雄激素依赖型与非依赖型前列腺癌基因芯片数据分析

雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞亚系模型的建立孔德玉;杨冬梅;陈艳媛;王宇;张金桥;高萌;方芳【摘要】目的利用雄激素递减法建立雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞亚系模型LNCaP-AI.方法利用活性炭/葡聚糖处理的血清模拟去雄激素环境培养LNCaP 细胞,逐渐递减培养基中雄激素10 d,然后在无雄激素环境中继续培养6个月,培养出能够在无雄激素环境中生长的LNCaP-AI细胞亚系.采用MTT和ELISA法检测LNCaP-AI细胞在去雄激素环境下的增殖能力和前列腺特异性抗原(PSA)的水平.结果 LNCaP细胞在去雄激素环境培养初期生长缓慢,细胞形态呈神经内分泌样改变,经过6个月的连续无雄激素培养,细胞恢复以前的形态和生长.MTT检测表明LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中生长,通过ELISA检测PSA的分泌提示LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中恢复分泌PSA的功能.结论激素递减法成功的建立了AIPC细胞亚系模型LNCaP-AI,利用该模型能够模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2012(033)006【总页数】3页(P361-363)【关键词】前列腺癌;雄激素非依赖;LNCaP【作者】孔德玉;杨冬梅;陈艳媛;王宇;张金桥;高萌;方芳【作者单位】吉林医药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院,吉林吉林132013;吉林医药学院,吉林吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R737.25在发达国家前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤［1］。

随着生活方式的改变和社会老龄化，我国前列腺癌发病率呈逐年增高的趋势。

雄激素阻断疗法(androgen deprivation therapy，ADT)仍然是前列腺癌的主要治疗手段。

论 著 中外健康文摘临床医师　2008年7月第5卷第7期　W orl d Hea lth D ig e stM edica l Peri odica l 雄激素非依赖性前列腺癌组织中同源框基因NKX3.1m RN A和蛋白的表达及意义■王　瑾1　李海潮1　李双平2　杨　涛3(11山西医科大学附属大同第三医院泌尿外科　037008　21山西医科大学附属第二医院泌尿外科　03700831山西医科大学分子生物学院　037008)【摘要】目的:分析同源框基因NK X311和蛋白在雄激素非依性型前列腺癌组织表达状况及意义。

方法:采用半定量RT2PCR和免疫组化检测12例H I PC、雄激素依赖性前列腺癌23例、BPH19例组织标本NK X311和蛋白表达状况。

结果:RT2PCR检测显示12例H I CP组织NKX311表达率9116%,23例雄激素非依赖性PC组织标本中,有4例表达,表达率为1713%(4/23)(P<0101)。

免疫组化检测显示NK X311蛋白主要分布在H IPC总阳性表达率为8313%,BPH蛋白总阳性表达率为8412%;雄激素依赖性前列腺组织为1314%,(P<0105)。

结论:NK X311基因为前列腺器官特异性基因,其高表达与H IPC关系密切。

【关键词】雄激素非依赖性前列腺癌;雄激素依赖型前列腺癌;同源框基因【中图分类号】R737125 【文献标识码】A The Spec if i c si gn if i ca nce of Expr e ssio n of Ho m eobox Gen eNKX311m RNA a nd Pr ote i n i n horm one i ndepen den t pr ost a te cancerW a ng J i n,Li Ha i chao,L i S hua ng p i ng,Yang tao(Depa rt m ent of U r ology,Da t on Third Peop le Hospit a l,ShanxiM edi ca l Uni ve rsit y,Dat on037008,China【Ab str a ct】Obj ec tive T o de ter m ine ex pressi ons of NK X311mRNA and p r o t e in in hor mone independent p rostate cance r and t o investigate the si gnificance of NKX311s pecific ex pressi onsMe th ods52p r o static tissue s(12H IPC,23hor mone dependent prost a te cancer,9BPH)were an2 a lyzed f or the detec ti on of the ex p re ssi ons of NKX311mRNA and p r ote in by using sem i2quantit a tive R T2PCR i mm unohistochem ical tech2 n i que1Re sults I n12H IPC tissue s,NKX311mRNA was de tec ted in11spec i m ens(9116%),wherea s in23hor mone dependent p r o state cancer s pec i m ens NK X311mRNA was nega tive l y expressed,except f or4ex p re ssed(1713%)(P<0101)1The ex p ression rati o of NK X311 p r ote i n i n t he H IPC wa s8313%,but in B PH was8412%,i n hor mone dependent prosta t e cancer wa s1314%(P<0105)res pec tive2 ly1Conclusi on Its suggested that NKX311is the prostste2s pecific Homeobox Gene,which m ay play a i m port ant role in the deve l op m ent of hor2 mone independent prosta t e cance r1【Key wor ds】H I CP hor mone dependent p rosta t e cancer NKX311NKX311(又称NK X3A)是新近发现的前列腺特异性和雄激素调节基因,该基因属于同源框基因家族。

