

ＲＰ—ＨＰＬＣ法测定尿囊素乳膏的含量　

邵珠民　吕冬梅　韩　强　王　涛　

【摘要】　目的　建立尿囊素乳膏的含量测定方法。方法　以ＸＴｅｒｒａＲＰｌｓ（４．６　ｍｍ×２５０　ｍｍ，　５　ｍ）为色谱柱，甲醇一水（Ｏ．０２：０．７８）为流动相，流速为０．８　ｍｌ・ｍｉｎ－。，检测波长为２１７　ｎｍ，采用反　相高效液相色谱法测定其含量。结果　尿囊素浓度在１２．７８～６８．１６　ｇ・ｍｒ　范围内线性关系良好　

（ｒ＝０．９９９９，＂＝５）；平均回收率为９９．９　；ＲＳＤ为０．６１　（＂＝９）　结论　本方法简便、灵敏、准确，可　

用于该制荆的质量控制。　【关键词】尿囊素　乳膏　反相高效液相色谱法　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｈｅ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ａｌｌａｎｔｏｉｎ　ｉｎ　Ａｌｌａｎｔｏｉｎ　Ｃｒｅａｍ　ｂｙ　ＲＰ—ＨＰＩ　Ｃ　ＳＨＡＯ　Ｚｈｕ—ｍｉｎ．ｅｌ　ａ１．　

（Ｔｈｅ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｘｕｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ．Ｘｕｚｈｏｕ　２２１００２　Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｌｌａｎｔｏｉｎ　ｉｎ　ａｌｌａｎｔｏｉｎ　Ｃｒｅ．ｑｎ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ＸｔｅｒｒａＲＰ１８　ｃｏｌｕｍｎ（２５０ｎｍ×４．６ｎｍ）ｗａｓ　ｕｓｅｄ　Ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　ｎ１ｔ・１ｌ１　ｎｏｌ—ｗａｌｅｒ（０．ｏ２：０．７８，ｖ／ｖ）ａｔ　ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　０．８　ｍｌ・ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２　ｌ　７ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｒ｝１　ｃｏｎｌｃｎｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｉｎｃｉｐａｌ　ａｇｅｎｔ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＲＰ—ＨＰＩ　Ｃ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　

ＡＩｌａｎｔｏｉｎ　ＷａＳ　１　２．７８～６８．１６　ｇ・ｍＩ　（ｒ＝０．９９９９，”一５）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　９９．９　ａｎｄ　ＩｔＳ１）ｗ　０．６１　（ＩＩ一９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉＳ　ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ。ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　

ｑｕａ“１、，【＇ｏｌｉｉ　ｒｏｌ　０ｆ　ｒＩＩＩａｎｌｏｉｎ　ｃｒｅａｍ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　Ａｌｌａｎｔｏｉｎ　Ｃｒｅａｍ　ＲＰ—ＨＰＩ　Ｃ　

尿囊素（Ａｌｌａｎｔｏｉｎ）足一种有多种功用的皮肤科及外科用　

药，具有止血、收敛、和角质溶解作用，在皮肤科应用较广泛，　临床上常用于银屑病、鱼鳞性皮肤病、皮肤干燥皲裂、瘙痒性　皮肤病等的治疗…。根据文献报导ｌ＇　，０．２　的尿囊素的角质　

松解性与１Ｏ　～２Ｏ　尿素相等，而无尿素的刺激性，并具有　

局部麻醉作用，能刺激组织生长，促进细胞新陈代谢，加快伤　口愈合。尿囊素的含量测定多采用分光光度法、薄层扫描法　和ＨＰＩ　Ｃ法　。通过实验研究，采用反相液相色谱法测定　

其含量，取得结果较满意，现报道如下。　１仪器与试药　

美国Ｗａｔｅｒｓ离效液相色谱仪（包括１５２５二元高压梯度　泵、７１７自动进样器、２，１８７双波长检测器）；高速离心机（美国　Ａｂｂｏｔｔ公训）；ＴＧ３２８Ａ型全机械加码分析天平（上海长江科　学仪器，一）；Ｋｓ一８０１）型超声清洗机（宁波海曙科生超声设备　

有限公　）；ＸＷ～８０Ａ旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；　

ＵＶ一２４０１ＰＣ（日本岛津公司）。　尿囊素化学对照品（中国药品生物制品检定所，批号：　

１００４３１—２００４０１）；尿囊素原料（湖南九典制药有限公司，批　号：０５０６２３），含量９９．３　；乳膏基质（天津市天骄制药有限公　司，批号：０６０５ｌ１）；甲醇（上海凌峰化学试剂有限公司，色谱　