基因芯片技术筛选前列腺癌雄激素去势抵抗相关基因马瑾璐;王丽娟;朱青;金桂花;郭希婧;何晨琛;韩苏夏【期刊名称】《西部医学》【年(卷),期】2014(26)9【摘要】目的利用基因芯片技术高通量筛选前列腺癌雄激素去势抵抗相关基因,为研究雄激素去势抵抗进展前列腺癌的分子机制奠定基础.方法提取并纯化LNCaP及C4～2细胞的总mRNA,反转录合成荧光分子标记的cDNA,与基因芯片杂交;采用Genepix Pro6.0图像分析软件分析,筛选表达差异的基因;KEGG富集分析每个pathway中差异基因富集的显著性.结果在表达谱芯片中筛选出417个差异表达基因,包括301个C4～2细胞中表达上调基因,116个表达下调基因;KEGG富集分析显示,与前列腺癌相关的表达差异的基因有GF、EGFR、HSP、BAD、P21、E2F、Raf、CyclinE、PSA和PI3K等,其中EGFR、Raf表达差异最明显.结论 EGFR、Raf基因表达异常可能在雄激素去势抵抗型前列腺癌的形成过程中发挥着重要作用,本研究为前列腺癌去势抵抗进展分子机制的探索提供了理论依据.【总页数】4页(P1113-1116)【作者】马瑾璐;王丽娟;朱青;金桂花;郭希婧;何晨琛;韩苏夏【作者单位】西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤内科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤内科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤内科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科,陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R737.25【相关文献】1.去势抵抗的前列腺癌的新疗法:抑制雄激素的持续分泌和雄激素受体介导的信号转导 [J], 陈磊2.应用基因芯片技术筛选前列腺癌雄激素去势抵抗相关的基因 [J], 王丽娟;金桂花;朱青;周侠;李萌;白娥;韩苏夏3.Journal of Clinical Oncology:靶向雄激素受体和DNA修复基因治疗转移性去势抵抗型前列腺癌:NCI9012结果 [J], 吴开杰4.雄激素受体调控基因组表达与去势抵抗性前列腺癌关系探索 [J], 邵志强;刘子丰;张振;李扬;杨渝5.应用基因芯片技术筛选前列腺癌转移相关基因 [J], 贺松琴;侯建国;谭晓洁;常文军;陈北川;曹广文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

雄激素非依赖性前列腺癌细胞系代谢组学的初步研究的开题报告题目：雄激素非依赖性前列腺癌细胞系代谢组学的初步研究研究背景和意义：前列腺癌（PCa）是常见的男性恶性肿瘤，雄激素是其主要的生物学调节因子。

目前，对于雄激素非依赖性前列腺癌的代谢组学研究较少。

因此，了解雄激素非依赖性前列腺癌细胞系的代谢组学特征及其与原发性前列腺癌的差异，有助于深入了解其致病机制，从而为寻找新的治疗策略提供依据。

研究内容和方法：本研究拟应用液质联用（LC-MS）技术，对雄激素非依赖性前列腺癌细胞系进行代谢组学分析。

初步计划采用细胞培养及收集代谢产物，建立细胞系代谢组学数据库。

然后应用主成分分析（PCA）等多元统计工具，对采集的数据进行分析，并与原发性前列腺癌细胞系进行比较，探寻其特征与差异。

预期成果和意义：本研究预期能够建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞系的代谢组学数据库，并发现其与原发性前列腺癌细胞系的差异。

这将有助于深入了解雄激素非依赖性前列腺癌的致病机制。

研究结果也将为寻找新的治疗策略提供依据，有望推动前列腺癌的治疗研究和临床应用。

研究难点和解决方案：1. 细胞系繁殖与代谢产物采集：采用适宜的培养基、细胞密度和时间点，结合化学技术，尽可能收集多样性的代谢产物。

2. 代谢产物分析：通过液质联用分析技术，建立多维数据分析模型，从大量的代谢产物中寻找到与细胞系特异性相对应的代谢物。

3. 数据分析：采用合适的多元统计分析方法，如主成分分析等，将采集的大数据进行挖掘，提取重要信息，发现特征与差异。

研究计划和时间表：本研究拟于2021年9月启动，预计需两年左右完成。

计划分如下步骤：1. 建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞系代谢组学数据库：第1-12个月。

2. 采集代谢产物，通过液质联用分析技术进行分析：第13-21个月。

3. 采用主成分分析等方法，对差异代谢物进行筛选与验证：第22-24个月。

4. 数据呈现：第25-26个月。

总结：本研究将建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞系的代谢组学数据库，并发现其与原发性前列腺癌细胞系的差异，从而有助于深入了解其致病机制，为寻找新的治疗策略提供依据，有望推动前列腺癌的治疗研究和临床应用。

中文摘要前言前列腺癌是男性的一种常见的恶性肿瘤，在美国和欧洲尤其多见，有报道表明目前前列腺癌已经成为美国男性中最常见的肿瘤，是北美和西欧男性中占首位的癌症死亡原因，而在我国其发病率也呈逐年上升趋势。

目前，对于前列腺癌尚需一种较为敏感和可靠的早期诊断和预防方法。

既往有人报导谷胱苷肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ－Ｐｉ）和雄激素受体（ａｎｄｒｏｇｅｎｒｅｃｉｐｔｏｒ、ＡＲ）在前列腺癌中的表达呈正相关，也有人报导二者无相关性。

我们应用免疫组织化学方法检测（ＧＳＴ－Ｐｉ）和雄激素受体（ＡＲ）在前列腺癌及前列腺增生症中的表达，探讨其在前列腺癌发生及发展中的意义。

材料和方法１．标本来源：收集手术治疗并经病理证实的前列腺腺癌及前列腺增生症标本各２０例，前列腺癌标本按Ｇｌｅａｓｏｎ分级标准：Ｉ级２例，Ⅱ级１０例，Ⅲ级６例，Ⅳ级２例；按Ｊｅｗｅｉｔ分期标准：Ａ期３侧，Ｂ期８例，Ｃ期７例，Ｄ期２例。

２．免疫组化方法：采用兔抗人ＧＳＴ－Ｐｉ（１：１０００）多克隆抗体，兔抗人ＡＲ（１：４００）多克隆抗体及ＳＰ试剂盒。

ＧＳＴ－Ｐｉ和ＡＲ的免疫组化研究采用ＳＰ法，所有步骤严格按照试剂说明书操作。

３．结果判定：采用网格测试法，每例选择９个不重复、不重叠的４０“Ｘ”视野，根据ＧＳＴ．Ｐｉ和ＡＲ阳性细胞数占视野中总细胞数的百分比分为：阴性（·）：无阳性着色或阳性细胞数＜５％；阳性（＋）：阳性细胞数＞５％。

４．统计方法：ＧＳＴ．Ｐｉ和ＡＲ各组间比较采用菲配对资辩ｔ检验，ＧＳＴ－Ｐｉ和ＡＲ在前列腺癌中表达关系采用Ｘ２检验，ＧＳＴ—Ｐｉ和ＡＲ在前列腺癌中的表达与ＰＳＡ分泌水平之间的关系采用Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关分析。

结果１．ＧＳＴ—Ｐｉ和ＡＲ在前列腺癌中的表达ＧＳＴ－Ｐｉ定位于癌细胞膜和胞质，阳性染色表现为胞膜及胞浆染成棕黄色，见照片１。

ＡＲ定位于癌细胞核，阳性染色表现为胞核染成棕褐色，见照片２。

ＧＳＴ—Ｐｉ的表达在肿瘤各病理分级及临床分期间均无显著差异（Ｐ＞０．０５，Ｐ＞０．０５），而ＡＲ的表达在肿瘤各病理分级间存在显著差异（Ｐ＜０．０５），其表达在肿瘤的各临床分期间无明显差异（Ｐ＞０．０５）。

雄激素非依赖性前列腺癌的研究进展[关键词]雄激素前列腺癌健康网讯宋明山邢念增前列腺癌是欧美国家男性最常见的恶性肿瘤之一。

随着我国人口老龄化及诊断水平提高，发病率也有明显增高趋势。

临床应用前列腺特异抗原检测后，的检出率大大增加。

对于局限性，应用放射和外科手术治疗取得较好的疗效，但对有转移的却缺乏有效的治疗措施。

1941年和首先发现细胞依赖雄激素刺激生长，提出雄激素阻断治疗，手术或药物去势成为晚期治疗的金标准。

但雄激素完全阻断治疗却难以防止疾病的进展，部分患者会发生对雄激素治疗不敏感。

临床上，通常将应用雄激素完全阻断但疾病仍有进展的前列腺癌称为雄激素非依赖性前列腺癌。

本文对的发病机制及治疗的研究进展予以综述。

1雄激素非依赖性前列腺癌发病机制前列腺癌为一异质性疾病，其由雄激素依赖性向雄激素非依赖性转变的机制尚不十分清楚，研究着重于以下几方面。

11雄激素受体突变与的发生与突变的关系密切，在发展过程中并没有消失［1，2］，而且在雄激素祛除治疗后复发的中反而有扩增［3，4］，因而推测水平的提高能使肿瘤细胞在雄激素低水平的环境中生长。

但等［5］研究证明的突变能够破坏的功能或使之减低，导致靶器官丧失对雄激素反应能力，从而引起雄激素完全或部分不敏感性。

的突变能显著影响的进展，等［6］发现，同原发肿瘤相比，在有转移的中突变的频率较高。

迄今为止，已经证明有几种突变影响的功能。

在雄激素依赖性细胞株研究中发现配体结构区877点突变能改变的功能，这样不仅雄激素，而且孕激素、雌二醇等都能激活，甚至非固醇类抗雄激素制剂亦能激活［7］，这使雄激素去除治疗无效。