纯）；丙三醇、乙醇、丙二醇均为药用或分析纯，水为蒸馏水，尿　囊素乳膏（１　，本院制剂室配制）。　２方法与结果　

２．１　色谱条件　色谱柱：Ｗａｔｅｒｓ　ＸＴｅｒｒａ　ＲＰｌ　８（４．６　ｍｍ×　２５０　ｍｍ，５　ｐ．ｍ）；流动相：甲醇一水（０．０２：０．７８），流速：　

０．８ｍｌ・ｍｉｎ　；检测波长２１７　ｎｍ；灵敏度：２．０００ＡＵＦＳ；柱　

作者单位：徐州医学院附属医院　邮　编２２ｌ００２　收稿日期２００８—０３一ｌｌ　温；３Ｏ℃；进样量２Ｏ　ｌ。　

２．２试液的制备　２．２．１　对照品溶液的制备　准确称取尿囊素对照品约　４０　ｍｇ，置５Ｏ　ｍｌ容量瓶中，加入５Ｏ℃的热蒸馏水溶解，用蒸　馏水定容至５Ｏ　ｍｌ容量瓶中，涡旋２　ｍｉｎ，即得每１　ｍｌ中含尿　囊素０．８５２　ｍｇ的储备液。　

２．２．２供试品溶液的制备　准确称取乳膏约０．２５　ｇ，加约　７Ｏ℃的蒸馏水溶解并完全转移至１００　ｍｌ的容量瓶中，轻轻振　

摇，超声脱气１０　ｍｉｎ，并加水稀释至刻度，摇匀，放置冰箱过　夜，用微孑Ｌ滤膜（Ｏ．４５　ｍ）滤过，得测试样品溶液。　

２．２．３空白乳膏溶液的制备按乳膏制剂处方比例，准确称　取乳膏基质适量，按“２．２．２”方法制备，得空白乳膏基质溶液。　２．３　专属性试验在“２．１”色谱条件下，尿囊素的保留时间　

约为３．９　ｍｉｎ，峰形对称，乳膏中的基质不干扰尿囊素的含量　测定．结果见图１。　

ｌ　Ｉ　●　Ｉ

Ａ、空白；Ｂ、对照品｝Ｃ，供试品；１，尿曩累　圈１高效液相色谱圈　２．４标准曲线的绘制　分别精密吸取对照品储备液０．１５、　０．２５、０．３５、０．４５、０．６０、０．８　ｍｌ，分别置１Ｏ　ｍｌ容量瓶中，用蒸　

馏水稀释至刻度，摇匀，各进样２Ｏ　ｌ。以尿囊素峰面积（Ａ）为　纵坐标，尿囊素浓度（ｃ）为横坐标，进行线性回归，得回归方　

程为Ａ＝１９１．３＋１．４７３×１０‘Ｃ（ｒ＝０．９　９９９，”＝５）。尿囊素　

（下转１４１８页）

　维普资讯 http://www.cqvip.com 椎弓峡部断端骨面处理、以及滑脱椎体下关节突关节面和下　位椎体上关节突关节面的处理，有利于椎板棘突复合体复位　后椎弓峡部断端以及下位关节突关节的骨性融合。为解决复　位后的椎板棘突浮动，我们于棘突椎板连接处锥孔，穿过脊柱　椎弓根钉钉棒固定系统的横连装置，在完成内固定装置的安　装后即可得到棘突和椎板结构的稳定固定，确保椎弓峡部断　端和下位小关节突关节稳定和可靠的骨性融合，有效地避免　术后假关节形成的几率。本组所有１６例峡部裂型腰椎滑脱　患者平均２．６年随访结果疗效满意，修订的Ｓｔａｕｆｆｅｒ－－Ｃｏｖｅｎ—　ｔｒｙ评分【３　由术前平均评分４分（范围０～８分）术后善至１８　分（范围１７～２Ｏ分），未发现继发性、医源性椎管狭窄症状，体　征发生，术后腰髋部疼痛消失或显著缓解，根性症状消失或显　著减轻，下肢麻木无力症状消失、行走正常。随访Ｘ线及ＣＴ　检查提示，椎板棘突复合体回植后位置良好，内固定位置良　好，椎间隙、椎弓峡部及关节突间融合满意，椎管无狭窄。无　内固定松动断裂或椎体滑脱复位失败病例。　３．３椎弓峡部裂型腰椎滑脱的临床应用　本组１６例椎弓峡　部裂型椎体滑脱患者均采用椎板棘突复合体回植术治疗，术　后１～４年随访结果表明疗效满意，未发现假关节以及医源　性、继发性，瘢痕性椎管狭窄情况。该结果表明，椎板棘突复　合体回植术在治疗椎弓峡部裂型腰椎滑脱是可行的，该方案　在达到神经减压、滑脱椎体复位、椎体间融合固定的基础上，　有效地防止了椎板减压所存在的术后医源性、继发性、瘢痕性　椎管狭窄情况，加强了术后脊柱稳定性的重建效果，保证了椎　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｑｉｑｉｈａｒ　Ｍｅｄｉｅａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．１２　