877点突变在晚期中也被证明存在［8，9］。

其他被证明能影响功能的点突变有715［10］，701［11］等。

12信号传导系统与前列腺细胞的增殖、存活依赖于生长因子、细胞外基质和其他刺激物产生的信号激活细胞边缘受体。

这些信号被依次传递至细胞核内，导致转录因子的激活，从而提高或降低调控细胞增殖、分化和凋亡的基因的表达水平。

雄激素受体在不同激素依赖特性的前列腺癌细胞株中的表达及活性韩毅力;罗勇;贺大林;祝广峰;程鹤鹏【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2007(28)23【摘要】目的:探讨雄激素受体(AR)在前列腺癌激素依赖特性转变过程中的可能作用.方法:分别应用Western Blot和RT-PCR法检测四种前列腺癌细胞株(LNCaP,C4,C4-2及C4-2B)的AR蛋白表达差异和转录活性差异状况,并初步分析其在前列腺癌雄激素依赖特性转化过程中所发挥的作用.结果:AR在雄激素依赖的低转移性细胞株LNCaP中的蛋白表达量和转录活性最低,同时AR在雄激素非依赖的高转移性细胞株C4,C4-2及C4-2B细胞株中的蛋白表达、转录活性却逐渐增高.结论:AR在雄激素依赖特性和转移潜能不同的前列腺癌细胞株之间确实存在着有意义的差异表达,而这种表达差异可能在影响前列腺癌激素依赖特性转变过程中发挥重要作用.【总页数】3页(P2119-2121)【作者】韩毅力;罗勇;贺大林;祝广峰;程鹤鹏【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061;首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科,北京,100029;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061;西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,陕西,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R737.25【相关文献】1.类固醇受体辅活化子-1和核受体辅阻遏子在雄激素非依赖性前列腺癌的表达及临床意义 [J], 甘道举;江军;陈善勤;赖建平;孙广运;肖华亮;靳风烁2.非依赖雄激素的前列腺癌细胞株中雄激素受体的表达 [J], 赵军3.非依赖雄激素的前列腺癌细胞株中雄激素受体的表达 [J], ChlenskiA4.雄激素受体在前列腺癌细胞激素非依赖转化中的表达及调控 [J], 王海峰;刘武江;金杰;周利群;梁丽莉;王莹;郭应禄5.核受体辅阻遏子在雄激素非依赖性前列腺癌中的表达及临床意义 [J], 甘道举;江军;王洛夫;张尧;兰卫华;向德兵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

KHSRP通过ANK3调节前列腺癌细胞对雄激素的反应性蔡人杰;徐明【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2024(44)4【摘要】目的·研究KH型剪接调节蛋白(KH-type splicing regulatory protein,KHSRP)对前列腺癌细胞增殖能力的影响及其下游基因的表达调控,考察KHSRP在前列腺癌由雄激素依赖型向非依赖型转变过程中的潜在作用及机制。

方法·通过重组慢病毒感染雄激素依赖型前列腺癌LNCaP细胞和雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞,分别构建KHSRP功能性缺失/获得的稳定细胞株,并比较KHSRP 在2种细胞之间的功能差异。

采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测稳定细胞株中KHSRP、雄激素受体(androgen receptor,AR)及锚定蛋白3(ankyrin3,ANK3)的表达量。

通过细胞增殖实验、平板克隆实验、小鼠成瘤实验等检测KHSRP对LNCaP细胞增殖能力的影响。

通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)检测KHSRP影响的下游基因,并通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测KHSRP下游基因的mRNA表达量。

结合癌细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)、癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)、基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库,分析研究ANK3和KHSRP在前列腺组织样本中的表达情况以及ANK3在不同前列腺癌细胞株中的表达差异。

结果·GEO数据分析结果显示KHSRP在前列腺癌组织中的表达高于良性前列腺组织,提示其与前列腺癌的发生相关。

细胞增殖实验、平板克隆实验、小鼠成瘤实验结果显示KHSRP的表达与LNCaP细胞增殖能力呈负相关,提示KHSRP可以抑制前列腺癌细胞的增殖,且KHSRP对LNCaP细胞增殖能力的影响强于对DU145细胞的影响。

关于雄激素受体在不同激素依赖特性的前列腺癌细胞株中的表达及活性【摘要】目的：探讨雄激素受体（AR）在前列腺癌激素依赖特性转变过程中的可能作用. 方法：分别应用Western Blot和RT��PCR法检测四种前列腺癌细胞株（LNCaP，C4，C4��2及C4��2B）的AR蛋白表达差异和转录活性差异状况，并初步分析其在前列腺癌雄激素依赖特性转化过程中所发挥的作用. 结果：AR在雄激素依赖的低转移性细胞株LNCaP中的蛋白表达量和转录活性最低，同时AR在雄激素非依赖的高转移性细胞株C4， C4��2及C4��2B细胞株中的蛋白表达、转录活性却逐渐增高. 结论：AR在雄激素依赖特性和转移潜能不同的前列腺癌细胞株之间确实存在着有意义的差异表达，而这种表达差异可能在影响前列腺癌激素依赖特性转变过程中发挥重要作用.【关键词】雄激素受体前列腺肿瘤素非依赖性0引言恶性程度低的部分前列腺癌（prostatic carcinoma， PCA）患者可以长期带瘤生存，部分恶性程度高的PCA患者却进展很快、广泛转移，尤其易对抗雄激素治疗产生耐受特性，是导致复发和死亡的主要原因. 对于雄激素非依赖前列腺癌（androgen independent prostate cancer， AIPC）的发生原因，尽管已做了大量基础与临床的研究工作，但是确切分子机制目前仍然不清楚. 因此我们采用能模拟PCA临床进展过程的细胞模型，即LNCaP/C4��2细胞系列（包括C4，C42，C4��2B细胞），检测低转移的雄激素依赖型前列腺癌细胞（ADPC）细胞LNCaP 和高转移的AIPC C4，C4��2，C4��2B细胞中雄激素受体(androgenreceptor， AR)的蛋白表达和基因转录活性，旨在探讨AR在PCA细胞雄激素依赖特性转变过程中可能的作用.1材料和方法1.1材料人Pca细胞株LNCaP及其亚细胞系C4，C4��2和C4��2B细胞均由美国Emory大学Leland WK Chung教授馈赠. Trizol购自Invitrogen公司. RT 及PCR试剂盒均购自Fermentas公司. 小鼠抗人AR mAb购自美国Santa Cruz公司，兔抗人β��actin mAb及辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠和羊抗兔二抗均购自武汉博士德公司.1.2方法1.2.1细胞培养用含100 mL/L胎牛血清（杭州四季青公司）的T��medium（美国Gibco公司）在37℃， 50 mL/L CO2的孵箱内培养，以1.25 g/L胰酶和0.2 g/L EDTA的混合液消化传代.1.2.2RT��PCR提取细胞总RNA［方法参照分子克隆指南（第3版）］.RT��PCR反应： 0.5 mL离心管中加入4 μg总RNA，Oligo (dT) 18 μL，加DEPC处理水至12 μL，70℃温浴5 min后取出冰浴，依次加入5×反应缓冲液4 μL，10 mmol/L dNTP 2 μL，RNA酶抑制剂1 μL (20 U)，37℃温浴5 min后，加1 μL (200 U) M��MuLV逆转录酶，混匀后42℃温浴1 h，70℃灭活10 min. PCR反应体系为2×反应缓冲液12.5 μL、引物正反义链各0.5 μL、模板DNA 2 μL以及DEPC处理水9.5 μL至终体积25 μL. AR的反应参数：93℃ 3 min，进入循环，93℃ 45 s，55℃ 45 s，72℃ 45 s；29个循环，72℃ 10 min.β��actin的反应参数：94℃ 3 min，进入循环，94℃ 45 s，58℃ 45 s，72℃ 45 s；29个循环后，72℃ 5 min. AR引物正义链：5′ GCAATCATTTCTGCTGGCGCA 3′，反义链：5′ AGCTACTCCGGACCTTACG 3′. β��actin正义链：5′ GTGGGGCGCCCCAGGCACCA 3′，反义链：5′ CTTCCTTAATGTCACGCACGATTTC 3′. 引物由上海生物工程公司合成.1.2.3蛋白提取将处于对数生长期且状态良好的细胞，用10 g/L NP��40细胞裂解液（10 g/L NP��40，pH 7.4 Tris碱50 mmol/L， NaCl 150 mmol/L，1 g/L SDS， 5 g/L脱氧胆酸盐，200 mg/L苯甲基磺酰氟，50 mg/L抑肽酶）裂解细胞，震荡混匀. 4℃静置30 min，然后在4℃条件下，2 0627 g离心10 min，提取上清总蛋白. 用考马斯亮蓝G��250定量，最后100℃沸水中变性10 min.1.2.4Western Blot按每孔20 μg上样， SDS PAGE 90 V电压下分离，再用25 V电压将凝胶上的蛋白半干转至硝酸纤维素膜（NC膜）上. 5 g/L脱脂奶粉将膜封闭2 h后，加入一抗（小鼠抗人AR，稀释度为1∶300；兔抗人β��actin，稀释度为1∶3000），4℃孵育过夜，TBS充分漂洗后加入辣根过氧化物酶标记的二抗（稀释度为1∶3000）孵育2 h. 化学发光显色.2结果2.1AR在不同雄激素依赖特性细胞株中的蛋白差异表达情况Western Blot显示AR在LNCaP， C4， C4��2及C4��2B细胞中均有较高程度的表达（图1），随着肿瘤细胞的恶性程度增强而表达逐渐增强. 这表明，AR在LNCaP，C4，C4��2及C4��2B细胞中的表达可能与细胞适应低水平雄激素环境的能力有关系.2.2不同雄激素依赖特性细胞株中的AR基因转录活性分析AR mRNA在激素依赖特性及转移特性不同的LNCaP，C4，C4��2及C4��2B细胞中均可被扩增出来，尤其在雄激素非依赖的高转移特性的细胞系C4，C4��2，C4��2B中，转录活性更高(图2). 这表明，AR转录活性增强可能与细胞的雄激素非依赖特性机制有关.图1AR在不同雄激素依赖特性细胞株中的蛋白差异表达图2不同雄激素依赖特性细胞株中的AR基因转录活性分析3讨论雄激素非依赖性PCA的确切发生机制尚未完全明了，关于PCA雄激素敏感性改变的原因，主要有几个假说［1-2］. 这些研究说明了PCA激素依赖特性转变机制的复杂性，此外，组织学标本的体内生物学差异，或非亲本细胞株之间的基因差异等因素也存在影响. 因此，对于PCA生物学特性转变机制的研究，由于缺乏准确模拟其临床进展特点的细胞和动物模型，从而限制了相关研究的进展.LNCaP细胞是ADPC细胞，几乎无侵袭及转移能力，而且在裸鼠体内成瘤率低. 而LNCaP细胞亚系C4， C4��2， C4��2B为AIPC细胞，不但可以在去势裸鼠体内生长成瘤，而且局部侵袭及远处转移能力逐渐增强，尤其是特异性骨转移倾向逐渐明显，为研究Pca的进展机制建立了很好的研究平台［3］.我们应用同一亲本起源的LNCaP/C4��2细胞模型，观察AR在其中的蛋白表达和基因转录活性，发现二者均随着细胞激素依赖特性改变和转移能力增强而增强. 我们认为，这与PCA细胞适应低水平雄激素环境密切相关，AR表达及转录水平的升高，使AR对低浓度雄激素的敏感性增强，PCA细胞失去对正常生长的调控，在极低浓度雄激素环境下仍能无限增殖，这可能是AIPC产生的重要机制之一.过去认为AIPC是由于AR表达蛋白下调或缺乏引起，但是，Brown等［4］检查18例AIPC的AR和9例原发肿瘤相比较，应用FISH分析发现9/18的HRPC有AR基因扩增，而未治疗的原发前列腺癌中无AR基因扩增，提示AIPC有AR基因的扩增. 国内张勇等［5］采用RBA法研究证实，AIPC的AR表达量高于ADPC的AR表达量. 甘道举等［6］用免疫组化两步法检测15例国人AIPC发现，1例(1/15) AIPC无AR表达，其余14例(14/15) AR表达均为强阳性，AIPC的AR染色的平均光密度值较ADPC升高，表明AIPC有更高的AR基因扩增率. Chen等［7］还证实，30 %的AIPC存在AR基因扩增及AR转录水平升高. 这与我们的研究结果类似. 研究发现，AR转录除可以被雄激素�彩芴逍藕磐揪都せ钔猓�还可以被该路径以外的旁路所激活. 生长因子（如IGF， EGF，TGFα， KGF）， LHRH， TH，IL��6等调控失衡后，均可通过自分泌或旁分泌的方式直接或间接改变AR的磷酸化状态，激活AR的转录［8］. 研究表明，多数生长因子信号传导都是经过一系列酪氨酸磷酸化过程实现的，在这个过程中，有丝分裂激活蛋白激酶(MAPK)磷酸化激活显得尤为重要，ADPC和AIPC细胞生长和增生都涉及到MAPK的磷酸化激活.IL��6可通过MAPK和STAT3激活AR［9］，无需雄激素的参与. 这些生长因子通过旁路反常激活AR可能为雄激素非依赖细胞提供了逃避正常生长调控的途径，可能是激素治疗失败的又一个原因. 从这个角度来看，我们的研究结果可以被理解为：AR表达及转录水平的升高是细胞为接受雄激素以外的其他细胞因子信号作准备，通过变异的AR信号传导途径激活PCA细胞的增殖和进展. 本研究进一步确认了AR转录增强和表达增高与PCA的激素依赖特性转变之间具有密切的联系.【参考文献】［1］ So A， Gleave M， Hurtado��Col A， et al. Mechanisms of the development of androgen independence in prostate cancer［J］. World J Urol， 2005，23(1):1-9.［2］ De La Taille A， Vacherot F， Salomon L， et al.Hormone��refractory prostate cancer: A multi��step andmulti��event process［J］. Prostate Cancer Prostatic Dis， 2001， 4(4): 204-212.［3］ Rubin J， Chung LW， Fan X， et al. Prostate carcinoma cells that have resided in bone have an upregulated IGF��I axis［J］. Prostate，2004，58(1):41-49.［4］ Brown RS， Edwards J， Dogan A， et al. Amplification of the androgen receptor gene in bone metastases from hormone��refractory prostate cancer［J］. J Pathol， 2002，198(2):237-244.［5］张勇，陈炜，胡笑克，等. 激素难治性前列腺癌组织中雄激素受体蛋白表达的研究［J］. 癌症， 2003， 22(1): 95-97.［6］甘道举，江军，陈善勤，等. 激素难治性前列腺癌组织中雄激素受体蛋白表达的研究［J］. 临床泌尿外科杂志， 2006， 21(4): 279-281.［7］ Chen CD， Welsbie DS， Tran C， et al. Molecular determinants of resistance to antiandrogen therapy［J］. Nat Med， 2004， 10(1): 33-39.［8］ Richter E， Srivastava S， Dobi A. Androgen receptor and prostate cancer［J］. Prostate Cancer Prostatic Dis， 2007， 10(2):114-118.［9］ Ueda T， Mawji NR， Bruchovsky N， et al. Ligand��independent activation of the androgen receptor by interleukin��6 and the role of steroid receptor coactivator��1 in prostate cancer cells［J］. J Biol Chem， 2002， 277(41): 38087-38094.。