弓峡部裂型椎体滑脱手术治疗的中远期疗效。　参考文　献　［１］Ａｋｅｓｏｎ　ＷＨ，Ｍａｓｓｉｅ　ＪＢ，Ｈｕａｎｇ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｔｏｐｉｃａｌ　ｈｉｇｈ—ｍｏ—　ｌｅｃｕｌａｒ—ｗｅｉｇｈｔ　ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ　ａｎｄ　ａ　ｒｏｏｆｉｎｇ　ｂａｒｒｉｅｒ　ｓｈｅｅｔ　ｅｑｕａｌｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｐｏｓｔ—ｌａｍｉｎｅｃｔｏｍｙ　ｆｉｂｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｓｐｉｎｅ　Ｊ，２００５，５（２）：　ｌ８Ｏ一９Ｏ　［２］唐欣，杨述华．预防椎板切除术后硬膜周围粘连的研究概况　ＥＪ］．中国脊柱脊髓杂志，２００３，１３（１２）：７５４—７５７　［３］Ｈｕａｎｇ　ＲＣ，Ｔｒｏｐｉａｎｏ　Ｐ，Ｍａｒｎａｙ　Ｔ．Ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｍｏｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｄ—　ｊａｃｅｎｔ　ｌｅｖｅｌ　ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｌｕｍｂａｒ　ｔｏｔａｌ　ｄｉｓｃ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｌ－Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｓｐｉｎｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２００６，２：２４２—２４７　［４］卢廷胜，吕则文，桑仲亮，等．椎管成形术治疗腰椎管滑脱症　［Ｊ］．中国脊柱脊髓杂志，ｉ９９４．４（１）：３７—３８　［５］　张惠民．椎板成形术在治疗腰椎滑脱中的应用［Ｊ］．中国脊柱脊　髓杂志，２０００，１０（５）：３００—３０１　［６］戴力扬，刘洪奎．腰椎椎弓峡部裂的病因与手术治疗ｌ－Ｊ］．中国　脊柱脊髓杂志，ｉ９９２，２（２）：８９—９２　［７］　Ｓｅｉｔｓａｌｏ　Ｓ（）ｐｅｒａｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ｓｐｏｎｄｙｌｏｌｉｓｔｈｅ　ｓｊｓ　ｉｎ　ｙｏｕｎｇ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｊｏｉｎｔ　Ｓｕｒｇ（Ｂｒ），　１９９０，７２：９０８—９１３　［８］Ｈｅｆｔｉ　Ｆ，Ｓｅｅｌｉｇ　Ｗ，Ｍｒｓｃｈｅｒ　Ｅ．Ｒｅｐａｉｒ　ｏｆ　ｌｕｍｂａｒ　ｓｐｏｎｄｙｌｏｌｙｓｉｓ　ｗｉｔｈ　ａ　ｈｏｏｋｓｃｒｅｗ［Ｊ］．１ｎｔ　Ｏｒｔｈｏｐ，１９９２，１　６：８１—８５　［９］戴力扬，贾连顺，哀文，等．峡部植骨治疗腰椎椎ｔｊ峡部裂和腰　推滑脱ｌ－Ｊ］．中国脊柱脊髓杂志．Ｉ９９７，７（２）：６，１—６６　［１ｏ］杨建东，贾连顺，李家顺，等．峡部植骨治疗　纯腰椎椎，ｊ峡部　裂ｌ－Ｊ］．中国矫形外科杂志，２００４，１２（６）：４１０—４１１　

（上接１４１５页）　检测浓度在１２．７８￣６８．１６／ｌｇ・ｍｌ　范围内线性关系良好。　２．５精密度试验　取浓度为２１．３Ｏ，３８．３４　ｇ・ｍｒ。对照品　溶液，按“２．１”色谱条件连续进样６次，根据测定的尿囊素的　峰面积计算ＲｓＤ分别为０．１４　、０．２１　。　２．６　回收率试验　精密量取尿囊素对照品储备液适量共９　份，按处方比例加人空白乳膏基质，用水稀释成适当浓度。按　“２．２．２”项下方法操作，分别取滤过液进样，将峰面积带入回　归方程计算回收率。结果见表１。　裹１　回收率试验结果　Ｉ　＝９）　

１８．１２　１８．１２　ｌ８．１２　２７．２９　２７．２９　２７．２９　５４．５８　５４．５８　５４．５８　１８．１９　ｌ８．ｏｏ　１８．１６　２６．９０　２７．４３　２７．３１　５４．７５　５４．４７　５４．５５　

２．７稳定性试验在本试验条件下，对照品及供试品溶液　室温放置０、２、４、６、８、２４　ｈ后，测定尿囊素的浓度，结果表明，　尿囊素在２４　ｈ内稳定，ＲＳＤ为０．６４　。　２．８样品测定　按“２．２．２”项下制备供试品溶液，按照“２．１”　项下色谱条件各进２Ｏ　ｌ，以峰面积带入回归方程计算样品的　含量，结果详见表２。　裹２样品含量测定结果　（