前列腺癌雄激素依赖特性转变的生物学机制的研究进展姜永光;罗勇【期刊名称】《现代泌尿外科杂志》【年(卷),期】2008(13)6【摘要】前列腺癌（PCa）是男性泌尿生殖系统的常见肿瘤，其发病率不但在欧美国家高居首位，而且在中国的发病率也呈显著上升趋势。

早期，激素依赖性前列腺癌（HDPC）可以通过内分泌治疗达到缩小瘤体、降低血PSA的目的，但在治疗1～2年后，逐渐演化为激素非依赖性前列腺癌（HIPC），导致患者最终死于激素不敏感细胞的广泛转移。

为了解释这种生物学现象，并为PCa临床治疗的突破寻找理论依据，学术界对PCa激素敏感性的转变机制进行了大量研究，并产生过诸如克隆选择学说、癌细胞适应学说、信号传导途径改变学说、雄激素受体（AR）变异学说等多种推测。

【总页数】4页(P411-414)【作者】姜永光;罗勇【作者单位】首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科,北京,100029;首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科,北京,100029【正文语种】中文【中图分类】R737【相关文献】1.雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌差异膜抗原的筛选 [J], 张晓波;唐正严;齐琳;陈合群;罗启占2.多西他赛对雄激素依赖型及非依赖亚型前列腺癌细胞中C-jun与雄激素受体相互作用的影响 [J], 陈玢屾;徐亚文;徐啊白;刘春晓;郑少波;李虎林;许凯3.雄激素受体在不同激素依赖特性的前列腺癌细胞株中的表达及活性 [J], 韩毅力;罗勇;贺大林;祝广峰;程鹤鹏4.雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化 [J], 吕涛;田斌群;郑新民;李世文5.激素非依赖性前列腺癌生物学机制的研究进展 [J], 陈永胜;李翼飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

crpc前列腺癌雄激素非依赖性前列腺癌的研究进展1.2.1雄激素受体信号研究表明AR可能为与DNA作用的受体复合物的一部分，这一受体复合物内许多辅因子、雄激素共激活因子，能增强或能抑制AR的转录活性AIPC的发生与AR的过度表达有关已得到证明，而AR的过度表达与不同的生长因子及细胞因子激发有关已在AIPC细胞中得到证明，这些因子包括表皮生长因子（EGF），胰岛素样生长因子-1（IGF-1），角质细胞生长因子（KGF），和白介素-6（IL-6）［12，13］等。

已有研究表明AR可不依赖雄激素与蛋白激酶信号［14，15］和受体酪氨酸激酶信号（RTK）［16］相互作用。

Craft等［17］研究表明Her2/neu在雄激素缺乏的状态下能过度表达，并且在AIPC细胞中能激活AR，而这种激活不能被氟他胺阻断，提示由Her2/neu酪氨酸激酶激活所激发的信号能提高AR的反式激活功能。

同样，Signoretti等［18］发现雄激素依赖性PCa向雄激素非依赖性转变时，Her2/neu表达提高。

另外，AR的复因子和共激活因子的变化也能影响AR的功能，这一点已经在体外PCa的研究中得到证明［19，20］。

Hellawell等［21］应用胰岛素样生长因子受体-1（IGF-1R）反义寡核苷酸或反义RNA转染人AIPC细胞株DU145，并应用顺铂、米托蒽醌（mito某antrone）、紫杉醇（paclita某el）处理后培养表明能显著抑制IGF-1R蛋白表达水平，提高细胞对化疗药物的敏感性，进一步表明下调IGF-1R能提高药物诱导的细胞凋亡。

这些研究表明信号传导系统在AIPC的发生过程中起着重要的作用，通过阻断这些信号的传导而抑制AR的活化，能够起到治疗的疗效。

1.2.2受体酪氨酸激酶（RTK）信号RTK包括许多生长因子受体（GFR）:EGF受体、PDGF受体、VEGF受体、FGF受体等。

一般细胞外信号（GF）与靶细胞膜上相应RTK结合，激活膜内相应的酪氨酸激酶（TK）进入细胞内，再通过胞浆第二信号传导分子间的相互作用传至核，调控细胞增殖、转化及其它细胞反应，维持细胞正常的生态平衡。

雄激素非依赖性前列腺癌耐药转化过程中异常甲基化基因的鉴定吴先华;李丽民;吴启旺;齐雪芬;洪巧珍【摘要】目的探讨DNA甲基化在雄激素非依赖性前列腺癌耐药转变过程中的作用.方法以雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞为对照组,雄激素非依赖性前列腺癌细胞LNCaP-AI为实验组,采用Illumina DNA甲基化芯片检测两组细胞基因组DNA甲基化水平,并对甲基化芯片数据进行生物信息学分析;实时荧光定量RT-PCR 检测前列腺特异抗原PSA mRNA的相对表达量.结果 LNCaP细胞相比,发现LNCaP-AI细胞共有2619个基因甲基化水平发生改变,其中758个基因发生高甲基化,占差异基因的28.9％,1860个基因表现为低甲基化,占差异基因的71.1％,这些差异甲基化基因涉及Notch信号通路和胰岛素样生长因子1信号通路.LNCaP-AI细胞PSA基因甲基化水平上升了3.67倍,其PSA mRNA表达水平下调了6.5倍.结论 DNA甲基化参与了前列腺癌雄激素非依赖性转变的过程,可能是导致前列腺癌耐药的诱因之一.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2016(045)004【总页数】5页(P65-69)【关键词】DNA甲基化;前列腺癌;LNCaP细胞;前列腺特异抗原【作者】吴先华;李丽民;吴启旺;齐雪芬;洪巧珍【作者单位】324000 衢州市柯城区人民医院检验科;324000 衢州市人民医院检验科;324000 衢州市柯城区人民医院检验科;324000 衢州市柯城区人民医院检验科;324000 衢州市柯城区人民医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R73前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的肿瘤之一，在西方国家其发生率在男性恶性肿瘤中占第2位，仅次于肺癌[1]。

雄激素剥夺疗法是目前临床上常用的治疗方法，然而经过12～16个月治疗后，雄激素敏感的前列腺癌会发展为雄激素非依赖性的前列腺癌，极易发生骨转移，治疗非常棘手，病死率极高，已成为临床治疗前列腺癌的一大难题，目前对于其耐药转变机制尚不清楚。

血管生长素的差异表达对鉴别前列腺癌雄激素依赖性和非依赖性的临床意义的研究田河;南锡浩;于峰;白吉祥;邸彦橙;郭振海;吴影【期刊名称】《中国性科学》【年(卷),期】2016(0)4【摘要】目的:研究雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌中血管生长素(ANG)的差异性表达的临床意义,以了解雄激素非依赖性前列腺癌的发病机制.方法:研究时间为2013年7月至2015年7月,采用体外培养的方式分别培养雄激素依赖性(LNCaP 细胞)和非依赖性(PC-3细胞)前列腺癌细胞株,并与正常健康人群进行对比;分别在细胞和组织水平上对ANG水平和表达情况进行分析归纳.结果:前列腺癌患者ANG 阳性表达率显著高于正常健康人群(P＜0.05);雄激素依赖性前列腺癌患者各分期中ANG水平明显低于非依赖性患者,P＜0.05,统计学具有显著差异意义.结论:ANG在雄激素依赖性前列腺癌向非依赖性前列腺癌转化中具有主导作用,ANG可能成为肿瘤的标记物.【总页数】3页(P5-7)【作者】田河;南锡浩;于峰;白吉祥;邸彦橙;郭振海;吴影【作者单位】牡丹江医学院红旗医院泌尿外科,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院红旗医院泌尿外科,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院红旗医院泌尿外科,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院红旗医院泌尿外科,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院红旗医院泌尿外科,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院红旗医院泌尿外科,黑龙江牡丹江157011;牡丹江医学院红旗医院泌尿外科,黑龙江牡丹江157011【正文语种】中文【中图分类】R737.25【相关文献】1.重甲基 SILAC 技术分析雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞组蛋白 H3甲基化的差异 [J], 王启林;李瑞乾;金从国;赵斌;张国颖;白宇;雷永虹2.类固醇受体辅活化子-1和核受体辅阻遏子在雄激素非依赖性前列腺癌的表达及临床意义 [J], 甘道举;江军;陈善勤;赖建平;孙广运;肖华亮;靳风烁3.雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌差异膜抗原的筛选 [J], 张晓波;唐正严;齐琳;陈合群;罗启占4.雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化 [J], 吕涛;田斌群;郑新民;李世文5.核受体辅阻遏子在雄激素非依赖性前列腺癌中的表达及临床意义 [J], 甘道举;江军;王洛夫;张尧;兰卫华;向德兵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

雄激素非依赖性前列腺癌发生机制的研究进展王公臣【摘要】在我国,前列腺癌的发病率和病死率逐年上升.早期前列腺癌为雄激素依赖性前列腺癌(ADPC),且大多数前列腺癌患者起初对内分泌治疗有效,但经过14 ～30个月治疗后,ADPC逐渐变为对内分泌治疗无效的雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC).AIPC的形成机制非常复杂,目前尚未阐明,大体涉及肿瘤的异质性、雄激素受体变异、分泌环路形成、基因突变以及信号转导通路的改变和前列腺癌肿瘤干细胞等.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2016(022)014【总页数】5页(P2791-2795)【关键词】雄激素非依赖性前列腺癌;肿瘤异质性;雄激素受体变异;自分泌/旁分泌环形【作者】王公臣【作者单位】哈尔滨医科大学附属第五医院泌尿外科,黑龙江大庆163319【正文语种】中文【中图分类】R737.2前列腺癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤，近年，其在国内的发病率不断增加[1]。

对雄激素具有依赖性的前列腺癌称为雄激素依赖性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer，ADPC)。

手术治疗是早期前列腺癌的主要治疗方式，而晚期前列腺癌则选择内分泌治疗。

但经过1.5～2年的治疗后，部分前列腺癌患者病情加剧，癌组织逐渐对激素不敏感，发展为雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independence prostate cancer，AIPC)[2]。

目前，AIPC在各个水平上的发生机制尚未研究清楚，现就AIPC发生机制的研究进展进行综述。

80%的AIPC发生AR基因复制增加，约30%的AR基因高水平扩增[16]。

Haapala等[17]发现，在123例 AIPC患者中约有1/3人群出现AR数量增高，且AR数量增高患者癌细胞增殖率(19.8%)明显高于AR数量未增高的患者(13.0%)，可能是因为AR基因的扩增使得AR的数量以及对雄激素的敏感性不断增加，表明AR基因扩增是前列腺癌术后复发的重要机制之一。

雄激素受体在雄激素非依赖性前列腺癌的表达甘道举;江军;陈善勤;赖建平;王学华;孙广运;牟江洪【期刊名称】《临床泌尿外科杂志》【年(卷),期】2006(21)4【摘要】目的探讨雄激素受体(AR)在国人雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)的表达及其临床意义。

方法采用免疫组化两步法,检测AR在15例AIPC和20例雄激素依赖性前列腺癌(ADPC)组织标本的表达水平。

结果1例AIPC无AR表达,其余14例AIPC及全部ADPC均有AR高表达,AIPC染色的光密值为0.31±0.04较ADPC0.28±0.03升高。

结论大多数国人AIPC均高表达AR,AR的异常表达可能在前列腺癌的进展中发挥重要的作用。

【总页数】3页(P279-281)【关键词】前列腺肿瘤;雄激素受体;免疫组化【作者】甘道举;江军;陈善勤;赖建平;王学华;孙广运;牟江洪【作者单位】第三军医大学大坪医院泌尿外科;宜宾市第一人民医院泌尿外科;第三军医大学大坪医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R737.25【相关文献】1.雄激素非依赖性前列腺癌和雄激素受体的研究进展 [J], 方晓亮;康健;齐隽2.类固醇受体辅活化子-1和核受体辅阻遏子在雄激素非依赖性前列腺癌的表达及临床意义 [J], 甘道举;江军;陈善勤;赖建平;孙广运;肖华亮;靳风烁3.雄激素受体负向调节雄激素非依赖性前列腺癌细胞FN1和ZNF438基因表达的研究 [J], 俞攀;尹彬彬;刘春华;程玥;刘伟伟;段秀枝;廖昭平;陈玉华;王旭楚4.雄激素受体共调节因子与雄激素非依赖性前列腺癌 [J], 赵亚力;韩为东5.雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化 [J], 吕涛;田斌群;郑新民;李世文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。